豬流行性腹瀉病病毒RT-PCR分子診斷及部分S基因同源性分析

宋 浩，蔣增海，薛 杰，楊 鳳，楊龍飛

(1.河南牧業經濟學院 動物醫學院，河南 鄭州 450046；2.河南省豬病防控工程技術研究中心，河南 鄭州 450046)

豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)為豬流行性腹瀉病(porcine epidemic diarrhea，PED)的病原，屬于冠狀病毒科中的冠狀病毒屬，單股正鏈RNA病毒[1]。PED的主要臨床癥狀為嘔吐、脫水和腹瀉，是一種急性、高度接觸性腸道傳染病。各種年齡的豬均易感，但仔豬危害更嚴重，發病率可達100%。自2010年以來，PEDV的流行區域逐漸擴大，給我國的養豬業造成了巨大的經濟損失[2-3]。

PEDV只有一個血清型，存在4種結構蛋白：S蛋白、M蛋白、sM蛋白和N蛋白，還有一個位于sM蛋白和S蛋白之間的ORF3，主要編碼一個功能未知的多肽性片段[4]。S蛋白由1383個氨基酸組成，劃分為S1區和S2區，并且易發生變異，因此S蛋白經常被用來研究國內外不同毒株之間的親緣性關系[5]。

2018年3月，河南省焦作市某豬場飼養母豬80多頭，母豬所產15窩仔豬幾乎全部發病死亡，出生后1～3日齡發病最嚴重，臨床表現癥狀為嘔吐、拉稀、吐奶和排黃色水樣糞便。剖檢發病仔豬，觀察到小腸充血,腸管顯著擴張，腸管內充滿透明液體。內容物稀薄、呈黃色。初步懷疑為流行性腹瀉病毒感染，取腸內容物進行豬流行性腹瀉病毒RT-PCR分析檢測，確診為流行性腹瀉病毒陽性。經了解，該豬場進行過流行性腹瀉疫苗預防，具體免疫程序：使用傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯活疫苗，冬季所有豬只普防，懷孕母豬在臨產前15d再次免疫。據調查該二聯疫苗由經典毒株制備而成。為了分析疫苗免疫失敗原因，將擴增的部分S基因產物送基因公司測序，然后將測序結果與其他毒株進行同源性分析，構建系統進化樹，研究PEDV毒株之間的親緣性。……