大豆卵磷脂作為冷凍保護劑對澳洲白綿羊精液品質(zhì)的效果試驗

陳廣仁，王曉平，潘曉榮，袁 勇，李 巖

(甘肅省畜牧業(yè)產(chǎn)業(yè)管理局，甘肅 蘭州 730030)

1 材料與方法

1.1 試驗動物的飼養(yǎng)管理

6只雄性澳洲白綿羊，平均月齡21.4±4.1，平均體重80.2±2.5 kg。單欄飼養(yǎng)，自由飲水。早8點晚6點，定量投料，粗飼料含苜蓿30%、全株玉米青貯40%、大麥秸稈30%；精料含豆粕14%、菜粕8%、DDGS 12%、麩皮5%、玉米55%、種羊用預混料15%、食鹽1%，總蛋白17.36%。在訓練采精前15 d開始每天增加胡蘿卜500 g/只，采精期間每羊每天補充2枚雞蛋。利用假陰道法在有發(fā)情母羊的情況下訓練采精。

1.2 公羊體重與陰囊周長的測定

訓練公羊采精后，即采精實驗期間，當天稱重；同時利用皮卷尺在陰囊最大直徑處測量陰囊周長，重復三次測量，取平均值。

1.3 精液采集與冷凍保存

采集精液后，將5微升精液于潔凈載玻片上，顯微鏡下觀察，精子密度≥20億、精子活力≥70%，并且精子畸形率≤20%的精液才能夠冷凍保存。先將每只羊的精液平均分為2份，分別用含大豆卵磷脂BioXcell和含卵黃Optidyl將精液進行兩部分冷凍。

1.4 精液品質(zhì)檢測

1.4.1 精子活力檢測

取出冷凍后的精子，于37℃水中 30 s。取 5 μL精液滴加于 Leja玻片腔室中，置于精液輔助分析儀下分析精液運動參數(shù)。

1.4.2 精子頂體完整率和DNA完整性分析

利用精子頂體染色試劑盒PSA-FITC進行精子頂體完整率檢測，利用精子染色體擴散實驗進行DNA完整性分析。

1.4.3 統(tǒng)計分析

對同一只公羊采精8次，對每一次的精液質(zhì)量進行檢測，取平均值；每只羊的精液冷凍實驗至少3次，解凍后的常規(guī)質(zhì)量和頂體完整率、DNA完整率等分析。采用 SPSS 21.0軟件中的One-Way AVNOVA對結(jié)果進行差異顯著性分析，分析結(jié)果用平均值±標準差表示。

2 結(jié)果

2.1 公羊體重與陰囊周長的測定結(jié)果

由于種公羊的體重在一定范圍內(nèi)與陰囊的大小呈正相關(guān)，而陰囊大小直接關(guān)系到每次射精的總精子數(shù)量。對澳洲白綿羊進行評定，發(fā)現(xiàn)公羊體重與陰囊周長之間相關(guān)系數(shù)R2＝0.98（圖1），而陰囊周長與每次射精精子總數(shù)之間的相關(guān)系數(shù) R2＝0.99(圖 2)。

圖1

圖2

表1

2.2 種公羊鮮精品質(zhì)評定

通過表1可以看出澳洲白種公羊每次射精量約 1.0 mL，精液密度約為 19～32×108 個/mL，精子活力最低為73%，最高為81%，頂體完整率都在71%～76%之間，而精子DNA完整率在68%～74%之間。同時發(fā)現(xiàn)所有種公羊每次采取的精液外觀都為乳白色，略帶腥味。

2.3 兩種冷凍保護劑的效果比較

從表2可以發(fā)現(xiàn)含有大豆卵磷脂分冷凍保護劑BioXcell在頂體完整率、DNA完整率以及精子直線速度方面現(xiàn)在高于卵黃冷凍保護劑Optidyl；而在精子活力、曲線速度以及評價路徑速度方面兩種冷凍保護劑無顯著性差異。

表2

3 討論

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)引進甘肅河西走廊地區(qū)的澳洲白種公羊鮮精質(zhì)量指標分別為：精液量0.93±0.4 mL、精子密度 25.5±4.1 億/mL、精子活力0.78±0.09、 頂體完整率 0.73±0.04、DNA 完整率0.72±0.05。同時發(fā)現(xiàn)公羊體重與陰囊周長成正比例關(guān)系（R2＝0.98），陰囊周長與每次射精量呈正相關(guān)（R2＝0.99）。用含大豆軟磷脂 BioXcell對澳洲白種公羊精液進行冷凍保存，在頂體完整率和DNA完整率方面顯著優(yōu)于含卵黃Optidyl。