血紅蛋白H檢測(cè)在α-珠蛋白生成障礙性貧血和MDS診斷中的意義

孫 雪，薄麗津，徐 艷，趙玉平

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院血液病醫(yī)院/血液學(xué)研究所檢測(cè)中心，天津 300020)

血紅蛋白H(HbH)為一種異常血紅蛋白，患者父母一方a珠蛋白基因型為(α-/αα)，另一方a珠蛋白基因型為(--/αα)，患者自父母雙方繼承了異常a珠蛋白基因，其基因型為(α-/--)，由于α鏈不足，無(wú)α鏈配對(duì)的β鏈自行聚合成β四聚體即HbH。通常情況下，HbH是診斷α-珠蛋白生成障礙性貧血又稱α-地中海貧血(簡(jiǎn)稱α-地貧)的金標(biāo)準(zhǔn)。工作中，在其他非α-地貧患者的標(biāo)本中也可檢測(cè)到HbH。本文總結(jié)本院 2007年1月至2017年10月19 699例HbH檢測(cè)結(jié)果，對(duì)其陽(yáng)性結(jié)果結(jié)合病例資料及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道做一回顧性分析。

1 資料與方法

1.1一般資料 所有標(biāo)本均來(lái)自臨床上懷疑有溶血發(fā)生的患者。2007年1-10月本院檢測(cè)中心溶血室檢測(cè)HbH 19 699例，陽(yáng)性結(jié)果79例，陽(yáng)性率0.4%。同一期間臨床上有明確診斷病例39例。其中α-地貧組34例，男性11例，女性23例，男女比例為1∶2.09，年齡3～60歲，中位年齡21.5歲；骨髓增生異常綜合征(MDS)伴獲得性HbH病組5例,男性4例,女性1例。

1.2儀器與試劑 分別采用Sysmex XE-5100型血細(xì)胞分析儀及配套血常規(guī)及網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)試劑；Beckman Coulter AU2700型全自動(dòng)生化分析儀及配套血清膽紅素檢測(cè)試劑；D-10血紅蛋白分析儀(美國(guó)Bio-Rad公司)及配套血紅蛋白組分分析試劑盒；北京瑞爾達(dá)生物科技有限公司提供的游離血紅蛋白測(cè)定試劑盒。

1.3方法

1.3.1血常規(guī)及網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè) 靜脈血以乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝后，使用Sysmex XE-5100型血細(xì)胞分析儀檢測(cè)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、血紅蛋白(Hb)、網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(Ret)、紅細(xì)胞平均體積(MCV)等指標(biāo)。

1.3.2血清膽紅素檢測(cè) 空腹靜脈血經(jīng)促凝、離心后，取上層血清，使用Beckman Coulter AU2700型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)總膽紅素(TBIL)、間接膽紅素(IBIL)等指標(biāo)。

1.3.3HbH、血漿游離血紅蛋白、血漿結(jié)合珠蛋白檢測(cè) 靜脈血以EDTA-K2抗凝后，使用D-10血紅蛋白分析儀進(jìn)行Hb組分分析，對(duì)懷疑有HbH的標(biāo)本再用酸性血紅蛋白醋酸纖維膜電泳確認(rèn)，具體方法參見(jiàn)文獻(xiàn)[1]。空腹靜脈血經(jīng)肝素鈉抗凝、離心后，取上層血漿，采用過(guò)氧化物酶法測(cè)定游離血紅蛋白(F-Hb)；用電泳法檢測(cè)血漿結(jié)合珠蛋白(Hp)，具體方法參見(jiàn)文獻(xiàn)[1]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，對(duì)α-地貧組各標(biāo)本的HbH含量及相對(duì)應(yīng)的血常規(guī)、網(wǎng)織紅細(xì)胞、膽紅素、F-Hb進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1α-地貧組 實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表1。本研究對(duì)各標(biāo)本的HbH含量及相對(duì)應(yīng)的血常規(guī)、網(wǎng)織紅細(xì)胞、膽紅素、F-Hb進(jìn)行兩組數(shù)據(jù)間的Pearson相關(guān)性分析，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2MDS伴獲得性HbH病組 共5例，男性4例，女性1例。5例患者的一般資料及實(shí)驗(yàn)室相關(guān)檢查結(jié)果見(jiàn)表3、4。

表1 34例α-地貧患者實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果

表2 實(shí)驗(yàn)室檢查的相關(guān)性分析

表3 5例MDS伴獲得性HbH病患者一般資料及相關(guān)溶血檢查結(jié)果

表4 5例MDS伴獲得性HbH病患者血常規(guī)、生化及形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果

3 討 論

3.1HbH病 HbH病是一種由于血紅蛋白α基因缺失導(dǎo)致血紅蛋白合成異常的α-地貧。α-地貧是一組由于α珠蛋白鏈的合成受到部分或完全抑制所引起的遺傳性溶血性貧血。α珠蛋白基因定位于第16號(hào)染色體短臂，健康人自父母雙方各繼承兩個(gè)α珠蛋白基因(αα/αα)，合成足夠的α珠蛋白鏈。若繼承了父母有缺陷的α珠蛋白基因，則使α珠蛋白生成障礙而發(fā)生α-地貧。

不同類型的α-地貧臨床表現(xiàn)與α基因受累的數(shù)目和程度有關(guān)。HbH病為缺乏3個(gè)α基因所致。在HbH病患者體內(nèi)，由于α鏈合成的不足，患者在胎兒期或成人后出現(xiàn)過(guò)剩的γ珠蛋白鏈或β珠蛋白鏈，形成γ四聚體即HbBart′s或β四聚體即HbH。表現(xiàn)在Hb電泳中出現(xiàn)HbH，其含量約為5%～40%。本研究中27例患者的HbH含量在此范圍中，與文獻(xiàn)報(bào)道相符[2]，7例不在此范圍中。

HbH氧親和力高、不穩(wěn)定、易在紅細(xì)胞內(nèi)沉淀形成HbH包涵體，導(dǎo)致紅細(xì)胞變形性降低，易在體內(nèi)破壞，發(fā)生溶血性貧血。 所以這類患者一般情況下游離血紅蛋白升高，結(jié)合珠蛋白降低，間接膽紅素升高。本研究對(duì)各標(biāo)本HbH含量與對(duì)應(yīng)的RBC、Hb、Ret、MCV、FHB及IBIL的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了相關(guān)性分析,結(jié)果表明HbH含量與Ret，F(xiàn)HB及IBIL的檢測(cè)結(jié)果呈正相關(guān)。本文中34例患者，29例(85.2%)患者Ret隨HbH含量增加而升高；27/29例(93.1%)患者FHB隨HbH含量增加而升高；23/28例(82.1%)患者IBIL隨HbH含量增加而升高。與文獻(xiàn)報(bào)道相符[2]。

3.2MDS伴獲得性HbH病 個(gè)別MDS和急性髓系白血病(AML)等惡性血液疾病患者也可出現(xiàn)HbH，因主要見(jiàn)于MDS，并且由于其發(fā)病機(jī)制的獨(dú)特性，STEENSMA等[3]提出“MDS相關(guān)α地中海貧血(ATMDS)”。ATMDS診斷標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在HbH；(2)患有其他惡性血液病(主要是MDS)；(3)排除先天性HbH病。

本研究的5例MDS伴獲得性HbH病患者，結(jié)合臨床表現(xiàn)、血常規(guī)及骨髓象改變，確診為MDS。同時(shí),5例患者HbH檢測(cè)陽(yáng)性，但依據(jù)患者均系祖籍北方及病史和家族史，可以排除遺傳性HbH病。最后診斷為“MDS伴獲得性HbH病”。

現(xiàn)已證明MDS出現(xiàn)HbH有兩種機(jī)制：一種為MDS異常克隆的紅系祖細(xì)胞4個(gè)α珠蛋白基因中有3個(gè)缺失，即--/α-，α珠蛋白鏈合成減少；另一種是由于ATRX基因突變所致，該突變使所有4個(gè)α珠蛋白基因表達(dá)明顯降低[4-5]。研究結(jié)果顯示大部分ATMDS患者存在體細(xì)胞X-linked地貧伴智力障礙(ATRX)基因點(diǎn)突變[6-7]，僅有少數(shù)研究報(bào)道ATMDS患者存在第16號(hào)染色體a珠蛋白基因區(qū)域異常。ATRX基因異常通過(guò)多種途徑影響a珠蛋白的表達(dá)，這與ATRX蛋白功能密切相關(guān)。作為染色質(zhì)重塑因子[8-10]，ATRX蛋白異常將影響組蛋白H3.3嵌入、基因穩(wěn)定性及修復(fù)等過(guò)程[11]，引起ATMDS患者α珠蛋白基因異常及DNA復(fù)制缺陷；RATNAKUMAR等[12]研究結(jié)果顯示，抑制性組蛋白變體mH2A作為ATRX蛋白新伴侶，亦參與調(diào)節(jié)α-地貧的表現(xiàn)型，ATRX蛋白可抑制mH2A在染色質(zhì)的沉積；ATRX蛋白異常時(shí)，mH2A在α珠蛋白基因位點(diǎn)聚集程度增加，從而抑制α珠蛋白表達(dá)。不論何種原因所致α珠蛋白表達(dá)受阻，均會(huì)在血紅蛋白電泳中出現(xiàn)HbH，造成部分MDS患者HbH檢測(cè)陽(yáng)性。

4 結(jié) 論

雖然HbH是診斷α-地貧的金標(biāo)準(zhǔn),但HbH不僅僅存在于α-地貧中，在MDS也可檢測(cè)到。給臨床診斷提供了依據(jù)。同時(shí)本文探討了HbH病患者的HbH含量與Ret，F(xiàn)-Hb及IBIL的檢測(cè)結(jié)果呈正相關(guān)，而MDS伴獲得性HbH病的病例較少無(wú)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，有待于樣本量擴(kuò)大開(kāi)展進(jìn)一步研究。