防風多糖對過敏性鼻炎大鼠血清及鼻腔灌洗液細胞因子的影響

馬志躍（通訊作者）李彬 馮勇 余曉旭 樊建剛 何剛

（四川省人民醫學科學院·四川省人民醫院耳鼻咽喉頭頸外科 四川 成都 610072）

過敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）屬于鼻炎慢性病，發病過程復雜，難治愈，發病率呈現逐年上升趨勢，嚴重者可影響學習、工作、睡眠、發聲等[1]。防風多糖具有較好的抗過敏、降低外界刺激干擾的作用，對抗過敏抑制率達到55.51%，且沒有肌膚刺激作用[2]。為進一步探討防風多糖對AR的作用效果和機制，本研究建立大鼠AR模型，探討防風多糖對AR模型大鼠的癥狀改善及其免疫作用機制。

1.材料與方法

1.1 實驗動物與分組

健康SD大鼠32只，雌雄各半，體質量（200±10）g，購于成都達碩實驗動物有限公司，使用許可證號：SYXK（川）2014-189。試驗動物隨機分為空白組（A）、模型組（B）、防風多糖低劑量組（C）、防風多糖高劑量組（D）。每組8只，清潔級實驗室飼養。

1.2 過敏性鼻炎大鼠模型復制

參照常用卵清蛋白（OVA）復制AR模型方法[3]：將OVA 0.4mg、鋁佐劑40mg及生理鹽水1mL混勻，B、C、D組大鼠腹腔注射1mL，隔日1次注射致敏，連續7次，A組注射等體積生理鹽水。第15～17天、第18～20天、第21～28天分別以0.25%、2%、5%的OVA溶液雙側滴鼻激發，每次100μL/鼻孔，A組大鼠以等體積生理鹽水滴鼻激發，1次/d。

1.3 藥物干預

每組動物于致敏第15d后開始灌胃給藥，防風多糖高劑量組（600mg/kg）、低劑量組（300mg/kg），空白組與模型組給予等量0.9%生理鹽水，1次/d，連續14d。

1.4 樣本采集

末次給藥1h后，戊巴比妥鈉（60mg/kg）腹腔注射麻醉，腹主動脈取血，離心取血清；剝離雙側鼻中隔黏膜，4%多聚甲醛固定；鼻腔灌洗液采集參考Kim[4]文獻方法。

1.5 檢測項目

將固定的鼻黏膜組織按常規方法制備石蠟切片，HE染色，鏡檢觀察病理組織學變化；ELISA試劑盒（上海茁彩）檢測血清IgE、IL-4、INF-γ及鼻腔灌洗液中IgE、IL-4、組胺（HA）含量。

1.6 統計學方法

數據采用SPSS20.0統計軟件進行分析，計數資料采用率（%）表示，進行χ2檢驗，計量資料采用（±s）表示，進行t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2.結果

2.1 病理組織觀察

空白組鼻黏膜無炎癥反應，模型組黏膜上皮壞死，鼻黏膜水腫、充血，炎癥細胞浸潤，防風多糖低劑量組鼻黏膜有少量炎癥細胞浸潤，防風多糖高劑量組可見輕度水腫，炎癥細胞顯著減少，圖。

圖1 大鼠鼻黏膜病理組織學變化

2.2 血清IgE、IL-4、INF-γ含量

造模成功后，血清IgE、IL-4含量較空白組顯著升高，INF-γ含量顯著降低（P＜0.01）。防風多糖低、高劑量組較模型組均可顯著降低IgE、IL-4含量，升高INF-γ含量（P＜0.05），高劑量組較低劑量組IgE、IL-4含量降低顯著，INF-γ含量升高顯著（P＜0.01），表1。

表1 各組大鼠血清IgE、IL-4、INF-γ含量

2.2 鼻腔灌洗液中IgE、組胺、IL-4含量

造模成功后，模型組鼻腔灌洗液IgE、IL-4、HA含量較空白組顯著升高（P＜0.01）。防風多糖低、高劑量組較模型組可顯著降低IgE、IL-4、HA含量（P＜0.01），高劑量組較低劑量組降低更顯著，表2。

表2 各組大鼠鼻腔灌洗液中IgE、組胺、IL-4含量

3.討論

AR是變應原再次刺激使機體產生一系列生化反應，導致鼻黏膜水腫、噴嚏、鼻癢等癥狀[1]。本試驗采用防風多糖治療大鼠AR，病理組織考察結果表明，模型組黏膜上皮壞死、鼻黏膜水腫、充血，防風多糖高劑量組輕度水腫，炎癥細胞顯著減少，顯著減輕AR病理組織損傷。

免疫球蛋白（IgE）是引起AR的主要抗體，變應原刺激后機體產生IgE抗體可聯合細胞表面的IgE受體使機體致敏，再次接觸相同變應原時會誘發炎性介質釋放從而引起過敏反應[5]。本實驗結果顯示模型組較空白組血清IgE含量顯著升高，防風多糖高、低劑量均可顯著降低血清IgE含量（P＜0.01）。INF-γ、IL-4分別是Th1、Th2的重要細胞因子，在鼻炎發病中起核心作用，當Th1反應偏向Th2反應，IL-4分泌增加，INF-γ分泌減少[6]。本實驗結果顯示模型組較空白組血清IL-4含量顯著増加，INF-γ顯著降低（P＜0.01），防風多糖高劑量組較模型組顯著降低IL-4含量，增加INF-γ含量（P＜0.01），說明防風多糖促進Th1/Th2細胞平衡。

鼻腔分泌物是由鼻腔中腺體分泌物、淚腺分泌物及血漿外滲液組成。而AR鼻腔局部細胞因子的變化具有特異性[7]。組胺（HA）是鼻過敏速發相的最重要的介質，可導致鼻黏膜水腫，鼻呼吸阻力増加，分泌物增多。本實驗結果顯示防風多糖高劑量組可顯著降低HA含量（P＜0.01），說明防風多糖有抗HA效應。本試驗鼻腔灌洗液IgE、IL-4含量變化與血清中結果趨勢一致，說明防風多糖可有效地抑制AR大鼠外周血及鼻腔局部炎性介質，進而控制AR發展。

綜上所述，防風多糖可通過有效抑制炎性介質，平衡細胞因子，緩解炎癥來治療過敏性鼻炎。