氣相色譜-質譜法檢測植物油中腐霉利和氟硅唑含量

楊天慶，韓 娟，龔 珊，劉 旭，師麟閣，郭 靖

(陜西省糧油產品質量監督檢驗中心，西安 710016)

腐霉利，國際通用名為Procymidone，化學名稱N-(3，5-二氯苯胺)-1，2-二基環丙烷-1，2-二羰基亞胺，是20世紀70年代于我國投入使用的二甲酰亞胺類內吸性殺菌劑，主要是抑制菌體內甘油三酯的合成，具有保護和治療的雙重作用，低溫高濕條件下使用效果明顯。腐霉利可用于多種農作物，對葡萄孢屬和核盤菌屬真菌有特效[1-3]。氟硅唑，國際通用名為Flusilazole，化學名稱雙(4-氟苯基)甲基(1H-1，2，4-唑-l-基亞甲撐)硅烷，為保護性和治療性內吸三唑類殺菌劑，通過抑制或干擾菌體附著胞及吸器的發育、菌絲和孢子的形成，破壞細胞膜結構，從而降低病原菌致病力[4-5]。

隨著腐霉利和氟硅唑在農業生產中使用量的增加，其殘留也成為人們擔心的問題[6]。有研究表明[7]，化學農藥在人體內蓄積至一定量將直接危及人體的免疫系統、神經系統、生殖系統、消化系統等，長期低劑量接觸農藥可使患帕金森氏綜合癥的風險提高70%，農藥接觸導致的惡性疾病還包括骨髓瘤、唇癌、胃癌、皮膚癌等，因此如何快速高效地檢測出農產品中農藥殘留量至關重要。

關于糧油產品中腐霉利和氟硅唑的檢測方法有高效液相色譜法、氣相或液相色譜-質譜聯用法等多種方法[8-12]。Soares等[13]分別用4種萃取方法從人參提取物中萃取腐霉利，采用高效液相色譜法檢測，發現水溶解-石油醚超聲萃取腐霉利的方法有較高的提取率，干擾峰少。陳章明等[14]采用高效液相色譜法，以甲醇-水(體積比85∶15)為流動相，流速為1 mL/min，220 nm為檢測波長，對樣品中氟硅唑進行液相色譜測定，分離效果好，精密度與準確度高。Fulgêncio等[15]利用微分脈沖和方波伏安法測定了巴西蘋果中的腐霉利殘留量。Araújo等[16]利用低溫固液萃取技術萃取胡蘿卜樣品中的腐霉利，通過GC-MS檢測出有10%的樣品腐霉利農藥殘留超標。Korba等[17]采用頂空固相萃取技術測定紅葡萄酒的農藥殘留。但是有關植物油中腐霉利和氟硅唑檢測的研究較為鮮見。本研究選用QuEChERS快速凈化小柱對植物油樣品進行前處理，對植物油中腐霉利和氟硅唑含量的測定方法進行了驗證，以期為植物油產品中腐霉利和氟硅唑農藥含量的測定提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

植物油；乙腈，色譜純；環氧七氯(BePure，160906)，純度>99%；腐霉利標準品(AccuStandard，217091251)，純度>99%；氟硅唑標準品(AccuStandard，216021251-01)，純度>99%。

氣相色譜-質譜儀，配有電子轟擊源(EI)；分析天平；渦旋混合器；高速離心機，離心管；QuEChERS快速凈化小柱；移液器；旋轉蒸發儀。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品處理

1.2.1.1 樣品的提取

稱取4.0 g植物油置于20 mL離心管中，加入20 mL乙腈，于渦旋混合器上渦旋20 min進行提取，再置于高速離心機5 000 r/min離心5 min，取上清液14 mL待凈化。

1.2.1.2 樣品的凈化

取1.2.1.1待凈化液過QuEChERS快速凈化小柱，然后取10 mL于35℃水浴中旋轉蒸干，用1 mL乙腈溶解，取900 μL加入100 μL環氧七氯溶液供氣相色譜-質譜儀分析測定。

1.2.2 氣相色譜-質譜測定條件

HP5MS石英毛細管柱，30 m×0.25 mm(內徑)，膜厚0.25 μm；柱溫，80℃保持1 min，以10℃/min升至250℃并保持10 min；進樣口溫度230℃；檢測溫度250℃；柱流量2 mL/min；分流比5∶1；色譜質譜接口溫度280℃；載氣為氦氣，純度大于等于99.995%，流量1.0 mL/min；進樣量1.0 μL；進樣方式，無分流進樣，1 min后開閥；EI電離方式；電離能量70 eV；選擇離子監測方式(SIM)；監測離子(m/z)為96，254，283，285；定量離子(m/z)為285；溶劑延遲8 min。

2 結果與分析

2.1 QuEChERS快速凈化小柱的選擇

QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)是近年來國際上發展起來的一種用于農產品檢測的快速樣品前處理技術。原理與高效液相色譜(HPLC)和固相萃取(SPE)相似，都是利用吸附劑填料與基質中的雜質相互作用，吸附雜質從而達到除雜凈化的目的。QuEChERS方法有以下優勢[18]：①回收率高，對大量極性及揮發性的農藥品種的回收率大于85%；②精確度和準確度高，可用內標法進行校正；③可分析的農藥范圍廣，包括極性、非極性的農藥種類均能利用此技術得到較好的回收率；④分析速度快，能在30 min內完成6個樣品的處理；⑤溶劑使用量少，污染小，價格低廉且不使用含氯化物溶劑；⑥操作簡便，無需良好訓練和較高技能便可很好地完成；⑦乙腈加到容器后立即密封，使其與工作人員的接觸機會減少；⑧樣品制備過程中使用很少的玻璃器皿，裝置簡單。因此，本文采用QuEChERS快速凈化小柱對植物油樣品進行前處理。

2.2 方法驗證

2.2.1 加標回收率

分別稱取3份空白植物油樣品，做低、中、高3個添加量的加標回收實驗，每個添加量做3個重復實驗，計算加標回收率，結果見表1。

表1 回收率實驗結果

由表1可見，在不同加標量下，腐霉利平均回收率分別為85.0%、89.0%和96.0%，氟硅唑平均回收率分別為88.3%、89.2%和94.1%?；厥章示_到GB/T 27404—2008《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》標準中附錄F對回收率的要求。

2.2.2 精密度實驗

根據低、中、高3個添加量的加標回收實驗中所測定的結果計算本實驗精密度，結果見表2。由表2可見，在3種不同添加量下腐霉利的實驗室內變異系數(CV)分別為1.7%、1.5%、8.9%，氟硅唑的分別為6.8%、2.7%、2.1%，實驗室內變異系數均達到GB/T 27404—2008《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》標準中附錄F對精密度的要求。

表2 精密度驗證結果

2.2.3 方法定量限和檢出限

經測定，按10倍信噪比計算腐霉利定量限為0.025 mg/kg，氟硅唑定量限為0.075 mg/kg；按3倍信噪比計算腐霉利檢出限為0.007 5 mg/kg，氟硅唑檢出限為0.022 5 mg/kg。

3 結 論

本研究采用QuEChERS快速凈化小柱進行快速樣品前處理，利用氣相色譜-質譜法檢測植物油中腐霉利和氟硅唑農殘含量，檢測結果顯示其回收率及精密度均達到GB/T 27404—2008《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》標準中附錄F要求標準，可用于日常植物油樣品中腐霉利和氟硅唑農殘檢測。