HPLC法測定羚貝止咳糖漿中嗎啡的含量

王天學，劉學良，魏文芝

(1.青海省食品檢驗檢測院，青海 西寧 810016；2.青海省食品藥品監督管理局食品藥品審評中心，青海 西寧 810007；3.青海省藥品檢驗檢測院/青海省中藏藥現代化研究重點實驗室，青海 西寧 810016)

羚貝止咳糖漿由紫苑(蜜)、茯苓、平貝母、罌粟殼、山楂、羚羊角等十三味中藥制成，具有宣肺化痰、止咳平喘的功效[1]，常用于治療小兒肺熱咳嗽及痰濕咳嗽[2，3]。處方中罌粟殼主要有效成分嗎啡，具有良好的鎮靜鎮咳作用，但同時具有成癮性與中樞抑制，使用不當會對人體造成危害，對于兒童常用藥，安全性尤為重要。羚貝止咳糖漿現行質量標準收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第十八冊[4]，對嗎啡無控制指標，因此為有效控制羚貝止咳糖漿中嗎啡的含量，本研究參考相關文獻[5，6]，采用高效液相色譜法對嗎啡含量進行測定。此方法簡單、可靠、重現性好，報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695-2487高效液相色譜儀(UV檢測器，Empower 3工作站，美國Waters公司)，CP225D電子天平(十萬分之一，德國Sartorius公司)。

1.2 試藥

嗎啡(中國食品藥品檢定研究院，批號171201-200822)；3批羚貝止咳糖漿樣品分別由吉林省東豐藥業股份有限公司(批號20150112)、吉林龍泰制藥股份有限公司(批號160713)、吉林敖東集團力源制藥股份有限公司提供(批號171207)；色譜乙腈(Merck)及純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Sunfire C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：乙腈：0.01 mol·L-1磷酸氫二鉀∶0.005 mol·L-1庚烷磺酸鈉溶液(18∶41∶41)；檢測波長：220 nm；柱溫：30 ℃；流速：1 mL·min-1；進樣量：5 μL。理論塔板數以嗎啡峰計不低于15 000。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液 精密稱取嗎啡對照品6.16 mg，置100 mL量瓶中，加含5 %乙酸的20 %甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻(即得每1 mL 含嗎啡 0.246 4 mg的對照品溶液)，精密量取5 mL，置20 mL量瓶中，加含5%乙酸的20%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL 含嗎啡0.061 6 mg的對照品溶液)。

2.2.2 供試品溶液 精密量取本品5 mL，加濃氨溶液1 mL，使成堿性，用三氯甲烷提取4次，每次 20 mL，合并提取液，熱水浴揮干三氯甲烷，殘渣加含5 %乙酸的20 %甲醇溶液使溶解，并定量轉移至 5 mL棕色量瓶中，加含5%乙酸的20%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 取除罌粟殼外的其他藥材飲片，按照羚貝止咳糖漿的處方工藝模擬制成陰性樣品，并按照供試品溶液制備方法進行制備，既得羚貝止咳糖漿無罌粟殼陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗

精密量取對照品溶液、供試品溶液與陰性對照溶液，按“2.1”項下的色譜條件進樣，記錄色譜圖。羚貝止咳糖漿供試品溶液色譜圖和嗎啡對照品溶液色譜圖在相應的位置上有相同的色譜峰，而陰性對照溶液在此處無色譜峰。結果表明，處方中其他成分在此色譜條件下不影響嗎啡的測定，此方法專屬性較強，可以用于羚貝止咳糖漿中嗎啡的測定。結果見圖1。

2.4 線性關系考察

分別精密吸取上述濃度為 0.246 4 mg·mL-1的嗎啡對照品溶液0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mL，分別置 10 mL棕色量瓶中，加含5%乙酸的20%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取 5 μL，按“2.1”項下色譜條件，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以嗎啡濃度(X，μg·mL-1)為橫坐標，峰面積(Y)為縱坐標，進行線性回歸，得嗎啡回歸方程：Y=3 219 780X-1 499.8，r=0.9 999。結果表明，嗎啡在2.464～246.4 μg·mL-1范圍內具有良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液(0.059 4 mg·mL-1)5 μL，在“2.1”項色譜條件下，連續進樣6次，記錄嗎啡對照品溶液峰面積，計算得出RSD為0.1%(n=6)，表明HPLC儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

精密量取由吉林東豐藥業股份有限公司生產的同一批號的樣品(批號20150112)6份，按“2.2”項制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，精密量取5 μL，測定嗎啡含量，結果平均含量為 16.38 μg·mL-1，RSD為1.2%(n=6)，表明此方法重復性良好。

圖1 HPLC色譜( 峰1為嗎啡)

2.7 穩定性試驗

精密量取由吉林東豐藥業股份有限公司生產的同一批號樣品(批號20150112)，按“2.2”項下的方法制成供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別于0、6、12、18、24 h，注入高效液相色譜儀，以嗎啡峰面積的相對標準偏差反映樣品的穩定性，測得RSD為0.99 %，表明供試品溶液中嗎啡在本研究所述實驗條件和環境中24 h內穩定。

2.8 加樣回收率試驗

精密量取已知含量的由吉林東豐藥業股份有限公司生產的同一批號的樣品(批號20150112，嗎啡含量為 16.38 μg·mL-1)6份，每份 2.5 mL，分別精密加入嗎啡對照品溶液(濃度為 0.049 28 mg·mL-1) 1 mL，按“2.2”項下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行測定，計算結果，嗎啡加樣回收率為98.8%，RSD為1.44%(n=6)，表明回收率滿足測定要求。見表1。

2.9 樣品測定

取3個廠家的3批羚貝止咳糖漿，按“2.2”項下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行測定，嗎啡含量測定結果分別為16.4、13.6、14.3 μg·mL-1，3批樣品中嗎啡含量測定結果均在此檢查方法的線性范圍內。

表1 嗎啡加樣回收率

3 結語

羚貝止咳糖漿現行質量標準控制指標少，僅針對麻黃、金銀花、陳皮三種藥味進行薄層色譜鑒別，無含量測定指標。張憲平等[7]對制劑中綠原酸進行定量測定，胡安青[8]對制劑中橙皮苷進行含量測定，對制劑中嗎啡含量的控制未見報道。

罌粟殼為罌粟科植物罌粟(PapaversomniferumL.)的干燥成熟果殼，味酸澀，性平，有毒，用于久咳、久瀉、脫肛、脘腹疼痛[9]，使用不當會引起毒副作用，不但影響疾病治療還會引起社會問題[10]，本研究建立的嗎啡HPLC測定方法，操作簡單，準確性好，可用于羚貝止咳糖漿中嗎啡的質量控制。