免疫膠體金法快速檢測水產(chǎn)品中喹諾酮類藥

摘要：目的：探究免疫膠體金法在快速檢測水產(chǎn)品中奎諾酮類藥物的應(yīng)用效果。方法：本文使用實(shí)驗(yàn)室自制的產(chǎn)QNAs抗體雜交瘤細(xì)胞株，水產(chǎn)取養(yǎng)殖場中的蝦、魚及憋等水產(chǎn)品共100g，研制出靈敏度較高的免疫膠體金試劑條，對樣品做好預(yù)處理，采用免疫膠體金檢測方法。結(jié)果：對奎諾酮類藥物進(jìn)行測量，經(jīng)過預(yù)處理后，檢測結(jié)果均為陽性，在試劑板中可以看出，中間位置處的顏色較深，說明經(jīng)過有機(jī)試劑凈化或提取后結(jié)果更加干凈和清晰，檢測靈敏度相對較高。結(jié)論：免疫膠體金法能夠快速的檢測出水產(chǎn)品中的奎諾酮類藥物，應(yīng)在水產(chǎn)品藥物殘留檢測中大力推廣使用。

關(guān)鍵詞：免疫膠體金法;奎諾酮;水產(chǎn)品

近年來，我國的水產(chǎn)事業(yè)發(fā)展迅速，水產(chǎn)中的藥物殘留對人們的身體健康造成極大威脅，加大對藥物殘留進(jìn)行研究具有必要性。奎諾酮作為一類抗菌藥，在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中預(yù)防及治療細(xì)菌中被廣泛應(yīng)用。目前，免疫膠體金法被應(yīng)用到藥物殘留篩查中，能夠快速的檢測出水產(chǎn)中奎諾酮類藥物的含量，確保人們的飲食安全。

喹諾酮類是合成抗菌藥物，喹諾酮類抗菌藥物通過阻止促旋酶靶向細(xì)菌DNA而起到殺菌劑的作用。喹諾酮類抗菌藥是合成抗菌藥物，這類抗菌藥物的藥理作用逐漸為人所知。這些藥物在臨床應(yīng)用和適應(yīng)癥治療方面取得了一些進(jìn)展。由于其廣譜，低毒，效果好，給藥方便等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于臨床治療。然而，與此同時(shí)，患者的不良反應(yīng)也有所增加。

1資料及方法

1.1一般資料

本文使用實(shí)驗(yàn)室自制的產(chǎn)QNAs抗體雜交瘤細(xì)胞株，水產(chǎn)取養(yǎng)殖場中的蝦、魚及憋等水產(chǎn)品共100g，使用攪拌機(jī)將其攪碎，將其放在-18℃的溫度下保存。在本次實(shí)驗(yàn)中，所使用的試劑包括超純水、氯金酸、胎牛血清（FBS）、RPMI1640培養(yǎng)基、0.02mol·L-1Tris-HCI緩沖液，奎諾酮類藥物等。所使用的儀器及設(shè)備為二氧化碳培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀、三維噴點(diǎn)平臺、分光光度計(jì)、空氣吹干機(jī)、高效液相色譜儀等。

1.2方法

體外抗體制備：將適量的RPMI1640培養(yǎng)基，加入到QH12雜交瘤細(xì)胞株復(fù)蘇中，將10000g進(jìn)行離心，時(shí)間控制在30min，并慢慢加入0.02mol·L-1的PBS，將其進(jìn)行充分的攪拌，確保能夠完全沉淀。再使用PBS復(fù)溶，測量其吸光值，并對蛋白質(zhì)的濃度進(jìn)行測量，并放在-86℃的溫度下凍存。

對膠體金進(jìn)行研制：對硫酸-重鉻酸鉀洗液進(jìn)行浸泡，浸泡結(jié)束后進(jìn)行清洗，待洗凈后進(jìn)行烘干，以備使用。在250mL的三角瓶內(nèi)壁涂抹2mL1307鍍劑，并將多余的液體倒出，將其放到60℃的溫度下烘干。

膠體金標(biāo)記：使用0.01molL-1的PB緩沖液將凍干抗體制備為0.5mg·L-1的溶液，離心時(shí)間應(yīng)持續(xù)60min，將蛋白聚合物去除掉，使用0.1mol·L-1Tris-HCI將100mL的膠體金的pH值調(diào)節(jié)至8.7。將1mL的膠體金加入到小試管中，對抗體量做好預(yù)標(biāo)記，在裝空白膠體金墊試劑條上滴入2μL錦標(biāo)抗體溶液，對加入5ng·mL-1Cip或PBS后的T線級C線顯色及抑制效果進(jìn)行觀察。使用最佳的抗體量對60mL的膠體金進(jìn)行標(biāo)記，將15000g的離心時(shí)間控制在30min，對底部位置紫紅色的金抗體進(jìn)行保留，將其保存在4℃的溫度下。

2結(jié)果

體外抗體的制備，對QH12雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行體外培養(yǎng)后，獲取4.4g的純化抗體。掃描膠體金紫外-可見光200-800nm時(shí)，掃描的范圍應(yīng)控制在紫外-可見光波長為200-800nm范圍內(nèi)，應(yīng)確保吸收峰與吸收曲線的高度一致性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，膠體金的重復(fù)波形具有一致性。膠體金標(biāo)記抗體實(shí)驗(yàn)，當(dāng)抗體的濃度為0.5-2.0μg·mL-1時(shí)，Cip對T線上的抗體反應(yīng)及抗原展現(xiàn)出了較強(qiáng)的抑制性作用;當(dāng)抗體濃度gt;4.0μg·mL-1時(shí)，未產(chǎn)生抑制作用;當(dāng)抗體濃度lt;1.0μg·mL-1時(shí)，顯色的顏色相對偏淺。膠體金標(biāo)記抗體顯色情況見表1。吹干溶液，對奎諾酮類藥物進(jìn)行測量，經(jīng)過預(yù)處理后，檢測結(jié)果均為陽性，在試劑板中可以看出，中間位置處的顏色較深，說明經(jīng)過有機(jī)試劑凈化或提取后結(jié)果更加干凈和清晰，檢測靈敏度相對較高。

3討論

單克隆抗體的獲取主要是通過對雜交瘤細(xì)胞采用體外制備方法來實(shí)現(xiàn)，來完成對水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物的檢測，目前主要時(shí)使用免疫膠體金試劑盒。近年來，免疫膠體金法被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)品喹諾酮類藥物檢測中，該種檢測方法具有成本低、操作便利、檢測速度快等優(yōu)勢。免疫膠體金法在檢測過程中，會與多種奎諾酮藥物發(fā)生反應(yīng)，與其他類型的藥物不會發(fā)生反應(yīng)，因此在檢測時(shí)，不受其他藥物殘留的干擾，使奎諾酮藥物的篩查更加快速。

喹諾酮是一種合成抗菌藥物。其作用機(jī)制是通過抑制細(xì)菌DNA解旋酶的活性來抑制mRNA和蛋白質(zhì)的合成，使細(xì)菌細(xì)胞延伸到細(xì)絲中并最終演變成液泡。同時(shí)，這些抗菌劑也可以使用外切核酸酶來阻斷DNA復(fù)制過程并實(shí)現(xiàn)DNA降解。與其他抗菌藥物相比，喹諾酮類藥物之間沒有顯著的交叉耐藥性。喹諾酮類抗菌藥物的臨床應(yīng)用得到了廣泛的推廣。目前，喹諾酮類抗菌藥物主要用于治療呼吸道感染，尿路感染，皮膚感染，關(guān)節(jié)感染等，通常用作圍手術(shù)期的預(yù)防藥物。喹諾酮類抗菌藥物對革蘭氏陰性菌和陽性菌有很好的療效。這些抗菌劑的殺菌作用對包括大腸桿菌，志賀氏菌和腸桿菌在內(nèi)的真菌具有良好的殺菌作用。臨床合理應(yīng)用喹諾酮類抗生素不會增加臨床不良反應(yīng)的發(fā)生率，不良反應(yīng)的特征是惡心，腹痛和胃腸道反應(yīng)。患者對上述不良反應(yīng)有一定的耐受性。

綜上所述，免疫膠體金法能夠快速的檢測出水產(chǎn)品中的奎諾酮類藥物，應(yīng)在水產(chǎn)品藥物殘留檢測中大力推廣使用。

參考文獻(xiàn)：

[1]周俊勇.免疫膠體金快速診斷技術(shù)的應(yīng)用[J].今日畜牧獸醫(yī)，2018，34（03）：74.

[2]柳愛春，劉超，張樂，童朝明，李鋒，趙蕓.免疫膠體金法快速檢測水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2018，30（02）：290-297.

[3]寇金華，楊正濤，劉維建，高珺珊，李建華，楊舉，張西臣，宮鵬濤.豬弓形蟲感染免疫膠體金試紙條的制備與初步應(yīng)用[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2018，38（01）：82-87.