Snail蛋白和細胞外基質蛋白1在原發性肝癌中的表達及與其臨床特征和預后的相關性

楊長俊 高興軍

HCC是臨床中常見的惡性腫瘤之一[1]。目前研究認為，在眾多的腫瘤增生與侵襲的分子通路中，EMT通路在腫瘤的發生、進展中存在關鍵作用，Snail蛋白是EMT通路中的關鍵蛋白之一，而較多文獻提示ECM1在多種惡性上皮腫瘤中出現高表達，可能與促癌細胞繁殖、轉移有很大相關性[2-3]。本研究收集了71例HCC患者的各項臨床資料，旨在探討Snail蛋白和ECM1在HCC中的表達及與其臨床特征和預后的相關性，現報道如下。

資料與方法

一、一般資料

選取2012年1月至2013年3月我院收治的71例HCC患者作為研究對象。納入標準：(1)所有患者均符合診斷符合2015年中國抗癌協會肝癌專業委員會制定的臨床診斷標準[4]；(2)所有患者均經手術治療且術后病理學檢查均確診；(3)本研究經醫院倫理委員會批準；(4)所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書參與本次研究。排除標準：(1)未進行根治性切除術治療者或者手術前已行放化療者；(2)出現遠處轉移、合并肝性腦病者；(3)除HCC外存在其他惡性腫瘤者；(4)臨床及隨訪資料不完整或缺乏準確性者。71例HCC中，男性50例，女性21例，年齡27～72歲，平均年齡(52.96±6.15)歲；Child Pugh 分級：A級39例，B級32例。

二、方法

收集71例HCC患者的各項臨床資料，手術過程中收集癌組織標本進行甲醛固定、石蠟包埋，同時采集71份癌旁正常組織作為參照，比較兩者間Snail蛋白和ECM1的表達水平，分析Snail蛋白和ECM1表達與HCC臨床病理特征的關系。對71例HCC進行為期5年的隨訪，隨訪方式包括電話隨訪、短信隨訪、回院復查等，比較不同表達水平患者5年生存率，采用Logistic多因素回歸分析影響HCC患者預后死亡的危險因素。

三、檢測與結果判定

兔抗人ECM1多克隆抗體購自美國Proteintech生物科技有限公司，兔抗人 Snail多克隆抗體來源于福州邁新生物技術開發有限公司。細胞質中出現明顯棕黃色顆粒者為陽性細胞。隨機選取10個高倍(400)視野，每個視野計數100個細胞，共計1 000個細胞。統計ECM1陽性表達水平，陽性判斷：將陽性染色細胞數<10%定義為陰性，≥10%定義為陽性。Snail以細胞核或細胞質出現棕黃色染色為陽性細胞，PBS代替一抗為陰性對照，嚴格按試劑盒說明書、技術規范手冊進行實驗操作。

四、 統計方法

結 果

一、兩種組織標本中Snail蛋白和ECM1表達情況

71例患者癌組織Snail蛋白陽性47例、表達率為66.19%，明顯高于癌旁組織26例(36.61%)，具有統計學意義(χ2=12.432，P<0.05)；ECM1在癌組織陽性56例(78.87%)，明顯高于癌旁組織12例(χ2=54.633，16.90%)，具有統計學意義(P<0.05)。

二、 Snail蛋白和ECM1表達與肝癌患者不同臨床特征的關系

Snail蛋白在不同年齡、性別、腫瘤直徑中的表達情況無明顯差異(P>0.05)，ECM1在不同年齡、性別、腫瘤直徑、肝硬化、腫瘤直徑中的表達情況無明顯差異(P>0.05)；Snail蛋白在病理分期、微血管侵犯、肝硬化中其表達情況存在明顯差異(P<0.05)；ECM1在病理分期、微血管侵犯中其表達情況存在明顯差異(P<0.05)，見表1。

三、 71例HCC患者預后情況

隨訪5年結束后，Snail蛋白表達陽性、表達陰性者5年總生存率分別為21.27%(10/47)、37.50%(9/24)；ECM1表達陽性、表達陰性者5年總生存率分別為19.64%(11/56)、33.33%(5/15)，不同Snail蛋白、ECM1表達水平HCC患者5年總生存率比較差異具有統計學意義(P<0.001)。

經非條件多因素Logistic回歸模型結果顯示：病理分期(Ⅲ期)、腫瘤直徑(>5cm)、微血管侵犯(有)、 Snail蛋白(陽性)、ECM1(陽性)均為影響HCC患者預后的獨立危險因素(P<0.001)，見表2。

表1 Snail蛋白和ECM1表達與肝癌患者不同臨床特征的關系

表2 影響HCC患者預后的多因素分析

討 論

信號分子轉錄因子在腫瘤發生發展過程中起到了主要作用，間質細胞轉分化是影響人體心臟、外周神經系統及生理過程傷口愈合的主要機制之一，當人體出現病理改變后，間質細胞轉分化機制可使引起一系列分子和細胞事件，其中包括影響轉錄因子Snail蛋白[5]。本組研究中發現肝癌組織Snail蛋白陽性表達率明顯高于癌旁組織，與ECM1同為影響HCC患者預后的危險因素，與既往文獻報道相似，事實上Snail蛋白可促進上皮細胞向間質細胞的轉化，對于其通路的特征性，Snail蛋白可能作為腫瘤逆轉的有效靶向[6]。

ECM1首次的出現是在1994年，自老鼠成骨機制細胞系MN7中分離出來的一種分泌性糖蛋白，參與多類生物學過程，其中包括促細胞增殖機制，同時在各類惡性腫瘤中呈現高表達[7]。既往多類動物研究實驗[8]對肝癌細胞和組織分析后發現，無論是在細胞或組織中ECM1在肝癌的蛋白、基因表達水平都明顯高于其他正常組織，與本組研究結果相似，同時，本組研究認為ECM1高表達的患者預后較差，相對于低表達的肝癌患者，更易病情惡化并出現不良預后。

綜上所述，Snail蛋白和ECM1在HCC中表達陽性率高于癌旁組織，Snail蛋白和ECM1表達陽性者預后較差。本組研究存在不足之處為研究樣本數量較低，研究結論仍然需要進一步探討。