蕪湖地區豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病抗體水平監測與分析

張海燕， 季慕寅， 張冬冬， 王巨龍， 朱廣雙， 楊艷麗

(1.蕪湖職業技術學院 生物工程學院，安徽 蕪湖 241003；2.蕪湖市畜牧獸醫局，安徽 蕪湖 241003)

隨著安徽蕪湖地區的畜牧業發展，當地豬的存欄總量逐年上升，但豬的傳染病也越來越多，限制當地養豬業可持續發展。其中，豬瘟(Classical swine fever, CSF)、豬口蹄疫(Foot-and-mouth disease, FMD)和高致病性豬藍耳病(High pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome, HPPRRS)是危害養豬生產的病毒性傳染病，屬于國家非常重視的一類傳染病[1]，實踐證明，疫苗免疫接種是防控病毒性傳染病的有效手段，在使動物對某種病原產生抵抗力的同時也為疫病的最終控制或消滅打下基礎。抗體水平是反映豬群免疫狀態或感染狀態的重要指標，國家對于實施疫苗免疫要求的指標是抗體陽性率≥70%[2]。為切實掌握目前蕪湖地區豬場豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病免疫抗體水平，在蕪湖市畜牧獸醫局和正大集團合作支持下，于2013～2016年期間針對蕪湖市8個縣(區)的部分規模豬場及散養戶進行血樣抽檢，以掌握蕪湖地區相關疫病的抗體水平分布情況，為有效防控相關動物疫病提供了重要的依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 待檢血清 2013年5月至2016年11月，由蕪湖市畜牧獸醫局動物疫病監測站和正大集團蕪湖有限公司派專人抽檢，每年2次，從蕪湖地區豬場的豬瘟、豬口蹄疫和高致病性豬藍耳病免疫豬群(免疫程序分別按照國家相關規定進行)采集血液，按照常規方法從前腔靜脈或耳靜脈采血5 mL左右，實驗室統一收集，將采好的血樣呈45°～60°斜放于4 ℃冰箱，放置1 h，然后用低速離心機離心3～5 min，轉速為2 500～3 000 r/min，分離的血清-20 ℃保存待測[3]，共制備血清樣本1 038份。

1.1.2 免疫情況和疫苗類型 規模化豬場一年四季能夠按固定的免疫程序注射疫苗，其中，對豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病3種疫病的免疫程序(表1)。

1.1.3 主要儀器 MK3酶標儀(賽默飛世爾有限公司) ELx50洗板機(伯騰儀器有限公司)；5810R離心機、100 μL 和300 μL 8道移液器、10 μL和20 μL的單道移液器(艾本德有限公司)，生化培養箱(常州國立有限公司)；超凈工作臺(蘇州凈化有限公司)；高壓蒸汽滅菌器(上海申安有限公司)，數字恒溫箱(DHP-9160B型)(上海瑯玗有限公司)；MK2微量振蕩器(江蘇姜堰有限公司)，海爾冰箱。

1.1.4 主要試劑 豬瘟、豬口蹄疫、豬藍耳病抗體檢測試劑盒均為深圳康百得生物科技有限公司生產的 ELISA 抗體檢測試劑盒，所有試劑盒均在有效期內，置于4 ℃冰箱保存。

表1 豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病免疫程序

1.2 試驗方法

1.2.1 豬瘟、豬口蹄疫、豬藍耳病抗體檢測 采用間接ELISA法，按照試劑盒說明進行：(1)洗滌液配制；(2)樣品和對照稀釋；(3)操作步驟：抗原抗體孵育30 min，洗板3次。

1.2.2 結果判定 豬瘟、豬口蹄疫、豬藍耳病病毒ELISA抗體檢測試劑盒有效性判定：陰性對照孔OD值≤0.15(若大于0.15則試驗無效)；陽性對照孔OD值≥0.50(若小于0.50則試驗無效)。

豬瘟、豬口蹄疫、豬藍耳病病毒ELISA抗體檢測試劑盒：

Cov-off值(COV)=陰性對照平均OD值×2.1(陰性對照孔OD值<0.08，按0.08計);

樣品OD值≥COV，判為豬瘟、豬口蹄疫、豬藍耳病病毒抗體陽性；

樣品OD值

1.2.3 數據處理 對不同分組數據間的差異顯著性進行檢驗比較。

2 結果與分析

2.1 年度統計

2013年5月至2016年11月，共檢測豬瘟(豬瘟病毒，CSFV)、豬口蹄O型口蹄疫病毒，O-FMDV)和豬藍耳病(豬繁殖與呼吸綜合癥病毒，PRRSV)免疫血樣1 038份，其中，PRRS抗體陽性率明顯低于國家免疫要求，CSFV和FMDV抗體陽性率符合國家免疫要求(表2)。

表2 豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病的抗體陽性率年度分布

注：同一列數據中有相同字母者，表示組間差異不顯著；無相同字母者，表示組間差異顯著；其中小寫字母者表示差異顯著

(P<0.05)，大寫字母表示差異極顯著 (P<0.01)，下同 。

統計年份中豬瘟免疫血樣共計1 038份，豬瘟病毒抗體陽性率表現為89.2%～96.1%，總體為91.9%免疫效果良好，均滿足國家免疫要求，年度間結果差異顯著(P<0.05)；豬O型口蹄疫抗體陽性率表現為76.9%～93.6%，總體為83.9%，均滿足國家免疫要求，年度間結果差異極顯著(P<0.01)，2013年5月份～2014年11月，豬O型口蹄疫抗體陽性率為78.0%，2014年5月份～2015年11月份，豬O型口蹄疫抗體陽性率為高達93.6%，而2015年5月份～2016年11月份，豬O型口蹄疫抗體陽性率又降為76.9%； 高致病性豬藍耳病抗體陽性率為57.9%～76.3%，總體低于國家免疫要求僅為65.1%，年度間結果差異無統計學意義，2014年5月份～2016年11月份，高致病性豬藍耳病抗體陽性率分別為57.9%、66.4%，均低于國家免疫要求標準。

2.2 區域統計

2013年5月至2016年11月期間，根據蕪湖地區四區四縣(蕪湖縣、繁昌縣、無為縣、南陵縣、鏡湖區、鳩江區、三山區和弋江區)采集的血樣，按照區域進行統計對比分析(表3)。

表3 豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病的抗體陽性率區域分布

2013～2016年蕪湖地區不同區域的豬瘟病毒抗體陽性率表現為87.1%～98.7%，總體為91.9%，各地區均滿足國家免疫要求, 區域間結果差異極顯著(P<0.01)；豬O型口蹄疫抗體陽性率為62.5%～100%，總體為83.9%，區域間結果差異極顯著(P<0.01)，統計結果顯示，三山區豬O型口蹄疫抗體陽性率高達100%，而繁昌縣豬O型口蹄疫抗體陽性率不合格，僅為62.5%，其它地區均達到國家免疫要求；檢測發現，高致病性豬藍耳病總體抗體陽性率為65.1%，低于國家免疫要求，其中南陵縣和無為縣檢測陽性率分別為86.7%和82.0%。達到國家免疫要求，其他區域均未達到國家免疫要求。

2.3 規模豬場和散養戶統計

按照血樣來源的養殖單位規模大小，劃分為規模化豬場(養殖規模≥150頭)和散養戶，按規模將血樣檢測結果對其進行對比分析(表4)。

表4 不同規模養殖單位的豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病抗體陽性率

由表4可見，2013～2016年共采集規模養豬場血樣940份，散養戶血樣98份，其中規模養豬場豬瘟抗體陽性率達到91.8%，散養戶豬瘟抗體陽性率高達92.8%，均達到國家免疫要求，不同規模養殖單位間結果具有統計學意義，無顯著差異(P>0.05)；規模養豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率為84.4%，散養戶豬O型口蹄疫抗體陽性率僅為79.6%，均達到國家免疫要求；規模養豬場高致病性豬藍耳病抗體陽性率為66.3%，散養戶高致病性豬藍耳病抗體陽性率為65.1%，均未達到國家免疫要求，不同規模養殖單位間結果無統計學意義。

3 結論與討論

豬瘟最早起源于美國，繼而在法國、德國及南美等地暴發，我國豬瘟流行呈慢性、非典型特征，引起豬體免疫抑制，影響母豬的繁殖性能，因此，加重豬場的經濟損失[4]。在我國，免疫接種仍是防制豬瘟的重要措施，疫苗對預防豬瘟起重大作用[5]。研究表明自2013～2016年來，對蕪湖四區四縣規模養殖場豬瘟抗體陽性率檢測，檢測結果顯示，豬瘟抗體陽性率91.9%，免疫效果較好，總體水平達到國家免疫要求，同時也發現蕪湖地區豬瘟抗體陽性率有逐漸下滑的趨勢，暗示豬瘟病毒潛伏豬群中的機率大大增加，需引起相關從業者的重視，不能放松警惕，應當根據免疫抗體消長規律，實現抗體水平監測常態化[6]。

豬口蹄疫是一種古老的疾病，幾乎世界上所有的國家和地區歷史上都曾經發生過口蹄疫。該病能在全球大規模流行，而且該病傳播快，發病高，傳播途徑廣，病原復雜多變，發病率高達100%，被世界動物衛生組織規定為危害最嚴重的動物疫病。我國農業農村部于2017年提出，為最大程度地做好動物疫病防控，節約國家財政資源，只把豬口蹄疫列為國家強制免疫計劃病種，而豬瘟和高致病性豬藍耳病推出國家強制免疫計劃，各地按照國家防治指導意見執行[7]。近年來豬口蹄疫在我省范圍內發病率較高，而研究表明2013～2016年中蕪湖地區豬口蹄疫抗體陽性率平均達到83.9%，達到國家免疫要求，僅有繁昌縣豬口蹄疫抗體陽性率為62.5%，未達到國家規定的70%標準。豬口蹄疫病毒一旦感染發病，會在豬群中迅速傳染，造成地區內口蹄疫疫病集中爆發。繁昌縣抗體陽性率過低極易引發疫病爆發。因此，該地區應做好衛生防疫工作，疑似口蹄疫及早隔離及早治療，防止感染從豬群場內流出，同時制定科學地免疫程序，提高豬群的免疫水平。

高致病性豬藍耳病，也稱為豬繁殖和呼吸綜合癥，自1987年于美國發現以來，繼而在全世界蔓延而成為世界養豬業的頭號威脅。目前，我國PRRS呈現局部散點狀分布，但也面臨著新型HP-PRRSV病毒變異株的威脅，對于新建的養豬場危害尤為嚴重，患病生豬和帶有HP-PRRSV陽性病毒豬為其主要傳染源[8]。試驗研究顯示蕪湖市2013～2016年間，檢測蕪湖市地區高致病性豬藍耳病抗體陽性率未到達國家標準，其中鏡湖區陽性率最低，僅為45.1%，說明該地區免疫接種失敗。同時發現弋江區、鳩江區、三山區、蕪湖縣、繁昌縣高致病性豬藍耳病抗體陽性水平低于國家標準，分析原因可能與豬場的免疫程序、免疫操作和免疫頻率有關。因此，有必要加強制免疫接種，改善飼養條件，制定有效的高致病性豬藍耳病疫苗接種計劃，完善場內消毒措施，提高豬群的免疫力。

隨著養豬產業規模化、集約化和標準化程度的不斷提高，所面臨的疫病壓力也日益增大。豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病均是由病毒引起的高度傳染性疾病，在集約化養殖模式中，其高致病、高度傳染的特性造成母豬流產率、死胎和胎弱率極高，危害性極大[9]。豬場除了做好豬群的飼養管理和完善生物安全體系外，尤其要重視豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病等疫病的免疫控制[10]，基于抗體水平的監測數據，結合抗體監測結果，制定合理的免疫程序，達到減少重大疫病的發生的目的。

免疫接種疫苗是預防畜禽傳染病的有力措施，但疫苗除了自身質量原因外，科學制定和嚴格執行免疫程序規定的接種方式、時間、次數、接種量、操作方式、藥物影響等，也是免疫成敗的關鍵[11]。抗體檢測可以評價疫苗免疫效果，群體免疫的合格率是一個重要指標[12]。本研究通過血清學調查，統計了近年來的蕪湖地區豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病的抗體陽性率，并分年度與區域結果進行數據分析，基本掌握了蕪湖地區常見豬病的抗體水平分布情況。以此為制定疫病防治措施，開展強制免疫工作，實現免疫抗體水平監測等提供科學有力的支持。