MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP聯合檢測在甲狀腺癌中的診斷價值

林 勝

(資陽市第一人民醫院檢驗科，四川資陽 641300)

甲狀腺癌是最常見的一種惡性腫瘤，多發于兒童或40歲以下的女性，甲狀腺癌生長較為緩慢，但易出現局部或淋巴轉移，并且臨床預后差異較大，目前缺乏有效的診斷手段[1]。模型基質金屬蛋白酶1(MT1-MMP)、長鏈非編碼RNASNHG 15(LncRNASNHG 15)以及Yes 相關蛋白(YAP)均在甲狀腺癌組織中異常表達，對癌細胞的增殖、凋亡具有調控作用，但關于三者對甲狀腺癌診斷價值的研究較少[2-4]。本文主要探究MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP對甲狀腺癌的診斷價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年7月至2017年7月于本院進行治療的甲狀腺癌患者共186例作為觀察組，包括男58例，女128例，乳頭狀癌112例、濾泡狀癌41例、未分化癌17例和髓樣癌16例。患者年齡21～68歲，平均(42.54±3.26)歲。 選擇同期于本院進行健康體檢者50例作為對照組，包括男17例，女33例，年齡23～70歲，平均(43.23±3.57)歲。納入標準：(1)年齡在20～70歲之間；(2)符合甲狀腺癌的診斷標準[5]，均為新發患者；(3)資料完整；(4)簽署知情同意書。排除標準：(1)合并其他惡性腫瘤；(2)使用過激酶抑制劑或細胞毒藥物進行治療的患者；(3)合并其他甲狀腺疾病；(4)妊娠或哺乳期婦女。

1.2方法 收集所有患者的基本資料，并在入院進行病理檢查時取瘤體樣本放置于生理鹽水中在-80 ℃條件下保存，做好標簽以備后續，使用免疫組化SP法檢測每份樣本中MT1-MMP、YAP和LncRNA SNHG15表達情況，試劑盒購買于上海創翼生物科技有限公司，MT1-MMP、YA和LncRNA SNHG15P主要分布于細胞漿，呈黃色至褐色，每個樣本隨機選取選擇6個高倍視野(×400倍)計算表達陽性率，以顏色為棕黃色、棕褐色以及褐色并且染色范圍大于20%。使用Western blot檢測每份樣本中MT1-MMP、YAP和LncRNA SNHG15蛋白相對表達量，試劑盒購買于Dharmacon公司，100 V電泳2 h，使用Quantity One 1-D分析軟件對蛋白質印跡條帶進行定量，相對表達量=目的蛋白測定值/GAPDH測定值。

2 結 果

2.1觀察組與對照組三種蛋白陽性率比較 觀察組組織MT1-MMP、YAP和LncRNA SNHG15表達陽性率均明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

2.2觀察組與對照組三種蛋白Westen blot結果比較 觀察組組織MT1-MMP、YAP和LncRNA SNHG15蛋白相對表達量均明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2、圖1。

表1 觀察組與對照組三種蛋白陽性率比較

表2 觀察組與對照組三種蛋白Westen blot結果比較

圖1 觀察組與對照組三種蛋白Westen blot結果比較

表3 MT1-MMP、YAP 、LncRNA SNHG15表達與甲狀腺癌臨床病理參數的關系

續表3 MT1-MMP、YAP 、LncRNA SNHG15表達與甲狀腺癌臨床病理參數的關系

2.3MT1-MMP、YAP 、LncRNA SNHG15表達與甲狀腺癌臨床病理參數的關系 不同性別和年齡段患者組織MT1-MMP、YAP蛋白表達陽性率及LncRNA SNHG15蛋白相對表達量比較，差異無統計學意義(P>0.05)，瘤體直徑大于2 cm的組織YAP表達水平明顯高于瘤體直徑小于2cm的組織，差異有統計學意義(P<0.05)，出現包膜浸潤的組織YAP及LncRNA SNHG15蛋白表達水平明顯高于未出現包膜浸潤的組織，差異有統計學意義(P<0.05)，出現淋巴轉移的組織MT1-MMP表達水平明顯高于未出現淋巴轉移的組織，差異有統計學意義(P<0.05)，TNM分級為Ⅲ級和Ⅳ級的組織YAP表達水平明顯高于Ⅰ和Ⅱ級的組織，差異有統計學意義(P<0.05)，MT1-MMP、YAP 及LncRNA SNHG15表達水平的增高在乳頭狀腺癌患者中的增高最為明顯，其次為濾泡狀癌。見表3。

3 討 論

甲狀腺癌是發病率最高的內分泌系統惡性腫瘤之一，在兒童和年輕女性中多發，嚴重威脅著人類健康。甲狀腺癌早期癥狀較為隱匿，較難診斷和發現，易發生腫瘤轉移，且其預后差異較大[6]。目前關于甲狀腺癌的發病機理尚不完全明確，是當下研究熱點之一。

甲狀腺癌具有較高的淋巴轉移率和較強的侵襲性，研究表明細胞基底膜和間質組織的破壞是惡性腫瘤轉移的關鍵。MT1-MMP是一種膠原蛋白酶，被活化后可降解層黏連蛋白、膠原蛋白、玻璃黏連蛋白、間質膠原等多種細胞外基質蛋白，破壞細胞外基質微環境的平衡[7]。本次研究結果表明，甲狀腺癌患者瘤體組織中的MT1-MMP蛋白表達水平明顯高于健康人群，并且出現包膜浸潤和淋巴轉移的瘤體組織的MT1-MMP蛋白表達水平明顯高于未出現浸潤和轉移的組織。以往研究也發現，MT1-MMP在肺癌、黑色素瘤、肝癌等的浸潤和轉移中起著重要作用[8]。一方面，MT1-MMP可降解細胞外基質導致腫瘤細胞易脫落轉移，另一方面可能是由于MT1-MMP可上調血管內皮生長因子的活性，促進腫瘤組織的血管和淋巴的生成，從而導致浸潤和淋巴轉移[9]。

YAP蛋白是一種轉錄調控因子，在細胞增殖中起著重要作用，YAP可通過調節SMAD以及轉錄增強區域對轉錄進行調控，與腫瘤細胞的惡性增殖密切相關[10]。本次研究結果顯示，甲狀腺癌患者瘤體組織中的YAP表達水平明顯高于健康人群，并且瘤體直徑大于2 cm和TNM分級為Ⅲ級Ⅳ級的YAP表達水平明顯高于其他類型組織，表明高YAP表達水平預示著較為嚴重的腫瘤等級和較差的預后。前期研究也提示，YAP表達水平與惡性腫瘤術后生存期存在負相關性[11]。YAP不但有促進增殖的能力，還可以誘導survivin蛋白表達，減少腫瘤細胞凋亡，表明高YAP水平預示腫瘤細胞有更強的增殖能力[12]。

LncRNA SNHG15是一類長度為200個核酸的保守非編碼RNA，與組織分化、細胞增殖、胚胎發育等過程密切相關[4]。目前關于LncRNA SNHG15與甲狀腺癌關系的研究極少。本次研究結果顯示，甲狀腺癌患者瘤體組織中的LncRNA SNHG15表達水平明顯高于健康人群，出現包膜浸潤的組織LncRNA SNHG15蛋白表達水平明顯高于未出現包膜浸潤的組織。以往研究顯示，LncRNA SNHG15的過表達可能與瘤體組織的大小、血管侵犯等有關[13]，是影響肝癌預后的獨立危險因素[14]，本次研究發現，LncRNA SNHG15僅與腫瘤的浸潤有關，這可能是受到樣本數量過小等因素的影響，未來需要更多大樣本研究進行驗證。

本次研究使用免疫組化對MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP的表達進行定性和定位分析，使用Western blot法對MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP的表達進行定量分析。除上述兩種方法外，今后的實驗中還可采用實時熒光定量PCR法檢測組織和外周血中MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP表達水平，以進一步驗證本實驗的研究結果。

綜上所述，MT1-MMP的高表達預示著甲狀腺癌的包膜浸潤和淋巴轉移，YAP高表達預示著甲狀腺癌更強的增殖能力和更差的預后，LncRNA SNHG15也與包膜浸潤密切相關，因此MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP聯合檢測有助于判斷甲狀腺癌的惡性程度、浸潤轉移及預后效果，為臨床診療提供依據。

4 結 論

本次研究使用免疫組化和Western blot法發現，MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP在甲狀腺癌患者中存在過表達，并且其表達水平與瘤體直徑、包膜浸潤以及是否出現淋巴轉移有關，三項指標聯合檢測有望為甲狀腺癌的臨床診療提供新思路。