雞毒支原體活疫苗質量評估

趙麗霞 張新新 劉浩 陳賽娟 高曉磊 吳雅清 朱秀同 趙玉龍

1.瑞普（保定）生物藥業有限公司

2.河北農業大學山區研究所

雞毒支原體病是由雞毒支原體（Mycoplasma gallisepticum，MG）引起的一種以呼吸道感染和氣囊炎為主要癥狀的慢性呼吸道疾病，可以通過水平和垂直兩種方式傳播，且常繼發或并發新城疫、傳染性支氣管炎、大腸桿菌病等傳染病，造成很大的經濟損失，目前疫苗免疫是防控該疾病的主要措施。

雞毒支原體活疫苗可以最大限度地降低支原體引起的產蛋損失，并取代多種日齡蛋雞同場飼養的雞場中的支原體野毒株，不僅能有效地預防產蛋損失，而且能防止野毒株在雞群中的定植，因此，雞毒支原體活疫苗免疫接種在禽業生產中占有重要的地位。本文就市場在售的4種雞毒支原體活疫苗進行實驗對比，通過CCU測定和動物實驗，對疫苗質量進行初步評估，為市場應用提供數據支持。

一、材料

1.疫苗：購自國內不同廠家的雞毒支原體活疫苗（F36株）3家，進口疫苗1家，分別標記疫苗A、B、C、D。

2.培養基：CM2培養基，配制方法參照中國獸藥典2015版。

3.SPF雞：購自斯派福瑞SPF雞。

4.SPF雞飼養隔離器：瑞普公司實驗動物中心。

二、方法

1.活菌滴度測定。按照疫苗說明書對疫苗進行復溶，每100羽份疫苗加3.0 mL CM2培養基稀釋后，用于活菌滴度測定。

（1）CCU測定：取10支內裝1.8 ml CM2培養基的圓底試管，在第1管中加入0.2 ml稀釋好的疫苗，充分震蕩混勻后從第1管中吸出0.2 ml加入第2管，做10倍系列稀釋，直至第12管；另取1管裝有2.0 ml的CM2培養基做為陰性對照。放置生化培養箱37℃靜置培養。每日觀察培養基顏色變化情況，10 d后進行結果判定，培養基顏色由紅色變為橙黃色（pH值下降≥0.5）的最后一稀釋管作為CCU測定的結果。每種疫苗做3個平行，取最低的CCU值為最終測定結果。

（2）CCU50測定：方法類CCU測定，取稀釋好的疫苗0.2 ml至裝有1.8 ml CM2培養基的圓底試管中做10倍系列稀釋至10-11，再分別從10-7、10-8、10-9、10-10、10-11管中各取 0.2 ml加入至裝有 1.8 mlCM2培養基的小管中，每個稀釋度設6個重復，放置生化培養箱37℃靜置培養。每日觀察培養基顏色變化情況，10 d后進行結果判定，統計每個稀釋度培養基顏色變化（pH值下降≥0.5）的小管數，按照Reed Muench法計算半數變化單位（CCU50）。

2.動物實驗。

（1）安全檢驗：每種疫苗按10羽份/只，免疫7日齡SPF雞，10只/組，觀察14 d。免疫前與免疫后14 d剖檢前逐只稱重，記錄體重及剖檢時氣囊癥狀。每種疫苗免疫組雞單獨放置一臺隔離器內飼養。

（2）效力檢驗：每種疫苗按1羽份/只，免疫7日齡SPF雞，8只/組，同時設立陰性對照組（6只SPF雞免疫滅菌生理鹽水），免疫5周后進行MG R株強毒的氣溶膠攻毒；攻毒后14 d剖檢，觀察氣囊病變，并進行病變記分，記分標準參照中國獸藥典2015版。每種疫苗免疫組雞單獨放置一臺隔離器內飼養。

三、結果

1.活菌計數結果。

進口疫苗D的活菌計數結果最高，比國產苗高約2個滴度。詳細結果見表1。

2.動物實驗結果。

（1）安全檢驗：各組疫苗免疫雞只均無明顯臨床癥狀，剖檢時氣囊均無病理損傷。10倍劑量免疫后，其中疫苗C組的雞只日增重量最大，對雞生長影響最小。增重實驗結果見表2。

（2）效力檢驗：攻毒后從第8天起，陰性對照組雞只開始出現啰音，疫苗免疫組均無啰音癥狀出現；兩周后剖檢，記錄氣囊發病情況，對照組有5只雞的氣囊出現2分以上的病變，實驗成立。計算每組的平均氣囊保護率，其中進口疫苗D的攻毒保護率為62.5%，在4組中最低。詳細結果見表3。

表1 各組疫苗活菌計數結果

表2 各組疫苗對免疫雞增重影響實驗結果

表3 各組疫苗攻毒保護試驗結果

四、討論

通過CCU及CCU50的測定，3種國產雞毒支原體活疫苗（F36株）均低于進口疫苗，但動物實驗數據表明，在抵抗強毒攻擊方面進口疫苗明顯遜于國產苗。雞毒支原體活疫苗（F36株）能有效的抵抗強毒的攻擊，但不同廠家的疫苗對雞只的增重影響有差異，綜合評價，疫苗C的質量最優。

5-30日齡是雛雞最容易感染雞毒支原體的日齡，雞毒支原體感染對雛雞造成的危害比成雞嚴重得多，早期免疫接種非常重要，雞毒支原體引起的氣囊病變大多是不可逆的，早期感染給后期康復帶來長期的不利影響。用雞毒支原體F株接種的雞可有效預防野毒的感染，弱毒F株能逐步取代雞場中的野毒，從而達到清除野毒支原體的目的。因此，為了預防雞毒支原體的早期感染，對小日齡雛雞接種雞毒支原體F株活疫苗非常必要。