GC測定氫化可的松中甲醇、氯仿、1,2-二氯乙烷的殘留量

白秀萍，董玉杰

（1.淄博市食品藥品檢驗研究院，山東 淄博 255086；2.山東金城生物藥業(yè)有限公司，山東 淄博 255000）

氫化可的松為腎上腺皮質激素類的典型代表藥物，可調節(jié)糖、脂肪和蛋白質的生物合成及代謝，具有抗炎、抗毒、抗休克及抗過敏等藥理作用，既可作為糖皮質激素使用，也可作為制備其它甾體激素藥物的起始化合物[1]。目前國內氫化可的松的制備均采用半合成方法，工藝中使用甲醇、氯仿、1,2-二氯乙烷等有機溶劑，限值見表1。為保證產品安全，本文依據中國藥典2015年版四部及相關文獻[2-3]建立了測定殘留溶劑甲醇、氯仿、1,2-二氯乙烷殘留量的氣相色譜法。

表1 氫化可的松殘留溶劑限度表

1 儀器與試藥

6890N 氣相色譜儀（配FID檢測器，Agilent G1888 頂空進樣器，20 ml頂空瓶，美國Agilent）；氫化可的松（批號：0905034，0905035，0905045，0905046，山東新華）；甲醇（分析純，天津四友），氯仿（分析純，國藥集團），1,2-二氯乙烷（分析純，萊陽經濟技術開發(fā)區(qū)精細化工廠），二甲基亞砜（分析純，天津福晨）。

2 方法與結果

2.1 供試液制備

2.1.1 空白溶液制備 精密量取二甲基亞砜1.0 ml置入20 ml頂空瓶，密封，待用。

2.1.2 標準貯備溶液制備 標準貯備溶液A：精密稱取無水甲醇0.2 g（約0.25 ml）、氯仿10 mg（約7 μl）、1,2-二氯乙烷10 mg（約7 μl）置入已加入少量二甲基亞砜的100 ml量瓶溶解，用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻得A液。

標準貯備溶液B：取5.0 ml標準貯備溶液A，用二甲基亞砜稀釋至100 ml，混合均勻。

2.1.3 標準溶液制備 精密量取標準貯備溶液B 1.0 ml置入20 ml頂空瓶，密封，混合均勻，同法配制6份。

2.1.4 樣品溶液的制備 精密稱取樣品約0.1 g置入20 ml頂空瓶，加入1.0 ml二甲基亞砜溶解，密封。每批樣品制備2份。

2.1.5 樣品空白溶液制備 取樣品（批號：0905034），研細，充分干燥，將其中殘留溶劑降至較低的水平，作為樣品空白。稱取樣品空白約0.10 g，精密稱定，置入20 ml頂空瓶，精密加入二甲基亞砜1.0 ml溶解，密封，混合均勻。

2.2 儀器條件

毛細管色譜柱DB-624（30 m×0.53 mm，3.0 μm）；柱溫：初始溫度40 ℃，保溫10 min，以60 ℃/min升至200 ℃保持3 min；進樣口溫度：140 ℃；檢測器溫度：250 ℃；載氣：N2；載氣流速：5 ml/min；分流進樣，分流比（1:1）；平衡溫度：120 ℃；平衡時間：30 min；針溫：130 ℃；Transfer line 溫度：140 ℃；加壓時間：0.5 min；進樣體積：1.0 ml。

2.3 計算方法

將空白溶液、標準溶液和樣品溶液，依次置入頂空進樣器，120 ℃下平衡30 min。取空白溶液進樣，記錄圖譜，在標準溶液和供試溶液中扣除溶劑峰。取標準溶液進樣。溶劑出峰順序依次為甲醇、氯仿、1,2-二氯乙烷。相鄰組分之間的分離度R，應不小于1.5；取6份標準溶液，連續(xù)進樣，以3種溶劑峰面積計算的RSD，均應不大于15.0%。取每個供試溶液進樣，各進樣1次，記錄圖譜。計算公式如下。

注：X：殘留甲醇、 氯仿、1,2-二氯乙烷的量（ppm）；Ai：供試溶液的圖譜中溶劑(i)的峰面積；A0：空白溶液的圖譜中相應溶劑(i)的峰面積；Asi：標準溶液的圖譜中溶劑(i)的峰面積；W：樣品的稱量（g）；Wsi：每個溶劑的稱重（g）。

2.4 專屬性試驗

取空白溶液進樣，分析溶劑（二甲基亞砜）對檢測的影響；取樣品空白溶液進樣，分析樣品對檢測的影響；分別取甲醇、氯仿、1,2-二氯乙烷各1 μl置入已加入1.0 ml二甲基亞砜的頂空瓶，密封，混合均勻，再分別進樣，記錄各溶劑的保留時間，用于各個溶劑峰的定性；取標準溶液進樣，并記錄各溶劑出峰順序、保留時間，計算相鄰溶劑峰的分離度R，判斷各溶劑之間無干擾，則各相鄰溶劑之間分離度R均應大于1.5；取樣品空白0.10 g加入標準溶液1.0 ml溶解，再進樣，若判斷樣品空白對殘留溶劑分離度無影響，則各相鄰溶劑峰的分離度R均應大于1.5，且與未加入樣品時所得分離度無明顯差異。

結論：標準溶液中出峰順序依次為甲醇、氯仿、1,2-二氯乙烷；保留時間依次為1.939，6.442，8.017 min；空白溶液在各溶劑出峰時間均無干擾峰，溶劑（二甲基亞砜）對檢測無影響；樣品空白在各溶劑出峰時間均干擾峰，樣品對檢測無影響；分離度R甲醇-氯仿=24.3，R氯仿-1,2-二氯乙烷=6.2，均大于1.5，加入樣品對分離度無明顯影響，專屬性符合要求。

圖1 專屬性試驗色譜圖

2.5 系統(tǒng)適用性試驗

稱取甲醇0.1932 g、氯仿0.0105 g、1,2-二氯乙烷0.0100 g，按照方法描述配制標準溶液6份，連續(xù)進樣。計算待測溶劑的理論塔板數(shù)N；連續(xù)進樣6次，計算峰面積RSD。標準溶液中甲醇、氯仿、1,2-二氯乙烷的理論塔板數(shù)依次為3406，9063，11583；峰面積RSD依次為1.3%，2.3%和1.9%,均小于15.0%。方法系統(tǒng)適用性試驗符合驗證標準。

2.6 精密度試驗

按照2.5 項下系統(tǒng)適用性試驗數(shù)據，以每個溶劑峰面積的RSD評價方法的重復性，標準溶液重復進樣6次，甲醇、氯仿和1,2-二氯乙烷峰面積RSD（n=6）分別為1.3%，2.3%和1.9%，均小于15.0%，方法的精密度良好。

2.7 線性關系試驗

1,2-二氯乙烷標準貯備液：精密稱取1,2-二氯乙烷0.0201 g置入已加入一定量二甲基亞砜的10 ml量瓶，用二甲基亞砜稀釋至刻度，混合均勻。

標準貯備溶液A：精密稱取甲醇0.3960 g、氯仿0.0246 g置入已加入一定量二甲基亞砜的100 ml量瓶，再加入1,2-二氯乙烷標準貯備液1.0 ml，用二甲基亞砜稀釋至刻度，混合均勻。取標準貯備溶液A 0.25，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml分別置入100 ml量瓶，用二甲基亞砜稀釋至刻度，混合均勻，得到系列濃度標準貯備溶液。

系列濃度標準溶液：從低濃度到高濃度，依次取系列濃度標準貯備溶液各 1.0 ml置入20 ml頂空瓶，密封，混合均勻，得到系列濃度標準溶液。每個溶液制備3份。

分別取上述系列濃度標準溶液，120 ℃平衡30 min，分別進樣。以標準溶液中甲醇、氯仿和1,2-二氯乙烷的峰面積對其質量（以μg計,等于濃度×1.0 ml），使用Origin 5.0軟件進行線性回歸，得到每個溶劑標準曲線，線性方程及相關系數(shù)R。結果表明：甲醇在99～1188 ppm濃度范圍內，線性方程為Y=7.718+8.861X，R=0.9999；氯仿在12.3～73.8 ppm濃度范圍內，線性方程為Y=3.094X-0.153，R=0.9987；1,2-二氯乙烷在1.005～6.03 ppm濃度范圍內，線性方程為Y=8.472X-0.080，R=0.9963。表明峰面積與濃度均呈良好線性關系。

2.8 準確度和回收率試驗

樣品空白的制備：取樣品（批號：0905034），研細，充分干燥，將其中殘留溶劑降至較低的水平。稱取樣品空白0.10 g，精密稱定，置入20 ml頂空瓶，精密加入二甲基亞砜 1.0 ml溶解，密封，混合均勻得樣品空白溶液。取2.7項下的No.2、No.6、No.7標準貯備溶液。標準溶液 取系統(tǒng)適應性試驗項下的數(shù)據進行計算。

取20 ml頂空瓶9個，分為3組，每組3個，各精密稱取樣品空白0.10 g。分別取線性項下No.2，No.6，No.7標準貯備溶液各1.0 ml,分別加入到每組頂空瓶中，使溶解，密封，混合均勻，得到相當于限度20%，100%，120%測試溶液，測定。

計算方法 計算每個溶劑每個濃度的回收率，方法的回收率以3個濃度測定的回收率的平均值評價。計算公式如下。

注：Ai：測試溶液圖譜中溶劑(i)的峰面積；A01：溶劑空白圖譜中溶劑(i)的峰面積；A02：樣品空白圖譜中溶劑(i)的峰面積；ASi：標準溶液圖譜中溶劑(i)的平均峰面積；Ci：測試溶液中溶劑(i)的加入量，μg；CSi：標準溶液中溶劑(i)的量，μg。

表2 回收率試驗結果（n=3）

以每個溶劑的回收率評價方法的準確度。結果見表2。甲醇、氯仿和1,2-二氯乙烷的回收率分別為98.5%，95.0%和98.1%，回收率的RSD分別為2.3%，2.5%和2.6%；每個溶劑的回收率均介于90.0%～110.0%，方法準確度良好。

2.9 檢測限和定量限

取線性測試項下標準溶液逐步用溶劑稀釋，得到適當濃度的溶液。在色譜系統(tǒng)下，分別進樣，當待測組分的信噪比為2～3倍時，對應的濃度為該組分的最小檢測濃度；當待測組分的信噪比為10～20倍時，對應的濃度為該組分的最小定量濃度。甲醇、氯仿和1,2-二氯乙烷的檢測限分別為0.5 ppm，0.5 ppm和0.2 ppm，定量限分別為2 ppm，2.5 ppm和0.9 ppm。

2.10 耐用性

分別由兩名化驗員（化驗員1和化驗員2），使用兩支同型號，不同色譜柱，改變色譜條件，柱溫提高和降低5%，流速提高和降低5%，分別進行系統(tǒng)適用性驗證。結果見表3。

表3 耐用性實驗結果

計算各溶劑峰面積的RSD（n＝6），以RSD評價方法的耐用性。結果表明，不同化驗員用使用不同色譜柱；提高和降低柱溫，提高和降低流速，連續(xù)進樣6針，RSD均小于15.0%，表明方法的耐用性良好。

3 樣品檢測

取4批氫化可的松樣品（批號：0905034，0905035，0905045，0905046），按照規(guī)定條件檢測。結果見表4。

表4 樣品檢測結果

4 結論

本文參考中國藥典2015年版四部及相關文獻，采用氣相色譜頂空進樣法測定氫化可的松中甲醇、氯仿、1,2-二氯乙烷溶劑殘留，考察了儀器條件、方法學研究，線性、準確度、精密度等均滿足要求，建立了測定溶劑殘留的檢測方法，對4批樣品進行測定。表明該法靈敏度高、精密度好，可用于氫化可的松中甲醇、氯仿、1,2-二氯乙烷溶劑殘留的測定。