2 573例孕婦妊娠中期羊水染色體核型分析*

藍(lán)慧娟，邵聰文，熊禮寬△

(1.深圳市寶安區(qū)婦幼保健院中心實驗室,廣州深圳518102;2:深圳市出生缺陷醫(yī)學(xué)研究重點實驗室，廣州深圳 518102)

染色體疾病是導(dǎo)致新生兒出生缺陷的主要病因之一。常見染色體病有21三體綜合征、18三體綜合征、13三體綜合征等，一般臨床表現(xiàn)為生長和智力發(fā)育遲緩，并伴有先天多發(fā)畸形。染色體病目前尚無良好的治療方法，只能通過行產(chǎn)前診斷確診后終止妊娠。產(chǎn)前診斷篩查高風(fēng)險孕婦通過產(chǎn)前遺傳咨詢后進(jìn)行羊水染色體核型分析，以確診胎兒是否患有染色體遺傳疾病。本文就2 573例來深圳市寶安區(qū)婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心進(jìn)行產(chǎn)前遺傳咨的孕婦進(jìn)行羊水染色體檢測，并對其檢測結(jié)果進(jìn)行分析，以期獲得異常核型類型及其檢出率情況。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2011年3月至2016年8月在深圳市寶安區(qū)婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心咨詢門診就診，經(jīng)產(chǎn)前常規(guī)檢查、遺傳咨詢符合產(chǎn)前診斷指征并簽署知情同意書的2 573例孕婦為研究對象。產(chǎn)前診斷指征包括高齡(生產(chǎn)年齡≥35歲)、無創(chuàng)產(chǎn)前篩查高風(fēng)險、唐氏篩查高風(fēng)險(血清學(xué)方法)、B超異常，如胎兒頸部透明帶(NT)增厚，鼻骨發(fā)育不良，胎兒多發(fā)畸形等。孕婦年齡16～45歲，平均年齡29歲，孕周17～24周，平均孕周19周。

1.2方法 B超監(jiān)護(hù)下經(jīng)母腹羊膜腔穿刺，無菌抽取羊水20 mL。采用雙人雙線法接種收獲羊水細(xì)胞，具體步驟為羊水1 500 r/min 離心10 min，無菌操作棄上清液，余0.5～1.0 mL制成細(xì)胞懸液，分別接種于兩種不同羊水培養(yǎng)基，5% CO2，37 ℃ CO2培養(yǎng)箱靜止培養(yǎng)7 d，倒置顯微鏡下觀察羊水細(xì)胞生長情況，當(dāng)羊水細(xì)胞生長旺盛可收獲時換液，次日進(jìn)行常規(guī)染色體收獲，制片，G顯帶。按照人類細(xì)胞遺傳學(xué)國際命名體制(ISCN2013)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行核型分析，選擇良好中期分裂相計數(shù)20以上，分析5個核型，染色體核型嵌合加大計數(shù)至100。對出現(xiàn)染色體多態(tài)核型進(jìn)行C顯帶，染色體嵌合體孕婦建議進(jìn)一步抽取孕婦臍血染色體檢測，染色體結(jié)構(gòu)異常孕婦建議進(jìn)行染色體微陣列分析技術(shù)檢測，按Agilent微陣列比較基因組雜交(aCGH)芯片平臺要求進(jìn)行試驗操作，或者其他方法檢測胎兒是否存在微缺失和微重復(fù)，并抽取胎兒父母外周血進(jìn)行核型分析以確定異常結(jié)構(gòu)染色體來源。對所有行羊水染色體核型檢測的孕婦進(jìn)行妊娠追蹤隨訪。

2 結(jié) 果

2.1數(shù)目異常染色體核型分析結(jié)果 2 573例妊娠中期孕婦羊水染色體核型分析結(jié)果檢出異常染色體140例，異常核型檢出率為5.44%(140/2 573)；其中染色體數(shù)目異常109例(包括嵌合體)，檢出率為4.24%(109/2 573)。109例染色體數(shù)目異常中21三體綜合征50例，檢出率為1.94%(50/2 573)，其中標(biāo)準(zhǔn)型(47,XN,+21)45例，嵌合體5例；18三體綜合征21例，檢出率為0.82%(21/2 573)；13三體綜合征5例，檢出率為0.19%(5/2 573)；其他染色體數(shù)目異常2例；性染色體數(shù)目異常31例(包括嵌合體)，檢出率為1.20%(31/2 573)。見表1。

2.2結(jié)構(gòu)異常染色體核型分析結(jié)果 2 573例妊娠中期孕婦羊水染色體核型分析結(jié)果檢出結(jié)構(gòu)異常染色體31例，檢出率為1.20%(31/2 573)，其中易位型核型15例，檢出率為0.58%(15/2 573)；倒位9例，檢出率為0.35%(9/2 573)；衍生5例，檢出率為0.19%(5/2 573)；缺失2例,檢出率為0.08%(2/2 573)，其中5例衍生結(jié)構(gòu)異常中46,XN,der(14;21)(q10;q10),+21(2例)和46,XN,+21,der(21;21) (q10;q10) (1例)為易位型21三體綜合征。見表2。31例結(jié)構(gòu)異常核型父母外周血核型分析結(jié)果顯示，5例衍生核型和2例缺失染色體核型中均有1例為新發(fā)突變，其他結(jié)構(gòu)異常均遺傳自父母。芯片檢測結(jié)果顯示，5例衍生核型和2例缺失染色體核型出現(xiàn)大片段的基因缺失或重復(fù)，15例易位和9例倒位核型芯片結(jié)果正常。隨訪15例易位和9例倒位核型共有3例失聯(lián)，其他繼續(xù)妊娠，均足月產(chǎn)，出生后隨訪無異常情況。5例衍生核型和2例缺失染色體核型綜合B超等其他檢測結(jié)果選擇終止妊娠。

表1 109例產(chǎn)前診斷羊水染色體數(shù)目異常核型

注:表格中的N代表X或Y

表2 31例產(chǎn)前診斷羊水染色體結(jié)構(gòu)異常核型

注:表格中的N代表X或Y

表3 109例產(chǎn)前診斷羊水染色體多態(tài)核型

注:表格中的N代表X或Y

2.3多態(tài)染色體核型分析結(jié)果 2 573例妊娠中期孕婦羊水染色體核型分析結(jié)果檢出109例，檢出率為4.24%(31/2 573)。主要核型類型為46,XN,1qh+57例，檢出率為2.22%(57/2 573)；46,XN,inv(9)21例，檢出率為0.82%(21/2 573)；46,XN,16qh+12例，檢出率為0.47%(12/2 573)；46,XN,9qh+9例，檢出率為0.35%(9/2 573)。見表3。109例多態(tài)核型中95例進(jìn)行父母外周血核型分析，分析結(jié)果顯示90例來源親代遺傳，5例為新發(fā)多態(tài)核型，綜合其他產(chǎn)前診斷結(jié)果建議孕婦繼續(xù)妊娠隨訪無異常；5例拒絕行外周血染色體檢測繼續(xù)妊娠分娩隨訪無異常；9例繼續(xù)妊娠后失聯(lián)。

3 討 論

中國是出生缺陷高發(fā)國家，出生缺陷對患兒家庭及社會都造成了極大的精神壓力和經(jīng)濟(jì)壓力。染色體異常可造成胎兒多種先天性發(fā)育畸形或胚胎停育，出生的染色體異常患兒存在明顯的智力低下、生長發(fā)育遲緩、畸形等異常表現(xiàn)，目前尚無有效治療方法。對孕婦進(jìn)行產(chǎn)前診斷可降低出生缺陷發(fā)生率，預(yù)防染色體異常胎兒出生。

本文通過羊膜腔穿刺術(shù)抽取符合產(chǎn)前診斷指針，且孕周17～24周的2 573例孕婦羊水20 mL，進(jìn)行羊水細(xì)胞培養(yǎng)和G顯帶核型分析，檢出140例異常羊水染色體核型，檢出率為5.44%；其中染色體數(shù)目異常109例(包括嵌合體)，檢出率為4.24%。數(shù)目異常中21三體綜合征50例(包括嵌合體)，檢出率為1.94%(50/2 573)；18三體綜合征21例(包括嵌合體)，檢出率為0.82%(21/2 573)；13三體綜合征5例(包括嵌合體)，檢出率為0.19 %(5/2 573)；其他染色體數(shù)目異常2例；性染色體數(shù)目異常31例(包括嵌合體)，檢出率為1.20%(31/2 573)。在染色體數(shù)目異常中21三體綜合征的檢出率最高，21三體綜合征即唐氏綜合征(Down′s syndrome)是最常見的染色體異常疾病，主要表現(xiàn)為先天性智力低下，特殊面容，生長發(fā)育障礙，部分伴有其他嚴(yán)重多發(fā)畸形，21三體綜合征在不同國家不同患者之間存在不同的臨床表型[1]。其發(fā)病主要機(jī)制是由于生殖細(xì)胞在減數(shù)分裂時不分離所致，孕婦年齡越大，發(fā)生率越高。隨著社會飛速發(fā)展，人們的生活環(huán)境也發(fā)生了很大變化，郝小燕[2]在分析滄州地區(qū)100例21三體綜合征的病因時，認(rèn)為母親生育年齡不是21三體綜合征患兒出生的主要因素，環(huán)境因素與21三體綜合征的發(fā)生有密切關(guān)系。目前，無創(chuàng)產(chǎn)前檢測作為一種安全、快速的產(chǎn)前篩查手段已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床，羅麗雙等[3]分析5 756例孕婦外周血胎兒游離DNA無創(chuàng)產(chǎn)前篩查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，21三體綜合征陽性預(yù)測值為86.00%。本文檢出50例數(shù)目異常21三體綜合征和3例結(jié)構(gòu)異常的易位型21三體綜合征,其中標(biāo)準(zhǔn)型(47,XN,+21)45例，占總21三體綜合征的84.91%(45/53)；嵌合體5例占總21三體綜合征的9.43%(5/53)；易位型3例，占總21三體綜合征的5.66%(3/53)，其核型分布頻率與張聞等[4]報道的一致。性染色體數(shù)目異常包括嵌合體一共檢出31例，其中9例Turner綜合征,9例克氏綜合征，45,X/46,XX(XY)5例，47,XXY/46,XY 2例，47,XXX/46,XX 2例，其他類型嵌合體4例。

羊水染色體檢測主要采用G顯帶核型分析法，無法排除染色體微小結(jié)構(gòu)異常，aCGH技術(shù)可檢測染色體微小缺失[5-6]，如Pallister-Killian綜合征[7-8]、DiGeorge綜合征[9]等，彌補染色體核型分析的不足。31例結(jié)構(gòu)異常核型檢出易位核型15例，檢出率為0.58%(15/2 573)；倒位核型9例，檢出率為0.35%(9/2 573)；衍生染色體核型5例，檢出率為0.19%(5/2 573)；缺失核型2例，檢出率為0.08%(2/2 573)。31例結(jié)構(gòu)異常核型進(jìn)行父母外周血核型分析及aCGH檢測。結(jié)果顯示，羊水中15例易位核型和倒位核型均來自胎兒父母，無微缺失和微重復(fù)，且父母表型正常但有不同程度的反復(fù)流產(chǎn)或不良孕產(chǎn)史，孕婦選擇繼續(xù)妊娠，隨訪中1例羊水易位核型和2例Y倒位核型孕婦失聯(lián)，其他均足月產(chǎn)，隨訪無其他異常情況。根據(jù)父母外周血染色體核型檢測結(jié)果及aCGH檢測結(jié)果表明，5例衍生染色體核型和2例缺失染色體核型中有5例異常染色體來源父母，2例異常染色體核型為新發(fā)突變，均存在大片段的染色體缺失或重復(fù)。在非平衡染色體結(jié)構(gòu)異常核型病例孕婦中常存在超聲異常[10],本研究中7例非平衡染色體結(jié)構(gòu)異常孕婦5例超聲存在異常，如46,XN,der(6)t(6;10)(p25;q21)核型孕婦超聲顯示胎兒存在多發(fā)畸形。46,XN,der(4)t(3;4)(q26.2q34)核型孕婦超聲顯示，胎兒Ⅲ度唇腭裂。aCGH結(jié)果顯示，在3q26.2q29處存在拷貝數(shù)重復(fù)，大小為31.0 Mb，在4q34.2q35.2處存在拷貝數(shù)缺失，大小為14.3 Mb，該區(qū)域包含多個OMIM疾病致病基因，4q缺失綜合征的缺失片段4q35.1q35.2在此區(qū)域，4q缺失綜合征的發(fā)生率為1/100 000～1/50 000，臨床表型有唇腭裂、先天性心臟病、智力障礙、孤獨癥譜系和發(fā)育遲緩等[11-12]與本例胎兒超聲顯示Ⅲ度唇腭裂的臨床表型相符。結(jié)合超聲等其他產(chǎn)前檢查結(jié)果，7例非平衡染色體結(jié)構(gòu)異常孕婦選擇終止妊娠。孟卓等[13]研究發(fā)現(xiàn)，使用aCGH技術(shù)進(jìn)行分析比傳統(tǒng)染色體核型技術(shù)能提高胎兒唇腭裂異常檢出率。除aCGH檢測技術(shù)外，目前應(yīng)用于產(chǎn)前診斷的還有單核苷酸多態(tài)性微陣列(SNP-array)技術(shù)[14]、細(xì)菌人工染色體微珠(BoBs)技術(shù)[15]等可檢測染色體非平衡結(jié)構(gòu)異常，彌補了染色體核型技術(shù)在非平衡結(jié)構(gòu)異常檢測中的不足，為臨床提供更精準(zhǔn)的遺傳咨詢信息。

109例染色體多態(tài)核型，檢出率為4.24%，以1qh+多態(tài)核型最多，其次為inv(9)。109例多態(tài)核型中95例進(jìn)行了父母外周血核型分析，分析結(jié)果顯示，90例多態(tài)均來源于親代遺傳，5例為新發(fā)多態(tài)核型，綜合其他產(chǎn)前診斷結(jié)果建議孕婦繼續(xù)妊娠隨訪無異常，5例拒絕行外周血染色體檢測繼續(xù)妊娠分娩隨訪無異常，9例繼續(xù)妊娠后失聯(lián)。龍洋等[16]分析羊水多態(tài)核型的構(gòu)成比及妊娠結(jié)局，認(rèn)為來自父母遺傳性的染色體多態(tài)性變異可參照其父輩的身體智力發(fā)育情況予以判斷其妊娠結(jié)局，而新發(fā)生的胎兒多態(tài)性變異其影響的具體機(jī)制及對應(yīng)妊娠結(jié)局還有待進(jìn)一步研究。因此，在對多態(tài)核型進(jìn)行遺傳咨詢時應(yīng)檢查多態(tài)核型來源，結(jié)合超聲等其他檢查結(jié)果必要時進(jìn)行染色體微陣列分析等檢測，綜合分析后對孕婦進(jìn)行遺傳咨詢。

綜上所述，羊水染色體異常核型數(shù)目異常發(fā)生率最高，其中21三體綜合征的發(fā)生率最高，以標(biāo)準(zhǔn)型21三體綜合征為主。對于染色體結(jié)構(gòu)異常孕婦，建議首先明確異常染色體來源再進(jìn)一步行分子遺傳檢測，綜合所有檢測結(jié)果對孕婦進(jìn)行全面遺傳咨詢。羊水染色體核型分析是孕中、晚期產(chǎn)前診斷常用方法。隨著細(xì)胞遺傳和分子遺傳技術(shù)水平的不斷進(jìn)步，aCGH技術(shù)在產(chǎn)前診斷中特別是非平衡結(jié)構(gòu)異常的產(chǎn)前診斷中發(fā)揮重要作用。根據(jù)羊水染色體核型結(jié)果結(jié)合aCGH檢測結(jié)果能更好地發(fā)現(xiàn)染色體異常胎兒，及時終止妊娠，有效避免染色體異常患兒的出生，提高我國人口素質(zhì)。