β-鏈接蛋白在原發性浸潤性乳腺導管癌組織中的異常表達檢測

周桃珍，智艷芳，趙 玲

(1.鄭州大學第三附屬醫院檢驗科，河南 鄭州450052；2.鄭州大學第三附屬醫院病理科，河南 鄭州450052)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤以及惡性腫瘤死亡的主要原因[1]。淋巴系統轉移是乳腺癌常見的一種轉移形式，淋巴結轉移是腫瘤預后的關鍵預示因素，因為腫瘤可以通過淋巴結轉移到全身其他部位[2]。細胞間的黏附分子在腫瘤的轉移及侵襲過程中也起著至關重要的作用[3]。

β-鏈接蛋白是黏附分子的主要組成部分，在細胞Wnt信號通路中發揮轉錄共同因子的作用[4-6]，并且在其他信號通路中也發揮相關作用，例如磷酸肌醇3激酶(PI3K)/絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶(AKT)通路[7]。

β-鏈接蛋白作為癌基因，其失調或激活可導致惡性腫瘤的發生[8]。有多種線索表明β-鏈接蛋白在乳腺癌的發生、發展中有著至關重要的作用[9-10]。轉錄后修飾的β-鏈接蛋白通過磷酸化水平的改變及轉換率可能會影響其表達量、功能及黏附功能[11]。

本研究的主要目的是評估原發性浸潤性乳腺導管癌組織中β-鏈接蛋白的表達并且分析其與臨床病理參數之間的關系，對于有淋巴結轉移者還進行轉移后的相關因素研究。

1 資料與方法

1.1 標本來源選取我院2014年1月至2019年6月收治的乳腺癌石蠟包埋切片標本，均來源于乳房改良切除的組織標本，包括39例原發性浸潤性乳腺導管癌和29例淋巴結轉移癌，并收集相關臨床病理資料[12- 13]。原始組織切片采用HE染色來確認腫瘤的病理診斷及分級，隨后采用免疫組化檢測組織中β-鏈接蛋白、雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、Ki-67等。

1.2 預后指數計算預后指數是預測原發性乳腺癌術后生存期的一個較好指標。計算公式：預后指數= 0.2×腫瘤大小(cm)+腫瘤分級(1～3)+淋巴結轉移個數(1～3)。根據計算結果可將病例分為好、中、差等3個等級，得分分別為3.40分、3.41 ～ 5.40分、>5.40[14]。

1.3 免疫組化檢測采用鏈霉親和素-生物素免疫過氧化物酶復合染色法。將4 μm的組織切片用二甲苯脫蠟處理，隨后用梯度酒精水化處理，在甲醇中用體積分數0.3%過氧化氫封閉內源性過氧化氫酶的活性30 min；在檸檬酸鈉溶液中浸泡10 min后通過微波修復抗原。將處理好的組織切片分別與β-鏈接蛋白的單克隆抗體、ER的單克隆抗體、PR的單克隆抗體、Ki-67的單克隆抗體共同孵育2 h，隨后與生物素標記的二抗在室溫下孵育30 min，用3,3′二氨基聯苯胺為顯色劑的親和素-生物素復合免疫過氧化物酶系統進行顯色，用蘇木精進行復染，每批標本均設磷酸鹽緩沖液(PBS)染色的陰性對照。

1.4 免疫組化結果評分系統關于β-鏈接蛋白、ER、PR的表達評分，目前有一個半定量評分系統Histoscore[15]，這個系統用來評價細胞核、細胞膜和(或)細胞質中染色的強度(+ ～ +++)及細胞染色比例陽性(0%～100%)。Ki-67增殖指數是目前較為肯定的核增殖標志物，與細胞的增殖有關，依據數值大小分為高、低等2種情況。

2 結果

2.1 入組65例原發性浸潤性乳腺導管癌患者的臨床病理資料見表1。

表1 65例原發性浸潤性乳腺導管癌患者的臨床病理資料

續表1

2.2 原發性浸潤性乳腺導管癌淋巴結轉移與ER、PR、Ki-67增殖指數以及β-鏈接蛋白表達的關系見表2。

表2 原發性浸潤性乳腺導管癌淋巴結轉移與ER、PR、Ki-67增殖指數以及β-鏈接蛋白表達的關系

2.3 原發性浸潤性乳腺導管癌組織中β-鏈接蛋白表達與臨床病理參數的單因素分析結果見表3。

表3 原發性浸潤性乳腺導管癌組織中β-鏈接蛋白表達與臨床病理參數的單因素分析結果

2.4 原發性浸潤性乳腺導管癌組織中β-鏈接蛋白表達與臨床病理參數的多因素分析結果見表4。

3 討論

以往研究[16-17]報道，β-鏈接蛋白在胰腺癌、直腸癌、子宮內膜癌中，β-鏈接蛋白的表達部位異常。在乳腺癌中，僅報道過β-鏈接蛋白在細胞膜或細胞質中表達異常[18-21]，僅2篇報道過核β-鏈接蛋白的表達異常[22-23]。細胞核β-鏈接蛋白的缺乏可能與以下3個原因有關：乳腺癌的細胞核β-鏈接蛋白表達水平過低，免疫組化檢測不到；β-鏈接蛋白可能不存在于細胞核內，其表達可能是通過非Wnt信號通路代替或被移除細胞核內[24-25]。本研究結果顯示：原發性浸潤性乳腺導管癌淋巴結轉移與ER、Ki-67增殖指數、細胞質β-鏈接蛋白、細胞膜β-鏈接蛋白表達有關。單因素分析顯示，細胞質β-鏈接蛋白表達與腫瘤大小、腫瘤分級、淋巴結轉移個數、預后指數、臨床分期、Ki-67增殖指數有關，細胞膜β-鏈接蛋白表達與淋巴結轉移個數、預后指數、臨床分期、ER有關，細胞質/細胞膜比值與腫瘤大小、淋巴結轉移個數、預后指數、臨床分期、Ki-67增殖指數有關(P均<0.05)。多因素分析顯示，細胞質β-鏈接蛋白與Ki-67增殖指數有關，細胞膜β-鏈接蛋白與淋巴結轉移、ER有關，細胞質/細胞膜比值與淋巴結轉移有關。這與以往文獻報道一致[21-22,26]?？傊?鏈接蛋白在原發性浸潤性乳腺導管癌組織中存在異常表達，為其發生、發展及轉移機制研究提供了新的思路。