PCDH10在舌鱗狀細胞癌組織中表達及臨床意義

汪曉龍,曹順順,張 鵬,舒傳繼

(鄂東醫療集團黃石市中心醫院,湖北理工學院附屬醫院口腔科,黃石 435000;*通訊作者,E-mail:380061085@qq.com)

舌鱗狀細胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)作為頭頸部最常見的惡性腫瘤,具有惡性程度高、浸潤性強、生長迅速等特點,可累及舌肌而影響患者語言、進食、吞咽等功能[1],流行病學研究顯示[2],該腫瘤發病率呈升高趨勢,且出現年輕化。雖然現有的臨床治療手段不斷進步,但由于該腫瘤早期便可出現淋巴結轉移,致使患者總體生存率改善有效[3],侵襲和轉移已成為TSCC患者預后不佳的主要因素[4]。原鈣黏蛋白10(protocadherin 10,PCDH10)作為原鈣黏蛋白家族成員,在調控細胞間黏附及細胞內信號傳導中發揮重要作用[5],近年來研究發現[6],其在多種惡性腫瘤組織中呈低表達,且與患者預后有關。本研究分析TSCC組織中PCDH10表達,探討其與臨床病理特征的相關性,以及對預后的影響,以期為TSCC機制研究及臨床治療提供參考資料。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 臨床資料 選取2010-03～2013-03在我院行手術治療且臨床資料完整的TSCC患者65例,術前未接受放化療,術后病理證實為TSCC,其中,男性41例,女性24例,年齡35-77歲,平均年齡(54.51±10.62)歲,分化程度:低分化15例,中分化21例,高分化29例;根據2009年國際抗癌聯盟(UICC)關于TNM分期標準:Ⅰ-Ⅱ期28例,Ⅲ-Ⅳ期37例;發生淋巴結轉移39例。術中留取腫瘤及距離腫瘤邊緣>3 cm處癌旁組織,快速置于液氮中,-70 ℃保存。本研究通過醫院倫理委員會批準,所有患者均行知情同意。

1.1.2 主要試劑和設備 總RNA提取試劑盒(Trizol法)購自美國Invitrogen公司,逆轉錄試劑盒和聚合酶鏈式反應(PCR)試劑盒購自日本TaKaRa公司,PCDH10和內參引物由上海索寶生物科技有限公司設計合成,LightCycler 2.0實時熒光定量PCR儀購自瑞士Roche公司。

1.2 方法

1.2.1 利用實時熒光定量PCR技術檢測TSCC和癌旁組織中PCDH10 mRNA表達 稱取50 mg TSCC或癌旁組織,剪碎研磨,按總RNA提取試劑盒(Trizol法)說明提取總RNA,利用紫外分光光度計測定總RNA純度,要求A260/A280在1.80-2.20范圍內為合格標準。按照逆轉錄試劑盒說明進行逆轉錄,按照PCR試劑盒說明配制反應體系,利用實時熒光定量PCR儀對引物擴增,引物序列如下。PCDH10上游:5′-ACTGCTATCAGGTATGCCTG-3′,下游:5′-GTCTGTCAACTAGATAGCTG-3′;β-actin上游:5′-ACAGAGCCTCGCCTTTGC-3′,下游:5′-TCATCTTCTCGCGGTTGG-3′。PCR反應條件:95 ℃預變性5 min,95 ℃變性15 s,55 ℃退火45 s,72 ℃延伸45 s,行36次循環。每個樣品設6個平行復孔。用2-ΔΔCt法計算TSCC和癌旁組織中PCDH10 mRNA相對表達量。

1.2.2 病例隨訪 所有患者術后均行隨訪,隨訪形式包括門診和電話,以術后第1天作為隨訪起始時間,以死亡作為終點事件,隨訪截止日期2018年3月31日。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 TSCC和癌旁組織中PCDH10 mRNA表達

TSCC組織中PCDH10 mRNA相對表達量為0.42±0.10,癌旁組織則為1.02±0.07,差異有統計學意義(t=37.977,P<0.001)。

2.2 TSCC組織中PCDH10 mRNA表達與臨床指標間關系

TSCC組織中PCDH10 mRNA表達與性別、年齡、吸煙和飲酒無關(P>0.05),而與分化程度、TNM分期和淋巴結轉移有關(P<0.05,見表1)。

2.3 TSCC組織中PCDH10 mRNA表達對預后的影響

隨訪時間2-96個月,隨訪過程中,失訪4例,失訪率6.15%。以TSCC組織中PCDH10 mRNA相對表達量的P25=0.37值作為界值,將患者分為低表達(n=15)和高表達(n=46)。低表達組患者中位生存時間19個月,總生存率20.00%,高表達組患者中位生存時間45個月,總生存率45.65%,Log-Rank檢驗差異有統計學意義(χ2=11.096,P=0.001,見圖1)。

2.4 影響TSCC患者生存時間的多因素回歸分析

以性別、年齡、吸煙、飲酒、分化程度、TNM分期、淋巴結轉移和PCDH10 mRNA表達作為自變量進行Cox比例風險回歸分析,結果顯示,發生淋巴結轉移(HR=0.303,95% CI 0.128-0.716)和PCDH10 mRNA低表達(HR=0.406,95% CI 0.178-0.923)是影響患者生存時間的風險因素(見表2)。

指標nPCDH10 mRNA表達量tP性別0.42±0.100.9220.360 男性410.43±0.10 女性240.41±0.11年齡1.5800.119 >55歲440.41±0.10 ≤55歲210.45±0.11吸煙1.1490.255 是240.40±0.10 否410.43±0.10飲酒0.6540.515 是150.41±0.07 否500.43±0.11分化程度2.9700.004 中低分化360.39±0.10 高分化290.46±0.09TNM分期4.7480.000 Ⅰ-Ⅱ期280.48±0.08 Ⅲ-Ⅳ期370.38±0.09淋巴結轉移3.2620.002 是390.39±0.11 否260.47±0.08

3 討論

目前,臨床上治療TSCC主要以手術切除為主,輔以放化療,但由于該腫瘤侵襲性強,早期便可出現頸淋巴結轉移,多數患者臨床確診時已處于晚期,導致患者總體預后較差且易復發[7]。近年來,隨著分子靶向治療在腫瘤治療中的應用,積極探討影響TSCC發生、進展及預后的敏感基因,成為TSCC治療的新方向。PCDH10基因位于人染色體4q28.3,是一種膜蛋白,近年來研究發現,其可能發揮抑癌基因的作用而參與腫瘤發生[8],在結直腸癌[9]、B細胞淋巴瘤[10]、子宮內膜癌[11]等多種惡性腫瘤組織中呈低表達,邱禪等[12]指出,過表達PCDH10可顯著抑制胰腺癌BXPC-3細胞的增殖、侵襲及遷移,促進細胞凋亡。Ye等[13]亦指出,PCDH10可抑制原發性肝癌細胞增殖,誘導細胞加速凋亡。本研究結果顯示,TSCC組織中PCDH10 mRNA相對表達量低于癌旁組織,說明PCDH10在TSCC組織中呈低表達,可能發揮抑癌基因的功能而參與TSCC發生過程。研究發現,PCDH10 mRNA在中低分化、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期和發生淋巴結轉移的TSCC組織中表達量降低,說明PCDH10低表達可能參與了TSCC惡性化進展過程。

圖1 TSCC組織中PCDH10 mRNA表達對預后的影響Figure 1 Effect of the expression of PCDH10 mRNA on prognosis in TSCC tissues

表2影響TSCC患者生存時間的Cox比例風險回歸分析

Table2CoxproportionalhazardregressionanalysisforinflencingfactorsonthesurvivaltimeofpatientswithTSCC

指標BSEWaldPHR(95% CI)性別0.2640.3550.5510.4581.302(0.649-2.611)年齡0.1220.4070.0900.7651.129(0.509-2.505)吸煙0.2760.3640.5760.4481.318(0.646-2.692)飲酒-0.1860.4490.1720.6780.830(0.344-2.001)分化程度-0.1150.3540.1060.7450.891(0.445-1.785)TNM分期0.0570.3910.0210.8841.059(0.492-2.279)淋巴結轉移-1.1940.4397.3990.0070.303(0.128-0.716)PCDH10 mRNA表達-0.9020.4194.6290.0310.406(0.178-0.923)

有研究指出[14],PCDH10可作為預測胃癌患者預后的指標。本研究Kaplan-Meier生存分析結果顯示,低表達組患者中位生存時間和總生存率均低于高表達組患者,說明PCDH10與TSCC患者預后有關,低表達組患者生存時間和總生存率降低。Cox比例回歸分析結果顯示,淋巴結轉移和PCDH10 mRNA表達與患者生存時間相關,發生淋巴結轉移及PCDH10 mRNA低表達是影響患者生存時間的危險因素,進一步說明PCDH10 mRNA表達量可能成為預測TSCC患者預后的指標。

綜上所述,PCDH10在TSCC組織中呈低表達,可能作為抑癌基因而參與TSCC發生及進展,且與患者預后有關,PCDH10低表達是影響患者預后的風險因素,有望為TSCC發病機制及基因靶向治療提供新的靶位。