急性髓性白血病外周血T淋巴細胞亞群的研究

陳榮伴 鄒茂權 梁惠如 譚美仲 蔡美霞

急性髓性白血病是一種血液疾病，是由于骨髓積累大量白血病細胞，正常造血功能受到抑制，臨床表現為貧血、發熱、骨骼疼、出血等，具有較高的發病率[1]。引發白血病的因素有很多，如病毒因素、化學因素、放射因素等，隨著人們生活方式與飲食方式的改變[2]，急性髓性白血病的發病率不斷增加。機體在正常狀態下，免疫細胞可對突變腫瘤細胞進行清除，促進機體維護正常的生理功能[3]，免疫功能與白血病發生與發展密切相關。對于發生白血病后的機體免疫細胞功能與細胞數量并非完全清楚，為了對此有更好的了解，本文將以我院2016年4月—2018年4月急性髓性白血病患者為對象，探究急性髓性白血病外周血T淋巴細胞亞群的研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年4月—2018年4月30例血液科急性髓性白血病患者，作為研究組，選取同期50例體檢健康者，作為參照組。其中參照組患者中，男女患者分別為27例與23例，年齡為18～46歲，平均年齡為（32.73±5.35）歲。研究組患者中，男女患者分別為18例與12例，年齡為19～46歲，平均年齡為（32.89±5.21）歲。納入標準：（1）資料齊全；（2）以1986年《全國血液學家綜合國內外關于急性白血病分型》為診斷標準，研究組確診為該疾病；（3）認知正常；（4）符合本次研究的標準，均熟知本次研究的標準，并表示自愿參加。排除標準：（1）研究組：藥物過敏，精神障礙，其他惡性腫瘤；免疫性疾??；不配合研究者。（2）參照組：不配合研究者。在統計軟件SPSS 19.0中將研究組和參照組患者的基本信息輸入，組間差異無統計學意義，P＞0.05。

1.2 方法

檢測方法：所有試驗者晨起空腹，抽取3 mL靜脈血，取無菌乙二胺四乙酸二鈉抗凝管將其置入，混勻，并備用。于血氧采集后的2 h內，取無菌PBS緩沖溶液按照1∶1的比例對抗凝血進行稀釋，對單個細胞核使用淋巴細胞分離液進行分析，取DMEM細胞培養液，將細胞濃度調整至2×106個/mL。隨后，抽取上述的細胞懸液100μL，加入CD3抗體、CD4抗體、CD8抗體，在4℃的避光環境下靜置0.5 h，進行離心操作，設定參數800 rpm，時間10 min，使用PBS緩沖液進行洗滌，共計2次，將上清取出，加入染色緩沖液適量，行上流式細胞儀進行分析。

1.3 觀察指標

對比治療前、完全緩解者、健康者的CD3+百分比、CD4+百分比、CD8+百分比，以及CD4+/CD8+比值，進行統計學分析。

表1 治療前、完全緩解者、健康者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值比較 （±s）

表1 治療前、完全緩解者、健康者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值比較 （±s）

注：研究組與參照組患者相比，t=8．108 7，6．821 9，6．358 9，3．303 7，aP＜ 0．05。研究組與完全緩解組患者相比，t=7．293 8，6．265 9，5．927 7，2．924 7，aP＜ 0．05

組別 n CD3+（%） CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+比值研究組 30 31．67±20．89a 18．27±12．69a 14．88±3．17a 1．23±0．87a參照組 50 64．82±15．51 40．43±14．82 24．37±7．78 1．79±0．64完全緩解 23 70．45±16．67 42．75±15．76 25．68±9．32 1．82±0．48

CD3+百分比、CD4+百分比、CD8+百分比：取標本放于高倍鏡下進行觀察，計數100～200個單數細胞核，對陽性細胞的百分率進行計算。

1.4 統計學方法

將研究中的各項數據結果輸入軟件SPSS 19.0進行證實，計數資料以（%）表示，組間予以χ2檢驗，計量資料以（±s）表示，組間予以t檢驗， P＜0.05，則表示差異有統計學意義。

2 結果

研究組30例患者在經過系列放療后，完全緩解共23例。對比參照組與研究組的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值，研究組明顯低于參照組，組間差異有統計學意義（P＜0.05）。對比參照組與完全緩解組患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值，組間差異無統計學意義（P＞0.05）。對比研究組與完全緩解組患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值，研究組明顯低于完全緩解組，組間差異有統計學意義（P＜0.05）。如表1。

3 討論

白血病又稱血癌，屬于惡性腫瘤的一種，治療困難，難以治愈，分為急性白血病與慢性白血病，其中急性白血病具有發病迅速、病程短等特點，慢性疾病病程長[4]。急性隨性白血病的病因不明[5]，與多種因素有關，如病毒感染、化學物質、免疫功能、遺傳因素、電離輻射等。大量臨床實踐表明，T淋巴細胞對腫瘤發生、發展與治療具有重要作用。又有研究表明，急性隨性白細胞患者多伴隨T淋巴細胞亞群的數量改變與功能損害[6]。臨床為此展開大量體外實驗，表明CD4細胞能夠非特異性或者特異性對腫瘤細胞進行殺死。不管免疫刺激因子是否存在，CD4細胞與白血病細胞放置于一起，并經過幾天的孵育以后，均表現出特異性的抗白血病細胞毒的作用[7]。可對此結果證實的直接依據為淋巴細胞在去除后行骨髓抑制，白血病容易復發；在對骨髓移植后的復發者使用CD4淋巴細胞輸注后，得到完全緩解。由此可得出，CD4細胞參與白血病的控制[8]，且具有重要意義。有研究提出，免疫缺陷患者極易并發腫瘤，高達10%，與白血病引發免疫功能異?？赡艽嬖谙嚓P性，對其發病機制、免疫監護功能障礙進行推測[9]，無法捕捉、消滅和區別與不正常細胞之間存在的關系。T淋巴細胞屬于免疫效應細胞，也是免疫調節細胞，為細胞免疫中重要族群之一。臨床以人體成熟T淋巴細胞表明的表達，將CD分子分為CD3+、CD4+、CD8+[10]，其數量與比值對免疫內環境維持穩定具有重要意義。

近年來，有研究表明，淋巴細胞參與了機體造血過程，血液病的發生與發展均對淋巴細胞亞群產生影響，使其發生變化。部分研究中顯示，急性隨性白血病患者的T淋巴細胞亞群存在改變，其中包括比例、功能與數量，這充分說明了髓性白血病患者的免疫功能存在缺陷[11]。

本次研究結果顯示，研究組30例急性髓性白血病治療前的CD3+、CD4+、CD8+、CD3+/CD4+比值低于50例健康者，組間差異有統計學意義（P＜0.05）；在經過系列化療后，23例急性髓性白血病患者完全緩解，其CD3+、CD4+、CD8+、CD3+/CD4+比值明顯高于治療前，且與健康組相比，具有可比性。對此結果進行分析，急性髓性白血病患者機體免疫力表現為抑制，細胞免疫功能明顯紊亂[12]，在病情緩解的同時，T淋巴細胞亞群數量逐漸恢復，直至正常。由此可見，急性髓性白血病病情與T淋巴細胞亞群數量與比例存在相關性，同時T淋巴細胞亞群能夠作為判斷白血病抗腫瘤的免疫情況有效指標之一，促進患者免疫功能調節，從而輔助疾病治療。

綜上所述：急性髓性白血病T淋巴細胞亞群具有明顯變化，在經過有效治療后恢復正常，證明了白血病發生、發展與轉歸均影響細胞免疫。