一種國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)制備的紅細(xì)胞產(chǎn)品不同儲(chǔ)存期質(zhì)控指標(biāo)觀察

時(shí)卉麗，楊鳳霞，趙 倩，李建民，趙莉華，何路軍

(河北省血液中心，河北石家莊 050071)

經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，為我國(guó)各級(jí)醫(yī)療事業(yè)的發(fā)展增添了強(qiáng)大動(dòng)力，尤其是在醫(yī)療制造業(yè)方面，機(jī)械化、自動(dòng)化技術(shù)越發(fā)完善，大大提升了醫(yī)療制造業(yè)的工作效率與工作質(zhì)量[1]。一直以來(lái)，我國(guó)對(duì)于洗滌紅細(xì)胞產(chǎn)品的制備多以手工制備為主，不僅工作效率低下，而且產(chǎn)品的質(zhì)量及其穩(wěn)定性受制備者技術(shù)水平、操作方法、設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)以及周圍環(huán)境等因素影響大。加之在采用手工方法制備洗滌紅細(xì)胞產(chǎn)品時(shí)往往需要多次洗滌且耗時(shí)長(zhǎng)，稍有不慎便會(huì)導(dǎo)致制備失敗，進(jìn)而影響臨床的正常使用[2]。而機(jī)器制備方法的出現(xiàn)，不僅有效解決了上述的弊端，而且大大提升了洗滌紅細(xì)胞產(chǎn)品的制備效率。有報(bào)道顯示機(jī)器方法所制備的紅細(xì)胞其儲(chǔ)存期各項(xiàng)質(zhì)控指標(biāo)也較佳[3]。本文就機(jī)器及手工法制備的洗滌紅細(xì)胞產(chǎn)品不同儲(chǔ)存期質(zhì)控指標(biāo)差異進(jìn)行更進(jìn)一步探究，對(duì)機(jī)器法制備洗滌紅細(xì)胞的臨床價(jià)值進(jìn)行判定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1材料、儀器與試劑 原料血取本血站現(xiàn)有的采用分袋保存的60袋去白懸浮紅細(xì)胞，所有研究中血液均由本站提供，且其來(lái)源均取自街頭無(wú)償獻(xiàn)血人員。經(jīng)檢驗(yàn)，所有原料血的檢驗(yàn)指標(biāo)除轉(zhuǎn)氨酶異常，其他各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，每袋2 U去白懸浮紅細(xì)胞。60袋去白懸浮紅細(xì)胞原料血的來(lái)源、檢驗(yàn)指標(biāo)以及血量等一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。依據(jù)隨機(jī)數(shù)字法及對(duì)每袋原料血所采取制備方法的不同將其均分為手工、機(jī)器兩組。手工鹽水法30袋，機(jī)器洗滌法30袋；智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)(型號(hào)：ZHXD)，一次性使用離心式紅細(xì)胞洗滌器(成都佳穎)、一次性使用機(jī)用注射器(成都佳穎)，RC12BP大容量低溫離心機(jī)(美國(guó)Kendro公司)，全自動(dòng)無(wú)菌罐對(duì)接機(jī)(日本Terumo公司)，無(wú)菌接管機(jī)及無(wú)菌熔接片(日本泰爾茂公司)、溶血?jiǎng)┘懊盖逑匆簞?希森美康生物科技有限公司)、COULTER AcT.5diff全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、UV765紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、血漿游離血紅蛋白試劑盒(Trinder法)(北京瑞爾達(dá)科技有限公司)、腦脊液蛋白測(cè)定試劑盒(保定長(zhǎng)城試劑廠)以及全血質(zhì)控物(希森美康生物科技有限公司)。

1.2方法

1.2.1手工鹽水法 手工組采用隨機(jī)抽取30袋去白懸浮紅細(xì)胞作為原料血，通過(guò)無(wú)菌接駁機(jī)將要制備的原料血與0.9%生理鹽水四聯(lián)袋接通，檢查接口兩端結(jié)合嚴(yán)密后在2～6 ℃ 2 840 r/min速度離心14 min，分出血漿或上清液制成濃縮紅細(xì)胞再加入250 mL 0.9%生理鹽水混勻，再次2～6 ℃ 2 840 r/min速度離心14 min，重復(fù)上述過(guò)程共分3次對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌，在洗滌過(guò)程中盡可能分出血漿或上清液。最后在紅細(xì)胞中加入100 mL的紅細(xì)胞保存液制得[2]。

1.2.2機(jī)器洗滌法 機(jī)器組采用隨機(jī)抽取30袋去白懸浮紅細(xì)胞作為原料血，按照智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)規(guī)定的方法在儀器上選擇洗滌紅細(xì)胞程序，通過(guò)無(wú)菌接駁機(jī)將要制備的原料血與配套耗材連接，開(kāi)啟自動(dòng)化程序，根據(jù)不同制備階段加入氯化鈉溶液進(jìn)行自動(dòng)洗滌，最后加入100 mL的紅細(xì)胞保存液完成洗滌紅細(xì)胞的制備[2]。

1.3觀察指標(biāo) 按照新版國(guó)標(biāo)提出的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[3]，將血紅蛋白含量、上清蛋白質(zhì)含量、儲(chǔ)存期末溶血率作為手工制備組和機(jī)器制備組的關(guān)鍵檢測(cè)指標(biāo)。分別對(duì)手工、機(jī)器兩組不同制備方法下紅細(xì)胞產(chǎn)品進(jìn)行詳細(xì)檢測(cè)鑒定，進(jìn)而判定兩種制備方法的優(yōu)劣。

1.4血紅蛋白含量檢測(cè) 對(duì)手工、機(jī)器兩組不同制備方法下紅細(xì)胞產(chǎn)品的血紅蛋白含量均采用COULTER AcT.5diff全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)Hb濃度，用感量0.1 g的電子天平稱取洗滌紅細(xì)胞重量，結(jié)合洗滌紅細(xì)胞產(chǎn)品的比重(1.060)計(jì)算出容量和血紅蛋白含量。計(jì)算公式如下：洗滌紅細(xì)胞(MAP)容量(mL)=[整重量(g)-空袋重量(g)]÷洗滌紅細(xì)胞(MAP)比重(g/mL)；血紅蛋白含量=Hb(mg/L)×洗滌紅細(xì)胞(MAP)容量[4]。

1.5上清液蛋白含量檢測(cè) 對(duì)手工、機(jī)器兩組不同制備方法下紅細(xì)胞產(chǎn)品的上清蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定均嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[4]規(guī)定進(jìn)行，計(jì)算公式如下：上清液蛋白含量(g)=上清蛋白質(zhì)濃度(mg/dL)×容量(mL)×10-5。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 12.0軟件對(duì)不同制備方法下紅細(xì)胞產(chǎn)品的各檢測(cè)指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。采用t檢驗(yàn)與χ2檢驗(yàn)對(duì)比分析手工制備法與機(jī)器制備法二者所制備的紅細(xì)胞產(chǎn)品其不同儲(chǔ)存期質(zhì)控指標(biāo)的具體差異，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1機(jī)器組與手工組制備的洗滌紅細(xì)胞在不同儲(chǔ)存期Hb檢測(cè)結(jié)果差異 經(jīng)不同制備方法制備洗滌后的紅細(xì)胞產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，行機(jī)器方法制備的機(jī)器組紅細(xì)胞產(chǎn)品其不同儲(chǔ)存期Hb水平均明顯高于手工組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。且機(jī)器組所制備紅細(xì)胞產(chǎn)品在不同儲(chǔ)存期其Hb呈穩(wěn)定下降趨勢(shì)，而手工組這一趨勢(shì)并不穩(wěn)定，見(jiàn)表1。

2.2機(jī)器組與手工組制備的洗滌紅細(xì)胞在不同儲(chǔ)存期上清蛋白含量檢測(cè)結(jié)果差異 對(duì)手工、機(jī)器兩組不同方法制備的紅細(xì)胞產(chǎn)品的上清蛋白含量代入計(jì)算公式后所得結(jié)果發(fā)現(xiàn)，手工、機(jī)器兩組其上清蛋白含量這一質(zhì)控指標(biāo)在不同儲(chǔ)存期變化不大，均未見(jiàn)明顯衰減，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

2.3機(jī)器組與手工組制備的洗滌紅細(xì)胞在不同儲(chǔ)存期溶血率檢測(cè)結(jié)果差異 對(duì)手工、機(jī)器兩組不同方法制備的紅細(xì)胞產(chǎn)品的上清蛋白含量所得值代入溶血率計(jì)算公式后所得結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組紅細(xì)胞產(chǎn)品隨著儲(chǔ)存期的延長(zhǎng)紅細(xì)胞產(chǎn)品溶血率逐漸升高，而且手工法比機(jī)器法升高明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表1 不同儲(chǔ)存期Hb的檢測(cè)結(jié)果

表2 不同儲(chǔ)存期上清蛋白含量的檢測(cè)結(jié)果

表3 不同儲(chǔ)存期溶血率的檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

隨著臨床對(duì)血液制品的需求越來(lái)越大，傳統(tǒng)手工制備方法越發(fā)不能夠滿足需求[6]。加之傳統(tǒng)手工制備方法在制備紅細(xì)胞等產(chǎn)品時(shí)受制因素多，制作者自身操作及水平、儀器的設(shè)定與使用以及制備穩(wěn)點(diǎn)、環(huán)境等均會(huì)影響紅細(xì)胞制備產(chǎn)品的質(zhì)量。尤其是在其長(zhǎng)期儲(chǔ)存方面，影響更大[7]。

臨床上對(duì)于紅細(xì)胞產(chǎn)品的手工制備主要是人工通過(guò)虹吸亦或是壓漿板將原料血中白細(xì)胞去除，而后通過(guò)多次洗滌進(jìn)而得到懸浮紅細(xì)胞產(chǎn)品及相關(guān)的血漿產(chǎn)品[8]。本次研究在將30袋原料血經(jīng)無(wú)菌接駁機(jī)聯(lián)通且行離心操作后，共進(jìn)行了3次生理鹽水洗滌，最終得到紅細(xì)胞產(chǎn)品。手工制備方法不僅對(duì)工作人員技術(shù)水平的熟練度要求較高，而且在制備操作過(guò)程中常常會(huì)出現(xiàn)數(shù)據(jù)記錄錯(cuò)誤或相關(guān)信息遺漏記錄的情況，這也使得制成的紅細(xì)胞產(chǎn)品溯源性差。因此，在西方發(fā)達(dá)國(guó)家，手工制備血液產(chǎn)品方法已逐步被淘汰，取而代之的是自動(dòng)化、機(jī)械化的機(jī)器制備[9，10]。機(jī)器制備主要是利用無(wú)菌接駁機(jī)將要制備的原料血與配套耗材連接，開(kāi)啟自動(dòng)化程序?qū)t細(xì)胞產(chǎn)品進(jìn)行洗滌制備[11]。機(jī)器化制備過(guò)程中的離心、洗滌過(guò)程均由全自動(dòng)機(jī)器自動(dòng)完成，不受人工操作的影響[12]。此外，機(jī)器方法制備紅細(xì)胞產(chǎn)品因采用全自動(dòng)機(jī)器設(shè)備進(jìn)行，因此，在制備紅細(xì)胞產(chǎn)品過(guò)程中對(duì)每一批次產(chǎn)品制備的質(zhì)量、分離程序及時(shí)間、操作人員、使用設(shè)備型號(hào)及具體始末時(shí)間以及儲(chǔ)存時(shí)間等詳細(xì)信息均能夠由儀器自動(dòng)記錄，并能夠經(jīng)專業(yè)軟件建立紅細(xì)胞產(chǎn)品數(shù)據(jù)，大大提升了產(chǎn)品的溯源性[13-14]。本次研究機(jī)器組采用智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)(型號(hào)：ZHXD)，一次性使用離心式紅細(xì)胞洗滌器(成都佳穎)，RC12BP大容量低溫離心機(jī)(美國(guó)Kendro公司)以及全自動(dòng)無(wú)菌罐對(duì)接機(jī)(日本Terumo公司)等儀器對(duì)30袋原料血進(jìn)行離心、洗滌操作，進(jìn)而得到了最終紅細(xì)胞產(chǎn)品[15]。對(duì)于紅細(xì)胞產(chǎn)品的制備，采取機(jī)器方法具有優(yōu)質(zhì)高效、標(biāo)準(zhǔn)化、信息化以及自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。其研究結(jié)果表明，相較于手工方法，機(jī)器方法制備的紅細(xì)胞質(zhì)量更佳，儲(chǔ)存時(shí)其各指標(biāo)變化更為平穩(wěn)，這同此次研究結(jié)果高度相似[16-17]。

由上述研究結(jié)果可知，對(duì)手工、機(jī)器兩組不同方法所制備的紅細(xì)胞產(chǎn)品的血紅蛋白含量、上清蛋白含量以及溶血率等3項(xiàng)關(guān)鍵檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，手工、機(jī)器兩組各制得的30袋紅細(xì)胞產(chǎn)品其各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)除上清蛋白含量差異較小，其余各指標(biāo)均有明顯差異。其中，行機(jī)器方法制備的機(jī)器組紅細(xì)胞產(chǎn)品其不同儲(chǔ)存期Hb水平均明顯高于手工組。機(jī)器組所制備紅細(xì)胞產(chǎn)品在不同儲(chǔ)存期Hb呈穩(wěn)定下降趨勢(shì)，而手工組這一趨勢(shì)并不穩(wěn)定。而在溶血率方面，機(jī)器制備組無(wú)論是在7 d、14 d、21 d、28 d還是在35 d各儲(chǔ)存期節(jié)點(diǎn)其溶血率均明顯低于手工組。即機(jī)器法制備的紅細(xì)胞產(chǎn)品更為穩(wěn)定。