丹參素鈉對(duì)2期壓力性損傷模型大鼠受壓部位病理學(xué)的影響*

章瓊芝 沈翠珍

浙江中醫(yī)藥大學(xué)護(hù)理學(xué)院 浙江 杭州 310053

壓力性損傷俗稱壓瘡，是指皮膚和深部軟組織由強(qiáng)烈和(或)長(zhǎng)期的壓力或壓力聯(lián)合剪切力所致的局部損傷。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)[1-3]，丹參提取物丹參素鈉有潛在的抗氧化、抑制炎癥反應(yīng)、促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)及創(chuàng)面修復(fù)等作用。筆者通過建立2期壓力性損傷模型，觀察丹參素鈉對(duì)2期壓力性損傷模型大鼠受壓部位病理學(xué)的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:SPF級(jí)健康雄性大鼠25只，月齡20～22周，平均體質(zhì)量470±30g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。大鼠單籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食、飲水。在室內(nèi)溫度

22～30℃、相對(duì)濕度50%～70%、明暗周期12h的環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后選取20只給予造模處理，另5只作為空白組，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處置符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 造模材料:圓片形鐵片（直徑12mm、厚1mm、重1g），圓片形磁鐵（直徑12mm、厚1mm、重1g），均購(gòu)自東莞市合冶金屬材料有限公司。

1.3 藥物及試劑:丹參素鈉，上海源葉生物科技有限公司生產(chǎn)，每支20mg，批號(hào)B20255-20MG；10%水合氯醛，福州飛凈生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器:Nikon（TE2000-U）顯微鏡（Olympus，日本），組織石蠟包埋機(jī)（YB-6D，湖北亞光醫(yī)用電子技術(shù)有限公司），組織切片機(jī)（Leitz，德國(guó)），超聲清洗機(jī)（常州佑達(dá)），手術(shù)器械均由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心病理實(shí)驗(yàn)室提供。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法:分述如下。

1.5.1 動(dòng)物模型的復(fù)制及評(píng)價(jià):動(dòng)物模型的制作參考磁片循環(huán)壓迫的造模方法[4-5]。在清潔級(jí)動(dòng)物手術(shù)室內(nèi)用10%水合氯醛（3ml/kg）腹腔注射麻醉大鼠后，將大鼠的四肢固定在解剖板上，對(duì)大鼠一側(cè)后肢、腹部皮膚進(jìn)行剃毛，備皮區(qū)域?yàn)?cm×5cm。再用5%聚維酮碘對(duì)備皮區(qū)域進(jìn)行消毒，在大鼠后肢做一切口，長(zhǎng)約2cm，鈍性分離組織。將無菌圓形鐵片植入大鼠后肢股薄肌處，用4-0 Dexon聚輕基乙酸線連續(xù)縫合切口，再用5%聚維酮碘消毒縫合處以防止感染。待切口愈合后，放置圓片形磁鐵，從而對(duì)皮膚產(chǎn)生壓力，造成局部皮膚缺血。每次缺血2h后再將外源磁鐵取下，讓局部血流恢復(fù)10min，如此循環(huán)壓迫。每日每只大鼠進(jìn)行5個(gè)連續(xù)的循環(huán)，連續(xù)2天。以受壓部位皮膚顏色變黯紅色、周圍紅腫、無流血流膿作為2期壓力性損傷形成的標(biāo)準(zhǔn)。

1.5.2 動(dòng)物分組及干預(yù)治療:將20只大鼠進(jìn)行2期壓力性損傷模型制備，5只空白組大鼠給予剃毛處理。造模過程中共4只大鼠造模失敗，1只空白組大鼠死亡。因此將造模成功的16只大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為模型組，丹參素鈉低、中、高劑量組，每組4只，各組體質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。空白組和模型組大鼠腹腔注射生理鹽水2ml/（kg·d），丹參素鈉低、中、高劑量組大鼠分別給予15、30和60ml/（kg·d）丹參素鈉注射液腹腔注射。連續(xù)給藥4天，給藥期間大鼠正常進(jìn)食、活動(dòng)。

1.5.3 標(biāo)本采集及指標(biāo)觀察:實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，肉眼觀察各組大鼠受壓部位皮膚的形態(tài)、顏色變化以及皮膚的完整性。切取各組大鼠受壓中心部位皮膚，予10%中性多聚甲醛固定、乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋等處理，蠟塊持續(xù)切片，厚4μm，進(jìn)行HE染色。采用Nikon（TE2000-U）顯微鏡觀察，NikonNIS-Elements圖像分析軟件采集圖像，觀察各組大鼠受壓部位皮膚病理學(xué)變化，包括組織結(jié)構(gòu)、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況等。

2 結(jié)果

2.1 肉眼觀察結(jié)果:空白組大鼠為正常皮膚組織，皮膚完整，外觀呈肉粉色，未見水腫及滲出等損傷，如圖1。造模成功的大鼠創(chuàng)面皮膚顏色為黯紅色，周圍紅腫，無流血流膿，如圖2。實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)，模型組大鼠創(chuàng)面呈結(jié)痂狀態(tài)，質(zhì)硬，創(chuàng)面顏色變黑，周圍明顯紅腫，按壓周圍紅腫處流出少量淡黃色組織液，如圖3。丹參素鈉低、中、高劑量組創(chuàng)面出現(xiàn)肉芽組織，有不同程度的結(jié)痂，質(zhì)地較軟，位于創(chuàng)面周圍或偏中央，創(chuàng)面顏色呈粉紅色或略白色，創(chuàng)面面積顯著變小，如圖4～6。

圖1 空白組

圖2 給藥前大鼠創(chuàng)面

圖4 低劑量組

圖5 中劑量組

圖6 高劑量組

2.2 病理切片觀察結(jié)果:空白組:皮膚上皮組織為復(fù)層鱗狀上皮，上皮結(jié)構(gòu)完整，層次清晰，真皮層內(nèi)附件（如毛囊）較多且清晰可見，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)不明顯，如圖7。模型組:創(chuàng)面皮膚壞死伴鈣化，未見明顯的肉芽組織，真皮層出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，真皮膠原纖維出現(xiàn)變性、脂肪細(xì)胞溶解的現(xiàn)象，如圖8。丹參素鈉不同劑量組:丹參素鈉低、中、高劑量組鏡下顯示炎細(xì)胞浸潤(rùn)逐漸減輕，新生肉芽組織依次增多，表皮恢復(fù)程度逐漸變高。丹參素鈉低劑量組創(chuàng)面皮膚部分壞死伴鈣化，上皮結(jié)構(gòu)不清，真皮膠原纖維溶解，毛細(xì)血管淤血，如圖9。丹參素鈉中劑量組上皮結(jié)構(gòu)較清晰，表皮層恢復(fù)程度尚好，表皮與真皮部分分離，脂肪細(xì)胞游離，毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，如圖10。丹參素鈉高劑量組表皮層恢復(fù)程度較好，表皮與真皮連接疏松，真皮層可見成纖維細(xì)胞、毛囊細(xì)胞的增生，如圖11。

圖7 空白組

圖8 模型組

圖9 低劑量組

圖10 中劑量組

圖11 高劑量組

3 討論

壓力性損傷一直以來都是護(hù)理領(lǐng)域重點(diǎn)關(guān)注的問題。壓力性損傷一旦發(fā)生，便會(huì)延長(zhǎng)治療時(shí)間，增加患者痛苦，加重家庭的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)，導(dǎo)致醫(yī)療資源的浪費(fèi)。其中2期壓力性損傷是關(guān)鍵時(shí)期，若不及時(shí)進(jìn)行有效的處理則會(huì)進(jìn)一步發(fā)展到3、4期，程度加重，創(chuàng)面難以愈合。因此，探索積極有效的治療2期壓力性損傷的方法顯得尤為重要。

壓力性損傷屬于慢性、難愈性創(chuàng)面，修復(fù)過程相對(duì)復(fù)雜，其中肉芽組織的形成處于核心地位。肉眼觀察發(fā)現(xiàn)，在給藥期間，丹參素鈉不同劑量組大鼠創(chuàng)面出現(xiàn)肉芽組織，但模型組尚未出現(xiàn)。而且丹參素鈉不同劑量組創(chuàng)面面積變小較模型組顯著。由此說明，丹參素鈉能夠促進(jìn)創(chuàng)面肉芽組織的生長(zhǎng)，促進(jìn)2期壓力性損傷創(chuàng)面的修復(fù)及愈合。

HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組出現(xiàn)大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。由此可知，組織在反復(fù)經(jīng)歷缺血再灌注損傷的過程中出現(xiàn)炎癥反應(yīng)。采用丹參素鈉干預(yù)后，丹參素鈉低、中、高劑量組大鼠炎癥反應(yīng)逐漸減輕，新生肉芽組織依次增多，表皮恢復(fù)程度逐漸變高。這說明丹參素鈉具有較強(qiáng)的抗炎、促進(jìn)損傷創(chuàng)面的愈合及修復(fù)作用，這與相關(guān)的研究[6-7]結(jié)論一致，并且丹參素鈉劑量越高，對(duì)創(chuàng)面的修復(fù)作用越明顯。