一種高效的萊茵衣藻電轉(zhuǎn)化方法

劉 佳，何炫程，項(xiàng) 晨，馬伯寧，韋航濤，楊明峰

(北京農(nóng)學(xué)院 生物科學(xué)與工程學(xué)院，農(nóng)業(yè)部華北都市農(nóng)業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102206)

目前藻類的研究正在日益深入，其藥性價(jià)值與保健功效正成為人們研究的熱點(diǎn)[4]。與此同時(shí)藻類的轉(zhuǎn)基因技術(shù)也取得了較大的進(jìn)展，已經(jīng)出現(xiàn)了越來越多關(guān)于轉(zhuǎn)基因藻類的成功案例，如秦松[5]等將GUS基因?qū)牒衷寮?xì)胞，呂玉民[6]等用基因槍法將bar基因?qū)攵攀消}藻其中，其中將基因?qū)朐嗽孱惐容^容易成功，而真核藻類的則相對(duì)較少。關(guān)于藻類轉(zhuǎn)化的方法目前有基因槍法、玻璃珠法、電轉(zhuǎn)化法等，而電轉(zhuǎn)化法由于簡(jiǎn)單快捷、費(fèi)用低廉等特點(diǎn)，具有明顯的優(yōu)勢(shì)[7]。在藻類轉(zhuǎn)化方法研究中，常用到的報(bào)告基因有綠色熒光蛋白基因、熒光素酶基因、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因、硝酸還原酶基因和葡萄糖苷酸酶基因等，此類方法可鑒之處是結(jié)果可用肉眼觀測(cè)，具有操作方便且基因易于檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，因此在藻類的轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)中應(yīng)用比較廣泛。耿秋貴[8]強(qiáng)調(diào)若想讓外源基因?qū)刖托枰邢鄬?duì)較強(qiáng)的場(chǎng)強(qiáng)和較長的電擊時(shí)間，但這會(huì)使細(xì)胞死亡率大大增加，最終影響到轉(zhuǎn)化率。

藻類高效的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)必須滿足[9]轉(zhuǎn)化率必須較高、導(dǎo)入的基因必須靈敏表達(dá)、轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞可以正常培養(yǎng)。盡管萊茵衣藻是目前研究轉(zhuǎn)基因技術(shù)的一種良好材料，但仍存在轉(zhuǎn)化率不高的問題。為了尋求萊茵衣藻較好的轉(zhuǎn)化條件，研究以萊茵衣藻野生型WT和無細(xì)胞壁突變體CC425為材料，利用電擊法進(jìn)行轉(zhuǎn)化，探索較為合適的抗生素篩選濃度、電擊場(chǎng)強(qiáng)和電擊時(shí)間，以提高衣藻的電擊轉(zhuǎn)化效率，為萊茵衣藻的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供技術(shù)支持。……