巖陀DNA提取方法研究

方強強，王 燕

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巖陀DNA提取方法研究

方強強，*王 燕

(大理大學藥學與化學學院，云南，大理 671000)

以巖陀植物嫩葉為材料，用不同方法對巖陀葉片DNA進行提取，比較提取的質量差異，尋找適合巖陀葉片總DNA的提取方法，以滿足多基原民族藥巖陀DNA條形碼識別系統構建的研究需要。采用十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）法、改良的CTAB法、十二烷基硫酸鈉（SDS）法及堿裂解法提取巖陀葉片總DNA，利用瓊脂糖凝膠電泳、紫外分光光度法及PCR擴增效果檢查DNA提取的質量。結果顯示四種方法均能從巖陀植物葉片中提取到基因組DNA，改良CTAB法提取的DNA純度和完整性明顯好于其他方法，且采用此法進行PCR擴增獲得的目標條帶明亮單一，擴增效率達到100%。改良的CTAB法是巖陀葉片總DNA的提取中最為合適的提取方法，能夠滿足后續DNA條形碼的研究需要。

巖陀；DNA提取；十六烷基三甲基溴化氨法；十二烷基硫酸鈉法，堿裂解法

巖陀藥材來源于西南鬼燈檠（Hemsl.）、羽葉鬼燈檠（Hemsl.）或七葉鬼燈檠（Hemsl.）的干燥根莖，屬多年生直立草本植物，系虎耳草科鬼燈檠屬，為白族、傈僳族等民族習用藥材。在《全國中草藥匯編》第二、三版及《中華本草》第十卷等中藥材書籍中均有收載。該藥材具有清熱解毒、收斂、消炎、祛風、除濕等功效，可用于腸炎、菌痢、風濕骨痛、外傷出血、老年性支氣管炎等常見疾病有較好療效。巖陀以根莖入藥，是我國西南地區常用民族藥材，主要分布于我國云南、貴州、四川等高海拔地區，尤其以云南省資源最為豐富[1-4]。一方面，三種鬼燈檠（七葉鬼燈檠、西南鬼燈檠和羽葉鬼燈檠）的花、葉等主要器官形態相近，根的外部形態和內部構造相似性極高，顯微鑒別、理化鑒別等傳統鑒別方法很難把三者有效地區分開來。……