淺析獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力

文│鄭教雀（福建省寧德市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

近幾年的“新全球化”加劇了國(guó)內(nèi)外動(dòng)物疫情的嚴(yán)峻形勢(shì)，動(dòng)物疫病防控部門(mén)面臨著各種新舊動(dòng)物疫病的挑戰(zhàn)。獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室作為獸醫(yī)工作的基礎(chǔ)，是動(dòng)物疫病防控機(jī)構(gòu)的根基，承擔(dān)著動(dòng)物疫病診斷、檢測(cè)，動(dòng)物免疫狀況監(jiān)測(cè)等工作，為動(dòng)物疫病防控部門(mén)提供技術(shù)保障，因此加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)非常重要。獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)工作在加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)中有著重要作用，它不僅能加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制、提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力，同時(shí)還能提高專業(yè)技術(shù)人員的業(yè)務(wù)水平，進(jìn)而提高實(shí)驗(yàn)室的綜合能力。

目前，我國(guó)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室采用的比對(duì)方案多為：將若干個(gè)已知結(jié)果或數(shù)值（真實(shí)值）的樣品作為盲樣分發(fā)給各實(shí)驗(yàn)室，之后收集各實(shí)驗(yàn)室的比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果與真實(shí)值比較，通過(guò)結(jié)果符合數(shù)量與比對(duì)總數(shù)，計(jì)算出符合率。最后以符合率評(píng)價(jià)各參與比對(duì)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力。福建省寧德市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心組織的比對(duì)試驗(yàn)所采用的比對(duì)方案與以往相比有所不同，本文將此次比對(duì)的其中一個(gè)項(xiàng)目做如下分析，以供同行參考。

一、比對(duì)范圍及項(xiàng)目

本次實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)試驗(yàn)共8個(gè)縣級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室參與；用ELISA檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體。

二、材料與方法

1.儀器與耗材。試驗(yàn)所需要的儀器及設(shè)備由參與比對(duì)的實(shí)驗(yàn)室各自準(zhǔn)備，耗材（含緩沖液）由組織方統(tǒng)一準(zhǔn)備。

2.試劑。豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測(cè)試劑盒（PRRS X3 Ab）由北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司提供。

3.樣品。

（1）制備。樣品由北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司制備、分裝、編號(hào)。做到各盲樣的血清量相同、保證可進(jìn)行重復(fù)性檢測(cè)，盲樣外觀顏色無(wú)明顯差異，并標(biāo)定各樣品的參考值。為保證比對(duì)的科學(xué)性，組織方對(duì)比對(duì)樣品再次統(tǒng)一編號(hào)后，作為盲樣發(fā)放使用。

表1 口蹄疫O型抗體ELISA比對(duì)試驗(yàn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

（2）保存與發(fā)放。在比對(duì)試驗(yàn)開(kāi)始前，盲樣由組織方密閉、低溫保存。待各參比實(shí)驗(yàn)室人員、儀器設(shè)備到位后，統(tǒng)一發(fā)放。

4.試驗(yàn)方法。比對(duì)試驗(yàn)所采用的方法為依據(jù)《豬繁殖與呼吸綜合診斷方法》（GB/T 18090-2008），并參照試劑盒使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

依據(jù)說(shuō)明書(shū)，要求各參比實(shí)驗(yàn)室，對(duì)提供的8份盲樣進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)，設(shè)置內(nèi)部質(zhì)控品4份，同時(shí)設(shè)立陰、陽(yáng)性對(duì)照各2份；具體試驗(yàn)方法按照試劑盒使用說(shuō)明書(shū)操作。完成試驗(yàn)后，立即出具、提交正式檢測(cè)報(bào)告。

5.評(píng)判（分）標(biāo)準(zhǔn)。

（1）試驗(yàn)結(jié)果。樣品檢測(cè)值：查看盲樣豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測(cè)值是否在給定的參考值區(qū)間內(nèi)，落在參考值區(qū)間內(nèi)，判為結(jié)果準(zhǔn)確并得分；檢測(cè)值落在參考值區(qū)間外，則判為結(jié)果存在較大偏差，不得分。

樣本重復(fù)性：根據(jù)3次重復(fù)試驗(yàn)檢測(cè)值，計(jì)算出變異系數(shù)，查看變異系數(shù)的大小。如果變異系數(shù)≤10%，則判定為樣本重復(fù)性好，得分；如果變異系數(shù)＞10%，則判定為樣本重復(fù)性較差，不得分。

內(nèi)部質(zhì)控品：查看4個(gè)質(zhì)控樣品檢測(cè)值是否滿足限定區(qū)間。如果滿足限定區(qū)間，得分；否則不得分。

陰陽(yáng)性對(duì)照：陰陽(yáng)性對(duì)照OD值在確保試驗(yàn)成立后，再驗(yàn)證其是否滿足參考標(biāo)準(zhǔn)要求。如果滿足要求，得分；否則不得分。

（2）檢測(cè)報(bào)告：查看各參比實(shí)驗(yàn)室所出具的正式檢測(cè)報(bào)告。報(bào)告中每出現(xiàn)1個(gè)錯(cuò)誤，扣除一定分?jǐn)?shù)。比對(duì)試驗(yàn)具體分?jǐn)?shù)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，見(jiàn)表1。

三、結(jié)果分析

1.總體結(jié)果。參與此次比對(duì)的8個(gè)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室都能在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè)并提交正式報(bào)告。根據(jù)比對(duì)結(jié)果評(píng)判（分）標(biāo)準(zhǔn)，7個(gè)實(shí)驗(yàn)室的所有OD值在區(qū)間范圍內(nèi)，正確率為87.5%；6個(gè)實(shí)驗(yàn)室的所有變異系數(shù)（CV%）都小于10%，比例為75%。這說(shuō)明大部分獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室具備相應(yīng)的檢測(cè)能力，且技術(shù)操作穩(wěn)定、重復(fù)性好、水平較高。

2.具體結(jié)果。8個(gè)實(shí)驗(yàn)室共檢測(cè)樣品192份，獲得192個(gè)OD值，其中189個(gè)OD值處于給定的參考區(qū)間范圍內(nèi)，合格率達(dá)98.4%；樣本重復(fù)性試驗(yàn)，共計(jì)獲得64個(gè)變異系數(shù)（CV%），其中61個(gè)CV%值小于10%，重復(fù)性良好率達(dá)95.3%；陽(yáng)性對(duì)照均合格。此外，3個(gè)實(shí)驗(yàn)室的4個(gè)質(zhì)控樣品檢測(cè)值不在限定區(qū)間內(nèi)、3個(gè)實(shí)驗(yàn)室的3個(gè)陰性對(duì)照未達(dá)參考標(biāo)準(zhǔn)。

3.檢測(cè)報(bào)告。收到檢測(cè)報(bào)告8份，每份報(bào)告均存在或大或小的問(wèn)題。主要問(wèn)題有：簽、蓋章不夠規(guī)范、報(bào)告內(nèi)容存在對(duì)應(yīng)英文翻譯錯(cuò)誤、診斷試劑未寫(xiě)明具體廠家、未實(shí)行2級(jí)簽字等，具體得分結(jié)果見(jiàn)表2。

四、討論

血清學(xué)檢測(cè)是目前基層獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室的基本檢測(cè)手段，該次比對(duì)的豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測(cè)項(xiàng)目采用了ELISA檢測(cè)方法，能客觀的反映基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)水平；且此次比對(duì)試驗(yàn)采用統(tǒng)一的試劑、樣品及標(biāo)準(zhǔn)，并現(xiàn)場(chǎng)立即收回檢測(cè)結(jié)果，加以統(tǒng)計(jì)分析，更能真實(shí)地反映出各實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力水平。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，7個(gè)實(shí)驗(yàn)室的合格率為100%，1個(gè)實(shí)驗(yàn)室的合格率為87.5%，說(shuō)明寧德市獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的實(shí)際操作技能較強(qiáng)，整體檢測(cè)能力較強(qiáng)。但通過(guò)此次比對(duì)試驗(yàn)的評(píng)比，也發(fā)現(xiàn)了各實(shí)驗(yàn)室存在的一些問(wèn)題。

1.未嚴(yán)格按照規(guī)程操作。D實(shí)驗(yàn)室在收到樣品后，未及時(shí)對(duì)樣品進(jìn)行編號(hào)登記，使得在后續(xù)試驗(yàn)過(guò)程中將樣品弄混，導(dǎo)致其檢測(cè)不合格。

2.檢測(cè)報(bào)告不規(guī)范。各實(shí)驗(yàn)室出具的檢測(cè)報(bào)告，存在格式不規(guī)范，內(nèi)容存在瑕疵，表述不準(zhǔn)確、審核程序不夠健全等問(wèn)題。

3.實(shí)驗(yàn)記錄不規(guī)范。個(gè)別實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)報(bào)告所附的原始實(shí)驗(yàn)記錄信息不完整，存在未使用正規(guī)試驗(yàn)表格，試驗(yàn)記錄涂改、未實(shí)行二級(jí)簽字等情況。

五、小結(jié)

檢測(cè)能力比對(duì)工作具有極其重要的意義，因?yàn)闄z測(cè)能力不僅是動(dòng)物防控部門(mén)建設(shè)的基礎(chǔ)，更是獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生存之基，而且出具的檢測(cè)報(bào)告是政府相關(guān)部門(mén)制定政策、執(zhí)行決策的依據(jù)。各動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)要不斷提高檢測(cè)人員的技術(shù)水平，使得實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)更加科學(xué)、準(zhǔn)確、規(guī)范，為重大動(dòng)物疫病防控和食品衛(wèi)生安全提供有力的技術(shù)支持。

表2 口蹄疫O型抗體ELISA比對(duì)試驗(yàn)得分統(tǒng)計(jì)表