糖基化終產物與糖尿病及糖尿病腎病的關系

孫文利

【關鍵字】糖基化終產物；腎??；糖尿??；酶聯免疫吸附法；血清；蛋白質糖基化

糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）為全球范圍內較為常見的一種慢性基礎性疾病，糖尿病并發癥已成為導致糖尿病患者死亡的主要原因之一。研究證實，機體高血糖狀況下，蛋白質非酶促糖基化生成的糖基化終產物（advanced glycosylation end products，AGEs）致病作用較大[1]，AGEs與糖尿病并發癥程度有緊密聯系。糖尿病慢性并發癥之一則為糖尿病腎病，若早期不接受相應診治，疾病發展到一定階段，AGEs增高。所以，人體心肌、腎臟、血清等組織AGEs指標可用來監測糖尿病、糖尿病腎病病情狀況?，F納入我院2016年3月—2018年5月收治的40例糖尿病、40例糖尿病腎病和40例健康者重點討論AGEs水平與疾病之間的關系。具體報告如下：

1 資料及方法

1.1 一般資料

隨機從我院2016年3月—2018年5月收治的糖尿病、糖尿病腎病患者中各抽取40例進行討論，分別納入糖尿病組、糖尿病腎病組，另選取同時期到我院體檢健康者40例作為對照組。入選標準：（1）40例糖尿病和40例糖尿病腎病患者均接受血糖等檢查確診滿足《2012年糖尿病診療指南》[2]《中國糖尿病診療指南解讀——糖尿病腎病》[3]中糖尿病、糖尿病腎病診斷標準；（2）納入研究前患者均未接受相應治療干預；（3）本研究經我院倫理委員會同意，且患者及其家屬均同意知曉本研究；（4）病歷資料齊全。排除標準：（1）精神、智力障礙者；（2）中途脫落研究者；（3）合并其他并發癥者；（4）肝腎、心腦等功能嚴重異常者。對照組：男性22例，女性18例，年齡36～78歲，平均為（56.3±1.2）歲；糖尿病組：男性23例，女性17例，年齡35～79歲，平均為（56.7±1.1）歲；糖尿病腎病組：男性22例，女性18例，年齡36～78歲，平均為（56.7±1.1）歲。各組患者基本資料差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

制備抗原：將核糖核酸酶25 g、牛血清白蛋白50 g加入到葡萄糖1 mol/L中，溶于磷酸鹽緩沖液0.2 mol/L中，用微量過濾器濾除細菌，37℃環境下，孵育3個月。并制備糖化牛血清白蛋白（AGE-BSA）、糖基化終末產物（AGE-RNase）。用磷酸鹽緩沖液0.01 mol/L，透析72小時，并將未結合的葡萄糖去除。用熒光分光光度計（RF-540/V4.0型）測定AGEs熒光值，發射波長為440 nm，激發波長為370 nm。

制備抗AGEs抗體：充分乳化弗氏不完全佐劑2 mL和AGERNase 20 g/L，用兔子做實驗對象，多點注射，每間隔1周注射1次，共注射4次。最后一次注射后，實施加強免疫，持續8～10 d，抽取靜脈血，抗體效價用瓊脂雙向擴散法測定。如效價低，則實施一次加強免疫。直至抗體效價理想時，抽取其頸動脈血液，分離血清，將其放置于零下20℃環境下備用。

抽取3組研討對象空腹靜脈血液5 mL，離心處理后，分離血清，并將其放置在零下20℃環境中保存，用酶聯免疫吸附法測定其血清AGEs指標。

1.3 指標判定

本研究中各檢驗均由我院檢驗科專業且工作經驗豐富的2名醫生負責，若發生意見分歧，則商討確定。

1.4 統計學方法

用統計學軟件SPSS 13.0版本分析數據，計量資料用（±s）表示，采用t檢驗，計數資料用（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

比較3組研討對象AGEs指標，DM組、DN組高于對照組，DN組高于DM組，組間數據差異有統計學意義（P＜0.05）。詳見表1。

3 討論

蛋白質糖基化也稱羰氨反應（Maillard反應）[4]，非酶參與狀況下，葡萄糖可自發結合蛋白質游離氨基，生成阿美多米（Amadori）物質，此物質經相應轉變后可生成不可逆AGEs，發生蛋白質交聯，干擾其功能、結構，與特異性受體一起對單核巨噬細胞產生活化功效，激活轉錄因子，促進釋放和合成生長因子，氧化應激受到誘導，進而損傷組織細胞。目前已知糖尿病、糖尿病腎病患者組織、血清中AGEs指標明顯增高，血清AGEs指標上升的原因可能為腎臟清除功能減少和生成多導致。AGEs為混合物，多樣性結構，所以，檢測組織和血清中AGEs指標有一定難度?，F臨床所使用的檢測方式均具有一定缺陷性[5]，如準確性不高、設備條件要求高、無法廣泛推廣等。本研究中采用酶聯免疫吸附法進行檢測，利用固相抗原與待測抗原競爭結合來反應AGEs水平。相比與其他方式，此方式具有精確性好、特異性高、成本低、快速簡便等優勢，且可在普通實驗室使用[6-7]。目前用酶聯免疫吸附法測定AGEs指標，可實現普查糖尿病、糖尿病腎病的目的，以早期診治疾病，并動態監測疾病發病和并發癥狀況[8-9]。但因人們生活方式和飲食習慣不同，目前仍然無法測定健康人群AGEs標準范圍。研究報告指出，AGEs生成量與葡萄糖濃度有一定關系，血糖濃度正常狀況，AGEs生成速度較為緩慢[10-11]。但若血糖指標增高時，AGEs生成速度顯著增快，所以，糖尿病患者體中則大量蓄積AGEs[12-13]。而人體體內循環時，多由腎臟清除AGEs，研究表明，糖尿病腎病患者AGEs水平顯著高于糖尿病患者，而給予血液透析是否可降低AGEs水平，目前暫無明確定論。

表1 比較3組研討對象AGEs指標（±s）

表1 比較3組研討對象AGEs指標（±s）

注：與對照組比較，#t=20．489 2，*t=31．281 3，#P=0．000 0，*P=0．000 0；與 DN 組比較，#t=10．678 9，#P=0．000 0

組別 例數 AGEs（mg/L）DM 40 21．23±6．21#DN 40 33．12±9．32*對照組 40 10．62±3．11

綜上所述，經分析后得知，AGEs指標在診斷糖尿病、糖尿病腎病中有一定作用，但臨床還需綜合其他診斷指標進行確診，以確保診斷準確性。