重組雞γ-干擾素聯合雞新城疫和禽流感(H9亞型)二聯滅活疫苗免疫效果的研究

劉曉婧 魏 波 蔣貽海* 曲信芹

（①青島蔚藍生物股份有限公司 山東 青島 266061 ②青島動保國家工程技術研究中心有限公司山東 青島 ③青島蔚藍生物制品有限公司 山東 青島）

雞新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一種急性高度接觸性傳染病[1]。禽流感(AI)則是由A型流感病毒(AIV)引起的嚴重侵害禽類呼吸系統和生殖系統的一種傳染病[2,3]。二者均屬于必須防控的重要疫病，對我國養禽業造成了巨大的經濟損失。干擾素(interferon，IFN)具有抑制病毒復制和調節機體免疫反應的功能[4]，由于沒有耐藥性和藥物殘留的風險，并具有廣譜的抗病毒活性，而且重組干擾素和天然干擾素同樣具有抗病毒能力和免疫調節活性，因此重組干擾素在病毒類疾病的防治中的應用及其機理研究成為了目前的研究熱點[5]。

目前，禽類干擾素主要通過作為免疫增強劑或者直接使用來發揮生物學功能。據文獻報道，雞γ-干擾素分別對雞新城疫活疫苗和禽流感(H5亞型)滅活疫苗有免疫增強效果[6,7]，故筆者選擇本公司的雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯滅活苗(La Sota株+WD株)與重組雞γ-干擾素聯合免疫，驗證其免疫增強效果以期雞群在免疫后獲得更好的免疫保護。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 1日齡SPF雞購自于北京勃林格殷格翰維通生物技術有限公司，隔離器中飼養。

1.1.2 疫苗 雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯滅活苗(La Sota株+WD株)由青島蔚藍生物制品有限公司提供。

1.1.3 主要試劑 雞IL-4(ChIL-4)和雞IFN-γ(ChIFN-γ)夾心ELISA檢測試劑盒購自河北天順生物科技有限公司；重組雞γ-干擾素由青島蔚藍生物制品有限公司制備；雞新城疫HI實驗標準抗原和陽性血清均購自中國獸醫藥品監察所；H9亞型禽流感HI標準抗原和陽性血清均購自哈爾濱維科生物技術開發公司。

1.2 方法

1.2.1 試驗動物分組 將1日齡SPF雞在隔離器中飼養，隨機分成3組，每組10只，分別是雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯滅活疫苗和雞 γ-干擾素聯合免疫組(A)，雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯滅活疫苗免疫組(B)和空白組(C)。各組分別在7和14日齡各免疫1次，除A組免疫劑量為1mg/ml的重組雞 γ-干擾素0.2ml和0.3ml雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯滅活苗外，其余各組均為0.3ml。空白組(C)只注射生理鹽水。免疫途徑為肌肉注射。

1.2.2 樣品采集及處理 （1）細胞因子檢測：免疫后24、48h所有雞采全血，分別用雞IL-4(ChIL-4)和雞IFN-γ(ChIFN-γ)夾心ELISA檢測試劑盒檢測不同組試驗雞的血清中細胞因子的含量。（2）體液免疫檢測：采集免疫后7、14、21、28、35d的血清，按照《中華人民共和國獸藥典》附錄中血凝抑制標準檢測方法[8]，分別測定ND和AI(H9亞型)抗體水平，記錄實驗結果。最終用Excel、SPS S 20.0等軟件，對檢測結果進行數據整理、統計分析。

2 結果與分析

2.1 細胞因子檢測結果

免疫后24h和48h檢測雞體產生IFN-γ和IL-4細胞因子水平結果如圖1、2(單位：pg/ml)。

通過檢測免疫后24h和48h IFN-γ和IL-4細胞因子水平可以看出，A組在24h和48h的IFN-γ水平檢測均明顯高于B組和C組；IL-4在24h時細胞因子水平明顯高于B組和C組，說明重組雞γ-干擾素能刺激雞體快速產生免疫應答反應。

圖1 細胞因子IFN-γ檢測結果

圖2 細胞因子IL-4檢測結果

2.2 體液免疫檢測結果

各試驗組雞在免疫后的抗新城疫和禽流感H9亞型的HI 抗體效價分別如表1和表2所示。

表1 實驗動物抗新城疫HI滴度檢測結果 (nlog2)

表2 實驗動物抗禽流感H9亞型HI滴度檢測結果 (nlog2)

由表1和表2可知，在免疫后A組和B組抗新城疫和禽流感H9亞型的抗體效價漲落趨勢基本一致，A組的抗新城疫和禽流感H9亞型抗體滴度均在免疫后21d達到高峰而B組則在28d達到高峰。C組在試驗過程中均無抗體產生。

試驗結果表明，A組的抗新城疫抗體效價在免疫后7、14、21、28和35d均高于B組；而A組的抗禽流感H9亞型抗體效價則在免疫后21、28和35d高于B組。由此可知，雞γ-干擾素與雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯滅活苗聯合免疫的免疫增強效果顯著。

3 討論

雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯滅活苗是目前家禽養殖行業中應用比較廣泛的禽類疫苗，相較于活苗其安全性更可靠，但抗原被滅活后會在一定程度上影響免疫效果[6,9]。而細胞因子作為免疫增強劑能夠克服其他常規佐劑所引起的毒性大、難以吸收等缺點，因此，許多細胞因子已經被用來作為疫苗佐劑[6,10-12]。本試驗采用重組雞γ-干擾素作為雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯滅活苗的增強劑。從細胞因子檢測結果來看，重組雞γ-干擾素和滅活疫苗的聯合免疫相較于其他兩個試驗組能在短時間內達到較高的細胞因子水平，說明重組雞γ-干擾素能加快雞體內產生免疫應答反應的速度。從體液免疫檢測結果來看，重組雞γ-干擾素和滅活疫苗聯合免疫刺激機體所產生的針對雞新城疫和禽流感H9亞型的抗體水平均高于單獨免疫滅活苗所達到的抗體水平；并且相較于單獨免疫滅活苗組，使用重組雞γ-干擾素聯合免疫能促使機體快速達到較高的抗體水平，進一步說明了重組雞γ-干擾素能有效增強雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯滅活苗的免疫效果。

4 小結與展望

目前我國禽類養殖行業仍被許多烈性傳染性疾病所困擾(如禽流感、傳染性法氏囊病、傳染性支氣管炎、新城疫等)，養殖戶每年都要面臨遭受巨大經濟損失的風險。而新疫苗開發周期長，化學藥品的使用又易產生耐藥性并導致藥殘。干擾素作為一種細胞因子，已在許多研究中證明是機體抗病毒感染防御反應中出現最早且對大多數病毒均有作用的廣譜抗病毒藥物[5]。雛雞的首免日齡是7日齡，在其母源抗體水平逐漸降低且疫苗免疫后尚未產生能達到保護效力的抗體時干擾素的作用尤為重要，因其能快速刺激機體產生相應的免疫保護因子，促進機體免疫應答反應，最終能達到提高雞群存活率的效果。在實驗過程中筆者還對免疫前后各試驗組的體重增重情況進行了記錄，結果發現聯合免疫組相較于其他兩組在增重比上也略有優勢，說明干擾素的使用對雞體生產性能的提高也有一定的幫助。筆者相信隨著基因工程技術的發展，重組干擾素的在禽類疫病防控中的應用也會越來越廣泛。