T細(xì)胞亞群、IL-6、IL-18及IFN-γ水平變化與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病的相關(guān)性及可能的作用機(jī)制分析*

路 峰 吉恒東* 孫 華 劉冰心

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是臨床常見的系統(tǒng)性自身免疫性疾病，多發(fā)生于女性，其發(fā)病原因不明，以多重免疫紊亂并存為特點(diǎn)，臨床治療比較棘手[1]。已有的研究認(rèn)為，基因、環(huán)境、免疫等因素均與SLE的發(fā)生和進(jìn)展有關(guān)，其中免疫異常是目前臨床研究的熱點(diǎn)[2]。SLE患者機(jī)體免疫紊亂的特征是T淋巴細(xì)胞功能失調(diào)，不能抑制CD4+T細(xì)胞，導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞多克隆活化，激活補(bǔ)體產(chǎn)生大量的自身抗體，形成免疫復(fù)合物沉積于組織和器官中，進(jìn)而引起多組織、多器官免疫炎性損傷[3]。本研究旨在探討T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+和CD8+)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)、白介素-18(interleukin-18，IL-18)及γ-干擾素(interferon-γ，IFN-γ)水平變化與SLE發(fā)病的相關(guān)性及其在SLE發(fā)病中可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取于2015年1月至2017年10月在泰州市人民醫(yī)院門診或住院治療的65例SLE患者納入SLE組，其中男性13例，女性52例；年齡14～60歲，平均年齡(37.2±15.5)歲。另選取65名健康體檢者納入健康對照組。SLE患者參照SLE活動性指數(shù)評分(SLEDA I Score)可劃分為活動期組(SLEDA I Score＞10，28例)和穩(wěn)定期組(SLEDA I Score＜10，37例)，所有試驗(yàn)內(nèi)容均在受檢者知情同意后進(jìn)行。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①入選標(biāo)準(zhǔn)符合1997年美國風(fēng)濕病協(xié)會修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②年齡為14～60歲；③健康對照組無心臟、肝臟、腎臟疾病。

(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①有合并嚴(yán)重感染、腫瘤、器官移植及血液、消化及肝腎等病史；②合并其他自身免疫性疾病。

1.3 儀器與試劑

采用CytoFLEX型流式細(xì)胞儀(美國貝克曼庫爾特公司)；ELX800型全自動酶標(biāo)儀(美國Bio-Tek公司)；7060型全自動生化儀(日本日立株式會社)。試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.4 檢驗(yàn)方法

(1)抽取所有研究對象空腹靜脈血分別置于3個試管各5 ml。取1份血標(biāo)本室溫靜置30 min后，以3 000 r/min低速離心10 min，取上層血清采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測IL-6、IL-18及IFN-γ水平，采用Bio-Tek全自動酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

(2)取1份血標(biāo)本，采用CytoFLEX型流式細(xì)胞儀檢測CD3+、CD4+和CD8+，并采用FloMax操作軟件進(jìn)行細(xì)胞熒光分析，得出CD3+、CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果。

(3)取1份血標(biāo)本，采用透射比濁法檢測IgG、IgA及IgM水平，檢測儀器采用7060型全自動生化儀。

1.5 檢測指標(biāo)

對所有受檢者無菌采集空腹靜脈血3個試管各5 ml，低溫離心，離心條件為3 000 r/min，離心10 min，吸取血清，置-20 ℃凍存?zhèn)溆谩Ｓ昧魇郊?xì)胞儀檢測T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞比例；采用免疫透射比濁法檢測免疫球蛋白IgG、IgA及IgM；采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法嚴(yán)格按試劑盒步驟檢測SLE患者和健康體檢者血清IFN-γ、IL-6及IL-18的質(zhì)量濃度，根據(jù)正常人血清中IFN-γ、IL-6及IL-18的質(zhì)量濃度，采用百分位數(shù)法求得血清IFN-γ、IL-6及IL-18的95%參考值范圍，并以質(zhì)量濃度超過此范圍為異常升高。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料是否為正態(tài)分布采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用x2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清IL-6、IL-18、IFN-γ水平差異以及T淋巴細(xì)胞亞群和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

SLE組患者血漿IL-6、IL-18及IFN-γ水平顯著高于健康人群，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.27，t=-4.85，t=-5.80；P＜0.01)，SLE組患者外周血CD3+、CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞水平明顯低于健康人群，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-14.60、t=-13.75、t=-10.97，P＜0.01)，見表1。

2.2 SLE活動期與穩(wěn)定期患者血清IL-6、IL-18、IFN-γ水平差異以及T淋巴細(xì)胞亞群淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，SLE組活動期患者血漿IL-6、IL-18及IFN-γ水平均明顯高于穩(wěn)定期組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.27，t=-4.85，t=-5.80；P＜0.01)，但SLE組患者活動期與穩(wěn)定期相比，除CD8+淋巴細(xì)胞絕對值較低外，其余細(xì)胞亞群絕對值均無顯著變化，CD4+/CD8+比值在各組間比較無顯著區(qū)別，見表2。

表1 SLE患者與健康人群血清IL-6、IL-18、IFN-γ及T淋巴細(xì)胞亞群水平差異(pg/L，±s)

表1 SLE患者與健康人群血清IL-6、IL-18、IFN-γ及T淋巴細(xì)胞亞群水平差異(pg/L，±s)

注：表中IL為白介素；IFN-γ為γ干擾素；CD3+、CD4+和CD8+均為T淋巴細(xì)胞亞群。

組別 例數(shù) 血清IL-6、IL-18、IFN-γ水平 血清CD3+、CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞IL-6 IL-18 γ干擾素 CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+SLE組 65 41.57±8.32 295.43±74.77 14.53±6.13 1651±421 618±112 412±97 1.58±0.45健康對照組 65 28.99±5.76 398.24±61.23 19.87±3.27 2641±349 912±131 623±121 1.55±0.62 t值 10.02 -8.57 -6.17 -14.60 -13.75 -10.97 0.32 P值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 0.75

表2 SLE組患者活動期與穩(wěn)定期血清CD3+、CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)以及IL-6、IL-18和IFN-γ水平比較(±s)

表2 SLE組患者活動期與穩(wěn)定期血清CD3+、CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)以及IL-6、IL-18和IFN-γ水平比較(±s)

注：表中IL為白介素；IFN-γ為γ干擾素；CD3+、CD4+和CD8+均為T淋巴細(xì)胞亞群。

組別 例數(shù) 血清IL-6、IL-18、IFN-γ水平 血清CD3+、CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞IL-6 IL-18 γ干擾素 CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+活動期 28 44.64±9.15 256.11±74.21 10.24±6.64 1668±362 602±117 387±162 1.51±0.52穩(wěn)定器 37 32.76±6.12 352.82±83.45 16.97±2.09 1712±346 644±152 552±169 1.53±0.54 t值 6.27 -4.85 -5.80 -0.71 -1.77 -5.68 -0.22 P值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 0.48 0.08 ＜0.01 0.83

2.3 兩組SLE活動期與穩(wěn)定期患者血清免疫球蛋白檢測比較

SLE患者血清IgG、IgA及IgM均明顯高于健康人群，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.50，t=8.78，t=7.14；P＜0.01)，且SLE活動期組均明顯高于穩(wěn)定期組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.86，t=4.40，t=6.57；P＜0.01)，見表3、表4。

表3 SLE患者與健康人群血清免疫球蛋白檢測比較(g/L，±s)

表3 SLE患者與健康人群血清免疫球蛋白檢測比較(g/L，±s)

注：表中IgG、IgA和IgM均為免疫球蛋白。

組別 例數(shù) IgG IgA IgM SLE組 65 14.66±4.65 4.87±1.52 1.43±0.42健康對照組 65 9.45±3.12 2.83±0.98 1.01±0.22 t值 7.50 8.78 7.14 P值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

表4 SLE活動期與穩(wěn)定期患者血清免疫球蛋白檢測比較(g/L，±s)

表4 SLE活動期與穩(wěn)定期患者血清免疫球蛋白檢測比較(g/L，±s)

注：表中IgG、IgA和IgM均為免疫球蛋白。

組別 例數(shù) IgG IgA IgM活動期 28 19.15±3.23 5.12±1.78 1.97±0.41穩(wěn)定期 37 12.76±1.97 3.65±0.86 1.43±0.25 t值 9.86 4.40 6.57 P值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

3 討論

SLE是由多種因素引起的自身免疫性疾病，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與機(jī)體免疫功能異常有關(guān)[5]。SLE可引起蝶形紅斑、發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛等癥狀，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量。SLE已成為臨床研究的熱點(diǎn)，相關(guān)研究多集中于免疫功能異常方面[6]。有研究發(fā)現(xiàn)，SLE與機(jī)體對自身抗原的免疫耐受缺失有關(guān)，免疫異常狀態(tài)下機(jī)體B淋巴細(xì)胞異常活化和增殖，產(chǎn)生大量的自身抗體和炎性介質(zhì)，損傷多個靶器官[7]。而B細(xì)胞的活化、增殖受到T細(xì)胞亞群和多種細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。因此，對T細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的研究已成為SLE的研究重點(diǎn)[8]。

T淋巴細(xì)胞亞群平衡是保證機(jī)體正常免疫功能的必要條件。外周血CD3+、CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞絕對值、CD4+/CD8+比值下降導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞亞群失衡，加劇機(jī)體免疫紊亂狀態(tài)[9]。這種失衡狀態(tài)還可誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增生，產(chǎn)生大量的自身抗體，使體液免疫功能亢進(jìn)[10]。本研究中SLE組外周血CD3+、CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞絕對值及CD4+/CD8+比值明顯低于健康對照組，但SLE活動期與穩(wěn)定期相比，除CD8+淋巴細(xì)胞絕對值較低外，其余細(xì)胞亞群絕對值均無顯著變化。這一結(jié)果提示，T淋巴細(xì)胞亞群失衡是導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)細(xì)胞免疫和體液免疫異常的根本原因，也是SLE的發(fā)病機(jī)制之一，其中CD8+淋巴細(xì)胞對病情的影響較大。

有研究發(fā)現(xiàn)，SLE患者體內(nèi)B淋巴細(xì)胞激活，引起免疫球蛋白升高，其中尤以IgG最顯著[11]。這可能是由于自身免疫反應(yīng)通過IgG產(chǎn)生抗體依賴性細(xì)胞毒性作用。免疫球蛋白可穿透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞核，進(jìn)而干擾細(xì)胞的正常功能、促使細(xì)胞凋亡[12]。本研究中SLE患者活動期組和穩(wěn)定期組IgG、IgA及IgM明顯高于健康對照組，且活動期組較穩(wěn)定期組增高更明顯。這一結(jié)果提示，IgG、IgA及IgM升高在SLE發(fā)生和病情進(jìn)展中具有重要的意義，IgG、IgA及IgM水平升高到一定程度可引起SLE急性發(fā)作。

細(xì)胞因子參與調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答，并介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，在SLE的發(fā)生和進(jìn)展中發(fā)揮重要的作用。IL-6是由單核細(xì)胞產(chǎn)生的一種促炎因子，屬于輔助性T細(xì)胞2(helper T cell，Th2)細(xì)胞因子，可刺激T細(xì)胞、B細(xì)胞的增殖、分化，促進(jìn)免疫球蛋白分泌，參與機(jī)體免疫反應(yīng)[13]。IL-18是一種新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，可直接或間接調(diào)節(jié)多種免疫活性細(xì)胞，不僅能刺激T細(xì)胞分化、增殖，誘導(dǎo)Th1細(xì)胞分化成熟，還可促進(jìn)單核細(xì)胞分泌IFN-γ，因此又稱為誘生因子[14]。IFN-γ則在細(xì)胞異常活化中發(fā)揮重要作用[15]。本研究中SLE患者活動期組和穩(wěn)定期組血清IL-6、IL-18及IFN-γ水平均明顯高于健康對照組，活動期組較穩(wěn)定期組增高更明顯。這一結(jié)果提示，細(xì)胞因子IL-6、IL-18及IFN-γ升高在SLE發(fā)生和病情進(jìn)展中具有重要的意義，高水平的IL-6、IL-18及IFN-γ可反映SLE的急性發(fā)作。

綜上所述，SLE患者T淋巴細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子、免疫球蛋白水平與健康人群相比變化明顯，并且與SLE的病情活動密切相關(guān)，可能在SLE的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。三者聯(lián)合檢測，有利于病情監(jiān)測及指導(dǎo)治療。