系統性紅斑狼瘡患者外周血B細胞中PD-L1的表達及臨床意義

陸 燕，覃小升

(來賓市興賓區人民醫院檢驗科,廣西來賓 546100)

系統性紅斑狼瘡(SLE)是我國最常見的自身免疫系統疾病，也是一種累及機體多系統、多臟器的疾病[1]。SLE可導致機體多種臟器功能障礙，SLE患者病情活動度不同，預后不同[2]。狼瘡性腎炎(LN)是我國最常見繼發性的腎小球疾病，是由于自身抗體產生導致腎臟免疫復合物形成和沉積，免疫復合物通過經典和旁路途徑激活補體系統造成腎臟損傷[3-4]。血清中程序性死亡分子1(PD-1)與其配體(PD-L1)組成的信號途徑是對T細胞激活的調節和T細胞耐受的維持有重要的臨床意義[5]。積極評價SLE患者病情嚴重程度和腎臟損傷情況具有重要的臨床意義，本研究探討了SLE患者外周血B細胞中PD-L1水平與患者腎臟損傷及病情的關系，現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年5月至2017年5月在本院診斷為SLE的50例患者為研究對象，SLE的診斷參照中華醫學會指定的相關診斷標準。納入標準：(1)確診為SLE；(2)依從性好，同意進行本研究的，能完成隨訪。排除標準：(1)既往合并高血壓、糖尿病、冠心病、甲狀腺疾病、肝臟疾病等其他慢性疾病的患者；(2)精神異常或合并其他認知功能障礙的患者；(3)合并其他自身免疫系統疾病或其他可能導致患者腎臟功能損傷疾病的患者；(4)合并妊娠、哺乳或其他認知功能障礙的患者；(5)近期使用了激素或免疫抑制劑治療或其他可能影響病情評價藥物的患者。納入研究的50例SLE患者中，男6例，女44例；平均(34.2±6.5)歲；體質量指數(BMI)為(22.5±3.5)kg/m2。根據SLE疾病活動指數分級(SLEDAI)將SLE患者分為SLE活動期組(25例)和SLE非活動期組(25例)，SLE活動期組SLEDAI評分≥10分，SLE非活動組SLEDAI評分<10分。SLE活動期患者中，男2例，女23；平均(35.6±6.7)歲，SLE非活動期組中，男4例，女21例，平均(33.8±6.3)歲。另選擇同期20例健康成人作為對照組，其中男3例，女17例；平均(34.8±6.2)歲；BMI(22.7±3.2)kg/m2；兩組性別、年齡、BMI等比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2觀察指標 (1)腎臟損傷評價：本研究中所有LN患者均經皮腎穿刺進行腎臟病理活檢，根據腎穿刺活檢結果分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ型狼瘡；(2)外周血B細胞PD-L1表達水平檢測：采用收集患者和健康人外周血單個核細胞制備單核細胞懸液加入2支試管中，分別加入FITC標記的抗人PD-L1抗體(anti-HPD-L1-FITC)和PE標記的抗人CD19抗體(anti-HCD19-PE)(均購自ATCC公司),1 000 r/min 離心5 min，棄上清液，4%多聚甲醛固定后加入300 μL PBS 上機采用流式細胞儀進行分析，以雙色點圖分析B淋巴細胞PD-L1的表達。

2 結 果

2.1不同病情的SLE患者B細胞中CD19+、CD19+/PD-L1水平比較 SLE活動期組患者CD19+水平均高于SLE非活動期組和對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；SLE活動期患者CD19+/PD-L1水平均高于非活動期患者和對照組患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 不同組B細胞中CD19+水平和CD19+/PD-L1水平比較

2.2不同CD19+和CD19+/PD-L1水平的患者腎臟損傷程度的關系 根據CD19+和CD19+/PD-L1水平分為低水平和高水平組(以CD19+或CD19+/PD-L1水平的中位數為參考點，低于其中位數水平為低水平組，高于其中位數水平為低水平組)，CD19+高水平和CD19+/PD-L1高水平的患者腎損傷的發生率更高，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同CD19+和CD19+/PD-L1水平的

表3 LN患者腎功能不全發生的風險因素分析

2.3SLE患者發生腎功能不全發生的風險因素分析 以性別、年齡、BMI、尿蛋白定量、腎臟病理分級、血清中CD19+、CD19+/PD-L1，以腎功能不全為終點事件，采用logistic回歸分析探討結果提示，CD19+/PD-L1、LN Ⅳ期是LN患者腎功能不全發生的獨立危險因素，見表3。

3 討 論

SLE的發生、發展與T細胞異常活化和共同刺激免疫表達有關，研究提示PD-1/PD-L1在外周血免疫耐受和自身免疫疾病過程中有重要的臨床意義，研究證實PD-1基因過表達的小鼠可以誘發自身免疫性擴大性心肌病[6]。PD-1影響T細胞的生物學行為，進而影響多種細胞因子的表達，導致患者T細胞功能下降[7]，進而參與自身免疫系統疾病的發生、發展。

SLE是多系統受累的自身免疫系統疾病，臨床表現多種多樣。SLE根據病情輕重不一，病情穩定者可不出現任何臟器損傷情況，病情嚴重者可累及患者多種臟器，導致患者臟器功能障礙，甚至危及患者生命[8-10]。 狼瘡病情活動評分是評價SLE病情的重要指標之一，當患者病情活動時可出現腎臟損傷、血液系統疾病，甚至狼瘡性腦病。本研究采用SLEDAI對患者病情進行評分，發現病情活動的患者CD19+細胞表達和PD-1水平明顯更高，這就意味著B細胞表面PD-L1表達水平可能參與B細胞的生物學行為，促進免疫損傷的進展，進而調控SLE的病情發展。

LN是導致繼發性腎損傷的主要疾病，LN是多種免疫復合物導致腎臟損傷，LN發病過程中大量細胞外基質大量沉積、誘發腎臟病理生理改變[11-13]。LN病情及預后不一，輕者對患者關腎功能無明顯影響，病情嚴重者可導致患者腎功能衰竭進入尿毒癥甚至導致死亡[14-15]。找到一種無創評價患者腎臟病變程度的評價指標具有重要的臨床意義。相關性分析結果也證實了外周血中B細胞含量及PD-L1表達水平與患者腎臟損情程度密切相關，PD-L1水平不僅可以用于評價SLE病情也可以運用于評價患者腎臟損傷程度。

4 結 論

不少SLE患者腎功能損傷最終可能發展為腎功能不全，本研究探討了SLE患者腎功能不全的危險因素，結果發現B細胞表達的PD-L1水平、LN Ⅳ是患者進展為腎功能不全的獨立危險因素，提示外周血B細胞的PD-L1水平與患者病情損傷密切相關，可能成為SLE患者疾病進展和預后的指標。