可溶性纖維蛋白原2的研究進(jìn)展

孟勝蘭 綜述，肖創(chuàng)清 審校

(1.湖南師范大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,湖南長(zhǎng)沙 410003；2.解放軍第163醫(yī)院檢驗(yàn)科,湖南長(zhǎng)沙 410003)

可溶性纖維蛋白原2(sFGL2)是由調(diào)節(jié)性TCD4+CD25+FOXP3+細(xì)胞(Tregs)分泌的效應(yīng)分子，并被CD4+CD25+Tregs高表達(dá)[1-2]，對(duì)維持Tregs的活性和功能有重要的作用[3]。國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究已證實(shí)sFGL2參與了移植排斥、腫瘤、自身免疫疾病等疾病的發(fā)生及發(fā)展，作為T(mén)reg的一種新的效應(yīng)分子，sFGL2可能為多種疾病的診治提供新的思路[3-5]。

1 FGL2的基因編碼、蛋白結(jié)構(gòu)

FGL2基因最初克隆自細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，人的FGL2基因定位于染色體7q11.23的近端區(qū)域，其編碼的糖蛋白與纖維蛋白原的β和γ鏈具有一定的同源性，因此被認(rèn)為是纖維蛋白原超家族成員。FGL2蛋白有兩種結(jié)構(gòu)形式，除了sFGL2之外，還有mFGL2(mFGL2)。mFGL2是一種Ⅱ型跨膜蛋白，具有絲氨酸蛋白酶活性，可直接激活凝血酶原酶啟動(dòng)凝血，參與一些以微循環(huán)為病理特征的疾病，如爆發(fā)性病毒性肝炎等。sFGL2是由4條相同的單體通過(guò)二硫鍵組成的四聚體。已經(jīng)證實(shí)，靠近sFGL2梭基端的功能片段區(qū)域FRED段是sFGL2的特征片段，對(duì)sFGL2免疫調(diào)節(jié)活性至關(guān)重要[4]。

2 sFGL2的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制

2.1sFGL2與抗原提呈細(xì)胞 sFGL2缺乏mFGL2的促凝血活性，而是作為免疫抑制的多形態(tài)調(diào)控發(fā)揮作用。現(xiàn)發(fā)現(xiàn)sFGL2可與FcγRⅡB和FcγRⅢ兩種與低親和力FcγR受體特異性結(jié)合。FcγRⅡB的胞漿側(cè)含有免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)，也是唯一具有抑制功能的FcγR受體，廣泛表達(dá)于抗原提呈細(xì)胞[5]。sFGL2與FcγRs結(jié)合后可對(duì)不同類型的細(xì)胞產(chǎn)生不同的生物學(xué)作用，這可能是由于FcγRⅡB與FcγRⅢ在細(xì)胞表面的表達(dá)比例不同或者sFGL2與兩種FcγRs的親和力不同所致[6]，通過(guò)與FcγRⅡB和FcγRⅢ的結(jié)合，sFGL2可以調(diào)節(jié)抗原提呈細(xì)胞(APC)的抗原呈遞能力。sFGL2與FcyRⅡB結(jié)合可導(dǎo)致骨髓源性樹(shù)突細(xì)胞表面MHC-Ⅱ及CD8分子的表達(dá)減少，從而抑制樹(shù)突細(xì)胞成熟及降低其刺激T細(xì)胞增殖的能力。而sFGL2與B細(xì)胞的FcyRⅡB結(jié)合可以誘導(dǎo)其凋亡。單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞也表達(dá)FcγRⅡB和FcγRⅢ，但是它們的sFGL2調(diào)節(jié)機(jī)制尚不清楚。此外，sFGL2與腎小球系膜細(xì)胞，肝竇內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合，促進(jìn)靶細(xì)胞的凋亡，加重小鼠肝臟及腎臟的損傷。

2.2sFGL2與調(diào)節(jié)性B細(xì)胞 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(Bregs)是新的B細(xì)胞亞群，其充當(dāng)針對(duì)病原體和自身抗原的免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)劑。Bregs通過(guò)產(chǎn)生白細(xì)胞介素10(IL-10)等抑制性細(xì)胞因子，誘導(dǎo)效應(yīng)T細(xì)胞凋亡以及促進(jìn)CD4+CD25+Foxp3+Tregs分化，發(fā)揮調(diào)控作用。最近，BEZIE等[7]證明，將FGL2過(guò)表達(dá)老鼠的脾細(xì)胞過(guò)繼到同種異體心臟移植的動(dòng)物中，有利于脾臟中CD45 RA+Bregs的增殖，可以防止急性和慢性排斥反應(yīng)，但因?yàn)锽regs和DC均表達(dá)FcγRⅡB受體，因此sFGL2是否直接作用于Bregs介導(dǎo)免疫耐受還有待進(jìn)一步研究。

2.3sFGL2與T細(xì)胞 sFGL2是CD4+CD25+Tregs的重要效應(yīng)分子。SHALEV等[8]發(fā)現(xiàn)在FGL2基因敲除(FGL2-/-)小鼠中，CD4+CD25+Tregs增加，而抑制CD4+T細(xì)胞增殖的能力受損，同時(shí)，Th1細(xì)胞因子IFN-γ增加而Th2細(xì)胞因子IL-4，IL-10水平降低，推測(cè)sFGL2可通過(guò)調(diào)控Th0細(xì)胞向Th2細(xì)胞極化，從而抑制T淋巴細(xì)胞的增殖和分化。但最近國(guó)內(nèi)學(xué)者通過(guò)建立病毒急性感染小鼠模型，發(fā)現(xiàn)FGL2缺失對(duì)CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞增殖分化沒(méi)有影響[9]，因此，F(xiàn)GL2對(duì)T細(xì)胞功能的影響仍然有待研究。另外，sFGL2對(duì)TIGIT+CD4+CD25+Tregs細(xì)胞亞群抑制Th1和Th17細(xì)胞應(yīng)答的能力是不可或缺的[10]。除了CD4+CD25+Tregs外，致耐受性CD8+CD45RClowTregs也可表達(dá)FGL2，并已發(fā)現(xiàn)FGL2 mRNA在腸道TCRαβ+CD8αα上皮間淋巴細(xì)胞中高度表達(dá)。總的來(lái)說(shuō)，sFGL2可能是許多Tregs亞型的常見(jiàn)免疫抑制劑，對(duì)維持T細(xì)胞免疫至關(guān)重要。

3 sFGL2在相關(guān)疾病中的研究進(jìn)展

3.1sFGL2與病毒性肝炎 FGL2有助于許多實(shí)驗(yàn)性感染性疾病的發(fā)病。研究者發(fā)現(xiàn)在由小鼠3型肝炎病毒(MHV-3)引起的暴發(fā)性肝炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭校琈HV-3感染小鼠的外周血及肝臟中Tregs數(shù)量增加，血漿sFGL2水平升高程度與Treg呈正相關(guān)，表明Treg和sFGL2在抗病毒免疫反應(yīng)中發(fā)揮了積極的作用[2]。NING[11]等也發(fā)現(xiàn)MHV-3的核衣殼蛋白能夠在體外激活小鼠FGL2基因的轉(zhuǎn)錄，并且sFGL2的血清水平與MHV-3小鼠中的肝細(xì)胞病理學(xué)相關(guān)。在慢性HCV感染者及經(jīng)活檢證實(shí)的丙肝肝炎患者中，也檢測(cè)到sFGL2水平的顯著升高，且升高程度與HCV滴度和肝臟炎癥程度呈正相關(guān)[12]。HAN等[13]發(fā)現(xiàn)HBV核心蛋白能夠直接與FGL2基因的啟動(dòng)子結(jié)合并激活其在肝癌細(xì)胞系中的轉(zhuǎn)錄。另一方面，sFGL2可抑制HBV或HCV患者中樹(shù)突細(xì)胞的成熟，減少I(mǎi)FN-γ的產(chǎn)生并抑制T淋巴細(xì)胞的增殖。有關(guān)sFGL2對(duì)病毒性肝炎的致病機(jī)制尚不明確，目前的共識(shí)是肝炎病毒可能會(huì)誘導(dǎo)并激活巨噬細(xì)胞中的Fgl2，從而導(dǎo)致纖維蛋白沉積和肝組織壞死，而升高的sFGL2又會(huì)損傷宿主的免疫功能，有利于病毒復(fù)制和擴(kuò)增。

3.2sFGL2與自身免疫性疾病 免疫調(diào)節(jié)異常在自身免疫性疾病(AID)的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起著重要的作用。潰瘍性結(jié)腸炎患者的sFGL2水平以及外周血單個(gè)核細(xì)胞中FGL2 mRNA和蛋白表達(dá)水平與健康對(duì)照相比均有明顯上升，并且，sFGL2水平與疾病活動(dòng)指數(shù)、c反應(yīng)蛋白(CRP)呈正相關(guān)。在活動(dòng)性潰瘍性結(jié)腸炎患者中，sFGL2的上調(diào)可能是因?yàn)門(mén)regs分泌不足，無(wú)法控制慢性炎癥而導(dǎo)致的[14]。隨后的研究表明FGL2可以通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞的極化從而抑制炎癥性腸病和結(jié)腸炎相關(guān)性結(jié)直腸癌發(fā)展，是其發(fā)病機(jī)制中的一種新型保護(hù)分子[15]。而在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性肝炎(EAH)小鼠的肝臟內(nèi)，CD4+CD25+FOXP3+Tregs數(shù)量因炎癥募集增加，同時(shí)也檢測(cè)到sFGL2的升高。同樣在自身免疫性肝炎(AIH)患者急性期也發(fā)現(xiàn)sFGL2水平顯著高于緩解期，認(rèn)為sFGL2可能通過(guò)抑制CD8+T細(xì)胞和Tc17細(xì)胞功能延緩AIH的進(jìn)展[16]。其他自身免疫性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性腎炎、自身免疫性心肌炎，sFGL2的作用也有相應(yīng)的報(bào)道[14,17]。

3.3sFGL2與腫瘤 腫瘤的發(fā)生通常與高度免疫抑制的微環(huán)境相關(guān)，其中Tregs受抑制和效應(yīng)T細(xì)胞功能受損并存。作為T(mén)regs效應(yīng)分子，sFGL2已被證明在抑制腫瘤免疫應(yīng)答中的作用。研究者發(fā)現(xiàn)與低級(jí)別膠質(zhì)瘤相比，多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)的FGL2 mRNA和蛋白水平顯著增高[18]。GBM中的FGL2基因與其他免疫調(diào)節(jié)基因(包括PD-1、PD-L2、IL-10和TGF-β1等)的表達(dá)之間也呈正相關(guān)。此外，在肝細(xì)胞癌(HCC)患者中，LX2肝星狀細(xì)胞分泌的sFGL2水平也顯著增加，并以劑量依賴性方式抑制HCC患者的CD8+T細(xì)胞增殖[19]。而在腎透明細(xì)胞癌(CCRCC)組織中也發(fā)現(xiàn)FGL2上調(diào)，并且FGL2表達(dá)與CCRCC中的腫瘤促進(jìn)因子如IL-17和IL-10的表達(dá)密切相關(guān)[20]。這些數(shù)據(jù)表明，sFGL2是腫瘤中關(guān)鍵的免疫抑制劑，可作為腫瘤免疫治療的新靶點(diǎn)。

3.4sFGL2與移植 CD4+CD25+Tregs在移植耐受性的誘導(dǎo)和維持中發(fā)揮了關(guān)鍵作用[21-23]。而作為CD4+CD25+Tregs的效應(yīng)分子，sFGL2在移植中的應(yīng)用越來(lái)越受到重視。在FGL2轉(zhuǎn)基因小鼠移植模型中，CD4+Tregs的數(shù)量和免疫抑制活性顯著升高，而效應(yīng)T細(xì)胞對(duì)同種異體抗原刺激的增殖能力降低[24]。BARTCZAK等[25]發(fā)現(xiàn)FGL2Tg小鼠的血漿sFGL2水平與野生型小鼠相比也顯著增加，其Tregs免疫抑制活性較對(duì)照組高，抑制T細(xì)胞增殖的能力也增強(qiáng)。與FGL2-/-小鼠相比，F(xiàn)GL2Tg小鼠的T細(xì)胞對(duì)同種異體抗原、抗CD3/CD28單克隆抗體刺激增殖能力降低，髓源性樹(shù)突細(xì)胞擴(kuò)增能力降低。在小鼠皮膚移植模型中，重組FGL2可以增加皮膚移植的存活率。然而，在停止治療后的3-9天內(nèi)則產(chǎn)生了細(xì)胞介導(dǎo)的移植排斥反應(yīng)。同樣，在心臟移植的小鼠中使用重組FGL2治療也發(fā)生了類似的情況[26]。而在肝移植耐受模型小鼠中，sFGL2通過(guò)誘導(dǎo)M2型庫(kù)普弗細(xì)胞極化進(jìn)而介導(dǎo)免疫耐受，并延緩肝急性排斥的進(jìn)展[27]。除了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)之外，國(guó)內(nèi)研究者也發(fā)現(xiàn)在同種異體腎移植患者中，移植腎急性排斥患者外周血sFGL2水平及Treg比例、IFN-γ等促炎因子升高，升高的程度與移植排斥嚴(yán)重程度及類型相關(guān)，其機(jī)制可能是sFGL2通過(guò)上調(diào)Caspase,TNF,Bcl-2,NFKB等凋亡信號(hào)通路中的促凋亡基因誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡[28]。綜上所述，國(guó)內(nèi)外研究證實(shí)了FGL2在誘導(dǎo)移植耐受中所發(fā)揮的重要作用，但目前研究大多局限于動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)，過(guò)渡到臨床仍然需要較長(zhǎng)一段時(shí)間。

3.5sFGL2與動(dòng)脈粥樣硬化 sFGL2與動(dòng)脈粥樣硬化疾病的研究較少，在冠心病患者中，研究者發(fā)現(xiàn)其外周血sFGL2及CD4+CD25+CD127lowTregs的數(shù)量與慢性穩(wěn)定心絞痛和胸痛綜合征患者相比有所下降[29]，而經(jīng)影像學(xué)確證的冠心病患者的血清中sFGL2水平也降低，且與改良Gensini評(píng)分及病變血管數(shù)量之間存在顯著相關(guān)性，證實(shí)sFGL2參與了動(dòng)脈粥樣硬化的病程，但相關(guān)機(jī)制尚不清楚，研究者認(rèn)為sFGL2可通過(guò)阻止NF-κB核易位抑制DC細(xì)胞的成熟從而加強(qiáng)其抗炎作用，同時(shí)，sFGL2可抑制體液及細(xì)胞免疫發(fā)揮抗炎作用，從而使斑塊的穩(wěn)定性增加[30]。因此，sFGL2可能作為T(mén)regs細(xì)胞分泌的一種效應(yīng)分子，與Tregs傳統(tǒng)的抗炎因子一樣，參與到動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的發(fā)病及斑塊的破裂中。但目前僅有少量臨床研究報(bào)道，缺乏動(dòng)物性實(shí)驗(yàn)，且樣本量少，不具有代表性，因此，需要更進(jìn)一步研究才能弄清楚機(jī)制。

4 結(jié) 論

在過(guò)去幾年中，一系列研究證實(shí)了sFGL2作為T(mén)regs的新型效應(yīng)分子的免疫調(diào)節(jié)作用，并在基因、分子結(jié)構(gòu)等方面取得了很大的進(jìn)展。盡管如此，關(guān)于介導(dǎo)sFGL2作用的上游信號(hào)和精準(zhǔn)的下游途徑，仍有許多未被闡明。進(jìn)一步探索sFGL2的相關(guān)生物學(xué)過(guò)程及免疫抑制機(jī)制有利于為免疫耐受相關(guān)疾病尋找一個(gè)新的突破口。