油料中苯并(a)芘含量的測定

魏利清，郝全英，俞 寅

(山西糧食質量監測中心，太原030024)

多環芳烴是一類廣泛存在于環境、食品和生物體內的污染物。苯并(a)芘是多環芳烴中毒性最大的一種，是一種強致癌物，其對食用植物油的污染已引起世界各國的廣泛關注[1-2]。許多國家和組織都對油脂中苯并(a)芘的安全限量做了嚴格規定，歐盟法規No 835/2011規定食用油中苯并(a)芘的最大限量為2 μg/kg，我國國標GB 2762—2017《食品安全國家標準 食品中污染物限量》規定油脂及其制品中苯并(a)芘的限量為10 μg/kg。

近年來，我國已將食用植物油列入食品質量安全監督抽檢和風險監測重點監控食品目錄，苯并(a)芘作為油脂的一項重要安全監測指標已被納入檢測計劃。在國家食品藥品監督管理總局對食用油及其制品的監督抽查信息中顯示，在胡麻油、菜籽油、芝麻香油、棉籽油、花生油、茶油、葵花籽油中檢出苯并(a)芘超標[3]。食用植物油中苯并(a)芘或源自原料在產前、產中、產后受大氣、汽車尾氣、土壤、水質、公路瀝青和包裝材料或容器的污染，或受到生產、輸送設備中機油和石油加工成分的污染，或油料油脂中有機物在高溫生產環節裂解產生[1]。苯并(a)芘污染嚴重的油料生產的植物油中苯并(a)芘含量可能會超標[4]。因此，研究油料中苯并(a)芘的污染狀況對保障食用植物油衛生安全具有十分重要的意義。

目前，大多數的研究主要關注植物油中苯并(a)芘含量的檢測，而對油料中苯并(a)芘含量檢測的研究較少。為此，本文參照GB 5009.27—2016《食品安全國家標準 食品中苯并(a)芘的測定》建立油料中苯并(a)芘含量的測定方法，為收集油料苯并(a)芘含量數據及制定油料中苯并(a)芘安全限量值提供技術支持，從而更好地為油脂加工企業降低和控制食用植物油中苯并(a)芘含量提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

花生、大豆、胡麻：市售。正己烷、二氯甲烷、乙腈：色譜級，美國Grace公司。苯并(a)芘溶液標準樣品：20 μg/mL±0.038 μg/mL，農業部環境保護科研監測所。

L-2000高效液相色譜儀(配自動進樣器，熒光檢測器)，日本日立有限公司；MS 204S分析天平，瑞士梅特勒-托利多天平；CG-7120粉碎機，中山市長柏電器實業有限公司；AH-30全自動均質器(配100 mL玻璃樣品管)、Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀，睿科儀器有限公司；SPT-16氮吹儀，北京斯伯特科技有限公司；QL-866旋渦混合儀，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；苯并(a)芘分子印跡柱(500 mg，6 mL)，博納艾杰爾科技有限公司；0.45 μm有機系微孔濾膜。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品預處理、提取及凈化

預處理：將油料去除雜質，用粉碎機粗磨碎成2 mm以下的樣品，儲于潔凈的樣品瓶中，并標記，于室溫下保存備用。

提取：稱取1.000 g粗磨碎油料試樣，置于100 mL玻璃樣品管中，加入40 mL正己烷，用全自動均質器于10 000 r/min提取2 min，靜置分層，將上清液轉入60 mL玻璃樣品管中，待凈化。

凈化：采用苯并(a)芘分子印跡柱，用高通量全自動固相萃取儀對提取液進行凈化處理，具體凈化條件見表1。

表1 全自動固相萃取儀凈化條件

將凈化液在40℃下氮氣吹干，準確吸取1 mL乙腈旋渦復溶0.5 min，過0.45 μm有機系微孔濾膜后供高效液相色譜測定。

1.2.2 高效液相色譜條件

色譜柱，Eclipse PAH(4.6 mm×250 mm，5 μm，安捷倫科技有限公司)；流動相，乙腈-水(體積比88∶12)；流速0.9 mL/min；熒光檢測器，激發波長384 nm、發射波長406 nm；柱溫35℃；進樣量50 μL。

1.2.3 標準曲線的制作

用乙腈逐級稀釋苯并(a)芘溶液標準樣品(20 μg/mL±0.038 μg/mL)，配制成質量濃度分別為0.5、1.0、5.0、10.0、20.0 ng/mL的標準系列工作液，按1.2.2儀器條件進行高效液相色譜測定，以標準系列工作液中的苯并(a)芘質量濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

1.2.4 方法的檢出限和定量限

配制1份濃度接近于空白值的標準溶液，按1.2.2儀器條件平行測定20次得到測量信號，求得測量信號的標準偏差(S)，分別按式(1)、式(2)計算方法的檢出限和定量限。

檢出限=3S/b

(1)

定量限=10S/b

(2)

式中：S為測量信號的標準偏差；b為方法校準曲線斜率。

1.2.5 樣品測定和加標回收率、精密度實驗

按照1.2.1和1.2.2分別測定胡麻、大豆和花生樣品中苯并(a)芘的含量。

在大豆、胡麻和花生樣品中添加苯并(a)芘標準溶液，其添加水平分別為2.5、5.0 μg/kg和10.0 μg/kg，按照1.2.1和1.2.2進行加標回收實驗，每個加標水平平行進行6次測定，計算加標回收率和精密度。

2 結果與討論

2.1 標準曲線的繪制

按照1.2.3的方法對標準系列工作液進行高效液相色譜測定，得到苯并(a)芘標準溶液的色譜圖及苯并(a)芘標準曲線，分別見圖1和圖2。

圖1 苯并(a)芘標準溶液色譜圖

圖2 苯并(a)芘標準曲線

由圖2可知，苯并(a)芘質量濃度(x)在0.5～20.0 ng/mL范圍內與響應值(y)線性關系良好，線性方程為y=287 979x-7 022.9，相關系數R2為1.000 0，滿足檢測要求。

2.2 方法的檢出限和定量限

按照1.2.4的方法進行測定，得到20次測量信號標準偏差(S)、方法的檢出限和定量限見表2。

表2 方法的檢出限和定量限

由表2可知，苯并(a)芘的檢出限為0.05 μg/kg，定量限為0.18 μg/kg。

2.3 實際樣品測定和方法的回收率、精密度

按照1.2.5的方法對樣品及加標樣品進行測定，計算加標回收率及相對標準偏差(RSD)，結果見表3。

表3 樣品中苯并(a)芘的加標回收率及RSD(n=6)

由表3可知，大豆、胡麻和花生樣品中均含有一定量的苯并(a)芘，樣品加標回收率為71.9%～88.0%，RSD為1.24%～10.11%，滿足含量在μg/kg級別的檢測要求。

3 結 論

樣品經全自動均質器用正己烷提取，提取液經全自動固相萃取儀用苯并(a)芘分子印跡柱凈化，用高效液相色譜熒光檢測器測定，建立了油料中苯并(a)芘的測定方法。方法的線性范圍為0.5～20.0 ng/mL，檢出限為0.05 μg/kg，定量限為0.18 μg/kg，加標回收率為71.9%～88.0%，相對標準偏差為1.24%～10.11%。

本方法使用全自動均質器和全自動固相萃取儀對樣品進行提取和凈化，樣品前處理簡單，無需專人守候，既節省人力又減少對人體的傷害。同時方法的準確度較高，重復性好，可用于油料中苯并(a)芘含量的測定。