丙氨酸氨基轉移酶的參考方法與Beckman DxC 800檢測系統測定結果的比對研究

申 彬,楊澤華

(山西醫科大學第一醫院檢驗科,太原 030001;*通訊作者,E-mail:zehuay026@163.com)

丙氨酸氨基轉移酶(ALT)在人體肝臟中含量最多、活性最高,輕微的肝細胞受損,ALT活性可增高1倍,是肝功能受損最靈敏的指標之一,各種肝臟疾病均可引起ALT的升高,臨床上主要用于肝臟疾病的診斷。目前ALT的檢測是在自動生化分析儀上,時常面臨著同一份標本在同一實驗室內不同檢測系統間進行檢測時出現檢驗結果不一致的現狀,不同的臨床化學實驗室的檢驗差異就更大[1],而且酶學檢測對反應條件具有依賴性,使不同的檢測方法間的結果可比性差[2],從而使檢驗結果具有不確定性。ISO/15189(醫學實驗室-質量和能力的專用要求)[3]對檢驗結果的溯源性和可比性提出了明確要求,強調方法學比較試驗(比對試驗)是實現準確度溯源和病人標本檢驗結果可比性的重要途徑。國際臨床化學與實驗醫學聯盟(IFCC)于2002年曾發表7個系列性文件,針對包括ALT在內的參考測定程序,提出了參考測量系統,并希望所有試劑廠商及實驗室向其靠攏,以實現檢測方法的一致性[4]。本實驗依據美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)EP9-2A文件和IFCC提出的ALT參考方法,以參考方法作為比較方法,Beckman DxC800作為實驗方法,對測定結果進行比對和偏倚分析,并判斷其臨床可接受性。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 SHIMADZU UV-2450紫外分光光度計、SHIMADZU-TCC比色杯恒溫電子控制裝置、恒溫水浴箱、SHIMADZU電子天平、pH計、電子溫度計、Finnpipette移液器和容量瓶、各種高精密度玻璃器皿;Beckman DxC 800生化分析儀。

1.1.2 試劑 參考方法按照國際臨床化學與檢驗醫學聯合會(IFCC)推薦的丙氨酸氨基轉移酶參考測量程序配制試劑[5]。還原型-β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸二鈉鹽(NADH)、乳酸脫氫酶(LDH)均購自Sigma公司,氯化鈉(NaCl)、疊氮鈉(NaN3)、氫氧化鈉(NaOH)、鹽酸(HCl)購自北京化工;三羥甲基氨基甲烷(Tris)、L-丙氨酸、α-酮戊二酸二鈉鹽、牛血清白蛋白、丙酮酸鈉購自上海生工。Beckman DxC 800生化分析儀采用貝克曼庫爾特公司配套ALT(無磷酸吡哆醛)診斷試劑、校準品及質量控制品。

1.1.3 標本來源 收集本院患者新鮮血清共40份,編號為1-40,血清ALT濃度按照NCCLS EP9-2A文件[6]中方法比對的實驗數據分布建議收集,標本無脂血、溶血、黃疸。

1.2 方法

1.2.1 參考方法的建立 按照IFCC推薦的參考測量程序建立ALT的參考方法[7](為不加磷酸吡哆醛方法)。

1.2.2 方法的選擇 以參考方法作為比較方法(X),Beckman DxC 800檢測系統作為實驗方法(Y)。

1.2.3 方法學比較 每天測定8份新鮮患者血清,隨機編號1,2,3,4,5,6,7,8,每份血清分別用比較方法(X)和實驗方法(Y)測定,每種方法重復測定2次,第1次測定順序為1-8,第2次測定順序為8-1,連續測定5 d,共得到40組數據。

1.3 數據的統計與處理

1.3.2 相關性和回歸分析 EP9-2A提出,r>0.975或r2>0.95說明測定范圍合適,回歸方程的截距和斜率可靠。

1.3.3 偏倚評估和可比性評價 將ALT給定的醫學決定水平濃度帶入回歸方程,計算系統誤差(SE)和相對偏差(SE%),SE%≤1/2CLIA’88允許總誤差(TEa)屬臨床可接受水平。

2 結果

2.1 方法內重復值的離群點檢驗

2.2 方法間離群點檢驗

2.3 回歸分析及r2檢查

以X和Y進行相關回歸分析,得到回歸方程Y=1.005X+0.310 9,r2=0.999 8>0.95,表明X分布范圍合適,回歸方程的斜率和截距可靠。

圖1 ALT雙份值均值的散點圖Figure 1 Scatter plots of the mean value with double of ALT

2.4 兩個系統的偏倚評估和可接受性評價

將不同濃度的醫學決定水平(Xc)帶入回歸方程,計算偏倚和相對偏倚,可見所有濃度的相對偏倚均為臨床可接受,結果見表1。

圖2 ALT雙份值均值的偏倚圖Figure 2 Bias plots of the mean value with double of ALT

表1ALT在醫學決定水平處(Xc)的可接受性評價

Table1EvaluationofALTacceptabilityatthemedicallydeterminedlevel(Xc)

Xc(U/L)Y估計值(U/L)SE%(%)1/2CLIA’88(%)2020.42.086060.61.08300301.80.68

3 討論

圖1散點圖中,在標度上的差別可以用來決定非線性關系,在全部測定范圍內,檢查比較方法(X)和實驗方法(Y)的數據圖是否有線性關系,可得測定ALT的結果在兩方法間呈良好的直線相關,可以進行下一步檢驗。圖2的偏倚圖中,在標度上的差別可以用來決定非線性關系,在全部測定范圍內,比較方法的均值和兩方法的均值之差分布在X=0中線附近。比較方法(X)的測定范圍可以用相關系數r做估計,如果r≥0.975(或r2≥0.95)則可以認為比較方法(X)分布范圍合適,以上得到數據r2=0.999 8>0.95,表明比較方法(X)的分布范圍合適,回歸方程的斜率和截距可靠[8]。ALT在3個醫學決定水平Xc處的估計值、允許誤差見表1,可以看出估計值在允許范圍內均符合要求。本研究采用的允許誤差判斷標準為1/2CLIA’88,是中國衛生部臨床檢驗中心推薦并使用的標準[9]。由于CLIA’88應用范圍比較廣泛,是室間質量評價的標準之一,其體現的是可接受方法誤差的總誤差(隨機誤差+系 統誤差)的最低水平,而且EP9-2A文件提供的方法只是從引入系統誤差大小上考慮,并沒有將隨機誤差考慮在內,所以本實驗將CLIA’88允許誤差的1/2作為方法比對檢測系統的結果系統誤差的允許限值,以使其結果更有說服力[10]。結論得出,ALT在Beckman DxC 800檢測系統的測定結果在比較范圍內與參考方法(X)具有可比性。臨床可接受性能的評價未超過1/2CLIA’88規定允許誤差,說明可比性符合臨床要求。在不同的實驗室之間,或在同一實驗室不同儀器之間所存在的差別,可以通過與參考方法進行方法學比對研究,因為參考方法具有溯源性,這樣才能保證檢測結果的準確性與可靠性,從而為臨床提供可靠的檢測結果,滿足臨床診斷的需要。