惡性血液病細胞端粒酶活性檢測及其臨床意義

陳滔 李美玲(通訊作者) 張紅艷

558000貴州醫科大學第三附屬醫院

端粒酶和細胞本身有著永生化的關聯性，為了更好地明確端粒酶在惡性血液系統腫瘤當中的表現情況以及臨床指導意義[1]。本次研究采用改良TRAP 的銀染法實現對惡性血液病骨髓單一核細胞端粒酶活性的檢測，并且對部分疾病案例實行動態化觀察，分析總結惡性血液疾病與端粒酶活性之間的關聯性，現報告如下。

資料與方法

2016年2月-2017年1月收治血液系統惡性腫瘤疾病患者90 例，其中慢性粒細胞白血病16例，急性白血病55例，慢性淋巴細胞白血病4 例，骨髓增生異常綜合征8 例，多發性骨髓瘤7 例。另外在同期選擇部分良性血液疾病患者30例進行對比分析。不同疾病組患者性別、年齡等基礎資料比較，差異無統計學意義(P＞0.05)，滿足統計學對比研究要求。

方法：兩組患者均接受相同檢查方法。①端粒酶：根據王著元等人所提出的端粒酶檢查方法[2]。②采用TRAP 反應與電泳、銀染等檢查方法，聯合酶鏈反應擴增產物通過12%聚丙烯酰胺凝膠電泳后放置AgNO3染色10 min，蒸餾水洗滌之后顯色。③段粒酶活性：采用凝膠成像的分析方式，在獲得標本相對吸光度數值后代表端粒酶的活性。

觀察指標：總結不同疾病患者的端粒酶活性數據差異。

統計學方法：本次研究所有數據均應用SPSS 19.0 統計學軟件建立數據分析模型，對研究數據進行統計分析，采用(±s)形式描述，P＜0.05 時說明數據差異有統計學意義。

結 果

良性血液疾病患者的端粒酶活性與其他惡性血液疾病患者的端粒酶活性數據差異較大，各項數據對比結果差異有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

討 論

對于惡性血液疾病、良性血液疾病患者實行端粒酶活性檢測，其結果基本可以明確惡性患者的端粒酶活性普遍呈現出陽性，端粒酶活性水平相對較高，為正常患者的多倍。同時患者的治療效果與端粒酶的活性之間保持著較高的關聯性，這也間接證明了端粒酶活性和惡性血液疾病之間的關系[3]。

急性白血病屬于臨床中死亡風險較高的一類疾病，在研究中發現，急性白血病患者的端粒酶活性有明顯的提高，這與國內外許多研究均保持高度一致，這也證明急性白血病患者的端粒酶表現會有明顯的增強，同時端粒酶活性和白血病細胞的永生化關系非常突出。有研究在1996年提出關于端粒酶活性和細胞遺傳學的狀態關系，同時提出了關于11Q 和-5/-7 染色體異常患者的端粒酶活性也會隨之改變，誘導分化HL60細胞會導致端粒酶活性遭受抑制，所以認為白血病細胞在分化過程中端粒酶可能遭受抑制[4]。在本次研究中，約有30%的初始白血病患者的端粒酶活性并沒有提升，呈現出陰性或低水平的狀態，在臨床中最終也發現這一批患者的化療治療效果比較理想，這也可能代表著端粒酶呈現出陰性的患者體內白血病細胞具備比較理想的誘導分化功能，對于治療方式的敏感性比較強。伴隨著白血病治療技術的持續性發展，特別是大劑量化療與骨髓抑制技術的持續性發展，白血病在完全緩解之后診斷與治療也逐漸成為重點話題。在本次研究中也基本發現，端粒酶的活性也可以作為患者預后效果的判斷標志之一，在白血病患者化療之后，藥物雖然可以殺滅大量的白細胞細菌，但是仍然存在殘留少量細胞并形成微量殘留白細胞，這也是白血病復發的主要原因。對此，端粒酶的活性檢測有利于在微量殘留白血病的分子生物學標記檢測，有研究也發現復發患者和初始時相比端粒酶活性有所提升，認為端粒酶活性的提高與細胞進一步惡化之間有直接關系。在白血病復發案例的隨訪中也發現，復發患者端粒酶水平降低患者更容易緩解臨床癥狀，預后效果也更加理想，所以端粒酶的活性檢測可以作為急性白血病的分期、預后以及微量殘留監測重要方法。

表1 不同疾病患者端粒酶活性對比(±s)

表1 不同疾病患者端粒酶活性對比(±s)

疾病 例數 端粒酶活性良性血液疾病 30 0.77±0.54慢性粒細胞白血病 16 3.56±2.21急性白血病 55 2.97±3.12慢性淋巴細胞白血病 4 4.21±3.11骨髓增生異常綜合征 8 2.87±2.01多發性骨髓瘤 7 3.21±2.14

另外，慢性粒細胞白血病(CML)、骨髓增生異常綜合征(MDS)、多發性骨髓瘤(MM)均屬于臨床中比較嚴重的惡性血液疾病，其中CML 屬于臨床中發展速度比較緩慢的骨髓抑制性疾病，當前并無預測CML 病程的指標。有研究顯示，CML慢性期患者的端粒酶活性比較高的患者在短時間之內進展會呈現出加速期或急變期，在本次研究中這一類型患者的端粒酶活性有明顯提高，在疾病慢性階段中有部分患者呈現出陰性、低水平表現，這也論證了端粒酶活性和CML 臨床分析的關系[5]。MDS屬于潛在的急性白血病，與CML 相似，臨床表現也基本相同。值得一提的是，MM 和端粒酶的關系研究并不多，國外有研究發現，MM患者端粒酶活性提高患者的生存期有明顯縮短，這也認為端粒酶活性可能直接表現MM 患者的瘤細胞增殖潛能，所以MM 標本的檢測中，端粒酶活性提升時患者預后效果可能比較差，這也可以作為臨床中重要檢測方法之一。

本研究結果顯示，良性血液疾病患者的端粒酶活性與其他惡性血液疾病患者的端粒酶活性數據差異較大，各項數據對比結果差異有統計學意義。

綜上所述，惡性血液病細胞端粒酶活性檢測臨床意義顯著，能夠作為惡性血液疾病檢查標志物，尤其是可以作為白血病殘留量的監測新標準之一，值得推廣普及。