呼吸道苛養菌的分離培養以及耐藥性研究

徐真諦 楊小生

(重慶市墊江縣中醫院 重慶 408300)

臨床微生物實驗室在對苛養菌和耐藥菌進行檢測時出現嚴重挑戰，在培養苛養菌和進行藥敏試驗時對生長環境以及培養菌的要求比較多，這樣就相應提升了實驗室藥敏試驗的技術難度[1]。此次研究旨在探討分析呼吸道苛養菌的分離培養以及耐藥性，收集呼吸道感染患者的痰標本1200份作為研究對象，現將此次研究報告作如下匯報。

1 資料與方法

1.1 一般材料

(1)樣本來源：選取我院2016年11月～2017年11月收治的呼吸道感染患者的痰標本；

(2)培養基：羊血瓊脂平板和嗜血桿菌巧克力平板都是由微生物實驗室自行配置；

(3)試劑：M-H藥敏瓊脂，KB法藥敏植片，ATB ATREP藥敏試驗板，ATB HAEMO藥敏試驗板，Nitrocefin紙片[2]；

(4)質控菌株：肺炎鏈球菌ATCC 49619，流感嗜血桿菌ATCC 49247。

1.2 方法

(1)接種樣本：在獲取痰標本之后需要及時接種于嗜血桿菌分離用羊血瓊脂平板和巧克力張平板上，將溫度控制在35℃，在5%二氧化碳條件下培養24h，在此期間需要密切觀察細菌生長情況；

(2)分離鑒定和藥敏試驗：手工鑒定主要是按照臨床檢驗操作流程，藥敏試驗主要是應用K-B紙片擴散法，之后以肺炎鏈球菌ATCC 49619和流感嗜血桿菌ATCC 49247進行質控，結果根據美國實行的標準判定[3]，還可以應用ATB ATREP藥敏試驗板，ATB HAEMO藥敏試驗板進行抗生素藥敏試驗；

(3)β-內酰胺酶試驗：在β-內酰胺酶紙片上添加生理鹽水，之后在Nitrocefin紙片上菌落進行涂布，等待10min之后如果變為紅色，就表示該菌種產生β-內酰胺酶。

1.3 統計學方法

對所有患者數據資料采用SPSS20.0統計學軟件對數據進行分析處理，計數資料用%表示，P<0.05為統計學意義。

2 結果

在所有檢測的痰樣本當中共分離出118株流感嗜血桿菌，占9.83%；64株副流感嗜血桿菌，占5.33%；207株肺炎鏈球菌，占17.25%。

流感嗜血桿菌藥敏試驗結果見表1。

表1 118株流感嗜血桿菌藥敏試驗結果

藥名敏感株樹(敏感率/%)耐藥株樹(耐藥率/%)氨芐西林/棒酸115(97.46)6(1.69)頭孢噻吩98(83.05)20(16.95)氨芐西林65(55.08)53(44.92)四環素31(26.27)87(73.73)氧氟沙星92(77.97)26(22.03)氯霉素109(92.37)9(7.63)磺胺甲惡唑25(21.19)93(78.81)頭孢曲松111(94.07)9(7.63)利福平118(100)0(0)阿奇霉素118(100)0(0)

副流感嗜血桿菌藥敏試驗結果見表2。

表2 64株副流感嗜血桿菌藥敏試驗結果

藥名敏感株樹(敏感率/%)耐藥株樹(耐藥率/%)氨芐西林34(53.13)30(46.88)氨芐西林/棒酸61(95.31)3(4.69)頭孢噻吩54(84.38)10(15.63)四環素16(25)48(75)氧氟沙星24(37.5)40(62.5)磺胺甲惡唑30(46.88)34(53.13)氯霉素55(85.64)9(14.06)利福平64(100)0(0)頭孢曲松57(89.06)7(10.94)阿奇霉素57(89.06)7(10.94)

肺炎鏈球菌藥敏試驗結果見表3。

表3 肺炎鏈球菌藥敏試驗結果

藥名敏感株樹(敏感率/%)耐藥株樹(耐藥率/%)中介株樹(中介率/%)阿莫西林202(97.58)2(0.97)2(0.97)頭孢噻肟203(98.07)4(1.93)0(0)紅霉素10(4.83)197(95.17)0(0)克林霉素53(25.60)151(72.95)3(1.45)四環素11(5.31)196(94.67)0(0)左氧氟沙星128(61.84)79(38.16)0(0)氯霉素131(63.29)76(36.71)0(0)磺胺甲惡唑25(12.07)172(83.09)9(4.35)萬古霉素207(100)0(0)0(0)青霉素173(83.57)13(6.28)21(10.14)

β-內酰胺酶檢測結果：在118株流感嗜血桿菌產β-內酰胺酶共有35株，產酶率為29.66%；在64株副流感嗜血桿菌當中產出12株β-內酰胺酶，產酶率為18.75%。

3 討論

呼吸道常見苛養菌為肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌，由于受到標本性質、取材方法以及培養方式的影響，其具有較低的檢出率[4]。在調查研究嗜血桿菌時，流感嗜血桿菌對氨芐西林的耐藥率為44.92%，副流感嗜血桿菌對其耐藥率為46.88%，此次研究結果均高于其他學者的研究結果。流感嗜血桿菌對磺胺甲惡唑、四環素以及氨芐西林等藥物高度耐藥，副流感嗜血桿菌對氧氟沙星、四環素以及氨芐西林具有較高的耐藥性，流感嗜血桿菌對阿奇霉素和利福平沒有表現出耐藥性，因此在治療嗜血桿菌感染患者時就可以應用第三代頭孢藥物。

嗜血桿菌對氨芐西林的耐受性主要是因為產生了β-內酰胺酶，其次還有非酶介導機制導致β-內酰胺酶呈現陰性，從而使氨芐西林表現出耐藥性。以上研究結果能夠看出，流感嗜血桿菌對氨芐西林的耐藥率為44.92%，產酶率為29.66%；副流感嗜血桿菌對氨芐西林的耐藥性為46.88%，產酶率為18.75%。在研究期間需要注重氯霉素耐藥株能夠產生β-內酰胺酶，氯霉素耐藥性大多數都是由于氯霉素乙酰轉移酶的出現。

肺炎鏈球菌能夠導致患者出現細菌性疾病，嚴重可造成死亡。按照此次研究結果的特點能夠看出，肺炎鏈球菌對克林霉素、四環素以及紅霉素等表現出較高的耐藥性，顯著高于國內其他研究結果，對青霉素的耐藥性的中介率也達到6.28%和 10.14%，因此需要加深研究和分析。

綜上所述，對呼吸道苛養菌的分離培養和藥敏試驗，指導臨床中抗生素合理用藥，對藥物耐藥率的減低有促進作用。