無菌藥物生產(chǎn)環(huán)境中微生物的檢測及控制研究

摘要：無菌室是生產(chǎn)無菌藥物的主要場所。有效控制和檢測無菌藥物生產(chǎn)環(huán)境中的微生物含量是確保產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)。本文對無菌室微生物的種類及檢測以及如何對無菌環(huán)境滅菌消毒進(jìn)行了綜述說明。

關(guān)鍵詞：無菌藥物;生產(chǎn)環(huán)境;微生物檢測;研究控制

引言

伴隨醫(yī)藥行業(yè)的迅猛發(fā)展，藥品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)變得越來越嚴(yán)格，新版GMP標(biāo)準(zhǔn)的推出對無菌藥物的生產(chǎn)進(jìn)行了更要級別的要求，GMP內(nèi)容幾乎完全與歐盟GMP標(biāo)準(zhǔn)接軌，不僅對無菌生產(chǎn)潔凈級別提高了要求，同時(shí)對人員管理，生產(chǎn)質(zhì)量管理等多方面進(jìn)行要求。為此，本文主要對無菌室內(nèi)微生物的控制和檢測進(jìn)行描述，為正確維持無菌室的環(huán)境提供參考與借鑒。

1微生物的種類及檢測

按照微生物檢測內(nèi)容可將無菌室微生物分為沉降菌、浮游菌、人員菌。在新版GMP要求下不同級別的潔凈區(qū)域內(nèi)微生物檢測的限度標(biāo)準(zhǔn)如下：

1.1通過培養(yǎng)板中的自然沉降原理（通常使用90mm直徑的硼硅酸鹽玻璃培養(yǎng)皿，俗稱沉淀皿）沉淀細(xì)菌檢測空氣中收集的生物顆粒，經(jīng)過一段時(shí)間后，讓其在可見下繁殖到可見合適的條件對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，并且通過平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)確定清潔環(huán)境中存活微生物的數(shù)量，并評估潔凈室（區(qū)域）的清潔度。（1）取樣方法：將制備的培養(yǎng)皿放在預(yù)定的取樣點(diǎn)，打開培養(yǎng)皿蓋，將培養(yǎng)基表面暴露0.5小時(shí)，然后蓋上培養(yǎng)皿，然后翻轉(zhuǎn)，置32.5℃士2.5℃培養(yǎng)48h，取出檢查。（2）采樣點(diǎn)的布置：工作區(qū)采樣點(diǎn)位置離地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。

1.2浮游細(xì)菌檢測漂浮的細(xì)菌，即懸浮在空氣中的活微生物顆粒。該方法采用計(jì)數(shù)濃縮法，即將懸浮在空氣中的生物顆粒收集在特殊介質(zhì)中，并使其在適當(dāng)?shù)纳L條件下繁殖到可見的菌落中，計(jì)數(shù)一段時(shí)間，從而確定清潔的環(huán)境。每單位體積空氣中的活微生物數(shù)量用于評估潔凈室（區(qū)域）的清潔度。常用的收集儀器有“漂浮細(xì)菌空氣采樣器”。采樣方法及采樣點(diǎn)布置：采樣人員嚴(yán)格按照浮游菌空氣采樣器的操作規(guī)程進(jìn)行采樣。工作區(qū)測點(diǎn)位置離地0.8m～1.5m左右;送風(fēng)口測點(diǎn)位置離開送風(fēng)面30cm左右;可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測點(diǎn)。為防止交叉污染，在不同級別的環(huán)境下建議配備專門的空氣采樣器，并定期用無塵抹布和消毒劑對空氣采樣器表面進(jìn)行擦拭，保證期檢測數(shù)據(jù)真實(shí)可靠;在使用空氣采樣器采集浮游菌時(shí)，采集人員不要在儀器前走動(dòng)，以免影響結(jié)果。安裝培養(yǎng)皿時(shí)手要在側(cè)面，不能放在培養(yǎng)皿的前方。

1.3人員菌的檢測人員菌的檢測主要為無菌室的工作人員進(jìn)行更衣驗(yàn)證及離開無菌室的工作人員進(jìn)行的微生物檢測，即手部及潔凈服的不同部位進(jìn)行取點(diǎn)檢測，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，并由菌落數(shù)量來反映工作人員在正常工作狀態(tài)下所攜帶的微生物數(shù)量。采樣方法及采樣位點(diǎn)：對無菌室工作的人員進(jìn)行更衣驗(yàn)證，取樣位點(diǎn)頭部、眼罩、腰部、手部、肘部、小腿等。手部檢測時(shí)，受測人員用手指輕按培養(yǎng)皿停留5秒鐘（五指平均分布于培養(yǎng)皿區(qū)域），雙手都要取樣;潔凈服的取樣點(diǎn)取樣時(shí)停留時(shí)間同樣要停留5秒鐘，然后押迅速蓋上平皿，送化驗(yàn)室培養(yǎng)。

2無菌環(huán)境微生物數(shù)量的控制方法

2.1規(guī)范人員的衛(wèi)生操作規(guī)程人員是無菌環(huán)境中最大的污染源，據(jù)有相關(guān)調(diào)查表明，在無菌藥品生產(chǎn)過程中，有70%的污染來自于人員。人體攜帶微生物的數(shù)目十分驚人，在沒有消毒的情況下，手部大約有1000～6000個(gè)微生物/cm2，一個(gè)噴嚏可以射出100000～1000000個(gè)微生物;健康人群站立不動(dòng)也可以每分鐘向環(huán)境中散步100000個(gè)顆粒，移動(dòng)時(shí)微粒數(shù)量會(huì)迅猛增加。

嚴(yán)格按照進(jìn)入無菌室的穿衣規(guī)程穿戴潔凈服。生產(chǎn)過程中出現(xiàn)人員菌檢測不合格的工作人員應(yīng)取消其進(jìn)入無菌室的資格，并對其進(jìn)行再次培訓(xùn)，直到無菌檢測合格后方可恢復(fù)進(jìn)入無菌室的資格;另外，要嚴(yán)格按照新版GMP對人員的要求，有效控制無菌室人員數(shù)量，并盡量避免人員在無菌室不必要的活動(dòng)，減少人員對環(huán)境的污染。

2.2合理使用消毒劑無菌室內(nèi)最普遍使用的消毒劑是75%的乙醇，另外常見的消毒劑還有70%異丙醇，酸性苯酚，堿性苯酚，殺孢子劑，新潔爾滅等，75%乙醇和70%異丙醇常作為人員及設(shè)備表面的消毒使用，堿性苯酚、酸性苯酚及殺孢子劑通常用于無菌環(huán)境地面的消毒。為防止微生物產(chǎn)生抗耐受性，通常將消毒劑周期性的交替使用，并保證其使用時(shí)限，例如在單周使用75%乙醇和酸性苯酚，而雙周則使用70%異丙醇和堿性苯酚。為減少人員菌的數(shù)量，工作人員要按照規(guī)定間歇性的對手掌用消毒劑消毒。

2.3無菌室的日常管理建立安全衛(wèi)生值日制度，定期對無菌環(huán)境進(jìn)行清潔，當(dāng)設(shè)備和地面出現(xiàn)散落的藥物粉末或無菌水時(shí)，要及時(shí)用清理，并用消毒劑擦拭。一旦通風(fēng)系統(tǒng)，墻壁，天花板，地板，門窗和普通媒體系統(tǒng)被發(fā)現(xiàn)損壞，及時(shí)報(bào)告并采取適當(dāng)?shù)木S修措施，并及時(shí)記錄存檔。

2.4無菌環(huán)境消毒及設(shè)備的滅菌無菌環(huán)境的消毒常采用甲醛熏蒸的方法，為獲得最佳的消毒效果，在熏蒸前對無菌室噴灑適量的水以增加環(huán)境的空氣濕度，同時(shí)將無菌室內(nèi)的物品以一定的空間角度擺放，以增加其表面積而使消毒更加徹底。設(shè)備滅菌使用高壓蒸汽滅菌法（121℃、30min），對反應(yīng)釜設(shè)備多次脈動(dòng)式抽真空，由于反應(yīng)釜設(shè)備較大，一般會(huì)存在冷點(diǎn)（滅菌時(shí)反應(yīng)釜溫度最低的位點(diǎn)），所以需要對反應(yīng)釜設(shè)備安裝多個(gè)溫度探頭來確定滅菌溫度。設(shè)備冷點(diǎn)處溫度超過122℃并維持30分鐘蒸汽滅菌，保證設(shè)備滅菌效果。

3結(jié)語

微生物檢測是反映無菌環(huán)境無菌性的重要指標(biāo)，但無菌環(huán)境的微生物數(shù)量控制絕不能依賴檢測，產(chǎn)品的無菌或其它質(zhì)量特性也不能依賴于任何形式的檢驗(yàn)及檢測結(jié)果，而是應(yīng)該改善無菌環(huán)境衛(wèi)生及工作人員的操作規(guī)范，將微生物的數(shù)量控制在根源處，從根本上提高無菌藥物的質(zhì)量。

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