尿液神經絲蛋白檢測對老年阿爾茨海默病患者的臨床意義

董艷娟,蔡曉平，劉瑩，劉丹，賀昕

(中國人民解放軍總醫院第七醫學中心干部病房三科,北京 100700)

近年來，研究發現阿爾茨海默病相關神經絲蛋白(AD7c-NTP)是分子量為41 kD的跨膜磷蛋白，在神經元胞體中表達，在AD患者腦內選擇性升高[1]，與神經炎的萌發以及細胞的死亡有關。AD7c-NTP在 AD 患者病理特征神經元纖維纏結中大量存在，并在患者腦中呈分泌性上調表達，據此推測AD7c-NTP可能與AD的病理過程有關[2]。因此在早期或相對嚴重的AD患者腦脊液中可檢測到AD7c-NTP的增高，而且腦脊液中AD7c-NTP的水平與癡呆的嚴重程度相關。更進一步的研究表明在患者尿液中AD7c-NTP含量的檢測可以達到與腦脊液檢測相同的效果。本文通過對老年AD患者尿液中AD7c-NTP的檢測分析其對AD診斷及病情嚴重程度的臨床意義。

表1 兩組基本情況比較

注：MMSE為簡易智能狀態檢查量表；CDR為臨床癡呆評定量表；HIS 為Hachinski缺血指數量表;AD為阿爾茨海默病，下表同

1 對象和方法

1.1 研究對象 選取2015年10月至2017年8月在我院干部門診以及住院診斷為AD患者66例(AD組)，其中男性60例，女性6例；年齡范圍75～96歲，年齡(87.27±4.95)歲。另外選取在我院門診及老年科就診的智能正常老人85名作為對照組，其中男性72名,女性13名；年齡范圍74～98歲，年齡(86.93±5.21)歲，均無癡呆表現。兩組研究對象基本情況比較見表1。

全部病例年齡均在65歲以上，均進行系統的病史采集、神經?？撇轶w及癡呆相關量表測試，其中包括簡易智能狀態檢查量表(MMSE)、臨床癡呆評定量表(CDR)，Hachinski缺血指數量表(HIS)。所有病例均行頭部MRI檢查，排除顱內占位性病變及感染性疾病。AD組的納入標準：按照美國國立神經病、語言障礙和卒中研究院(NINCDS)阿爾茨海默病和相關疾病學會(ADRDA)的診斷標準[3]；按照疾病的嚴重程度，根據MMSE與臨床癡呆評定表(CDR)評分結果，將患者分為輕、中、重度3組，分別為21、29、16例；并排除其他原因引起的癡呆。對照組入組標準：無嚴重心腦血管疾病，血壓、心電圖正常，血常規、血糖及血脂均在正常范圍；全部行頭部CT及MRI檢查，除外顱內占位性病變及感染性疾病。無神經系統體征及明顯的肝、腎或內分泌疾病。MMSE≥26分；HIS≤4分；CDR<0.5分。

1.2 標本采集 留取受試者晨尿的中段尿，選取清亮的標本，經尿液分析，去除不合格標本(尿蛋白異常、尿液中有紅白細胞或有細菌生長、尿PH值異常、尿糖、酮體、硝酸鹽、膽紅素或尿膽原陽性)。合格標本離心5 min，取上清液進行AD7c-NTP 檢測，嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.3 儀器與試劑 深圳匯松科技發展有限公司生產的多功能酶標分析儀(MB-580型)，試劑盒：來自深圳安群生物工程有限公司提供的阿爾茲海默病相關神經絲蛋白檢測試劑盒(酶聯免疫法)。

2 結果

2.1 兩組AD7c-NTP測定結果 AD組尿AD7c-NTP陽性明顯高于對照組，兩組陽性率比較，差異有統計學意義(P<0.001)。見表2。AD組尿AD7c-NTP 的平均水平(3.02±1.53)μg/L明顯高于健康對照組(1.28±1.16)μg/L，兩組間差異有統計學意義(t=4.439，P<0.001)。

表2 AD組與對照組尿AD7c-NTP陽性率比較

2.2 兩組間MMSE、CDR評分與AD7c-NTP含量相關性分析 兩組受試者年齡、性別、教育背景與AD7c-NTP含量的相關性分析(Pearson相關分析)顯示，兩組尿AD7c-NTP含量與以上諸因素均無明顯相關性；MMSE分數與AD7c-NTP含量呈負相關，CDR分數與AD7c-NTP含量呈正相關。見表3。

表3 各指標與尿NTP含量相關性分析

2.3 尿AD7c-NTP含量變化與AD嚴重程度的關系 輕度AD組[(2.02±0.48)μg/L]與中度[(2.89±0.15)μg/L]、重度AD組[(3.36±0.27)μg/L]尿AD7c-NTP含量比較，三組間兩兩比較，差異均有統計學意義(P<0.001)；三組比較，差異有統計學意義(F=88.756，P<0.001)，且尿中的AD7c-NTP含量隨疾病嚴重程度增加而上升。

3 討論

近年來，隨著對于AD的研究不斷進展，與AD相關的生物學標志物逐漸被發現，如tau蛋白、磷酸化的tau蛋白和Aβ42[4]。目前得到公認的診斷阿爾茨海默病的生物學標記有“c-匹茲堡復合物B”(C-PIB)，PET、基因檢測，以及腦脊液總tau蛋白、磷酸化tau蛋白、B-淀粉樣蛋白42(Aβ42)，其中，C-PIB PET和基因檢測費用昂貴，檢測較為繁瑣；而且上述腦脊液標志物的方法均為有創性，患者依從性較差，限制了這些方法的臨床應用。

20世紀末Monte等[1]從AD患者的腦脊液中分離出AD7c-NTP神經絲蛋白，并發現這種蛋白在神經元中表達，定位于神經細胞軸突，在AD患者的皮層神經元、腦組織抽提物、腦脊液中都有升高，并且發現其含量與癡呆的嚴重程度成相關[5]。隨后的研究發現AD患者尿樣本中AD7c-NTP相對分子質量與腦組織及腦脊液中AD7c-NTP相對分子質量相同，對于診斷AD有較高的敏感度和特異度[6]，為臨床使用尿 AD7c-NTP含量對 AD 的診斷，提供了一項有重要意義的檢測手段。并且尿液AD7c-NTP檢測為一項無創體外檢測方法，樣本采集方便，易于被患者接受，這使得通過檢測尿液中的AD7c-NTP來協助診斷AD成為可能。

本研究以老年人為研究對象，對尿液AD7c-NTP含量進行檢測，結果發現在老年AD 患者中尿 AD7c-NTP 水平較健康對照組增高，差異有統計學意義(P<0.001)，提示尿 AD7c-NTP 水平檢測有助于AD的診斷，與國內外研究結果一致[4-5]。并且AD7c-NTP水平與AD嚴重程度呈正相關，輕度、中度、重度AD組尿AD7c-NTP的含量有顯著差異，并且隨病情的嚴重程度增高，提示尿 AD7c-NTP 水平檢測有可能對于AD嚴重程度的判定有一定幫助。尿 AD7c-NT屬于神經絲蛋白家族，在早中期AD患者的腦組織、腦脊液、尿液中均有所升高，有研究報道尿AD7c-NTP與認知障礙患者的Aβ沉積方面具有較高特異性和中等敏感性[7]；其含量與癡呆的嚴重程度相關使得其有可能成為 AD 的特異性生物標志物。檢測尿液中的AD7c-NTP水平，方法具有無創性，標本留取方便，易被老年患者接受；ELISA檢測方法可操作性強、簡單、方便，易于在臨床開展，有助于早期發現和診斷AD。