反相高效液相色譜法測定曲咪新乳膏中醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑的含量

劉曉玲，梁曉東，崔楊，王婷婷，劉琳，丁銀春，周化，范石虎

曲咪新乳膏是由醋酸曲安奈德、硝酸咪康唑、硫酸新霉素組成的復方制劑，每克乳膏含有醋酸曲安奈德1 mg，硝酸咪康唑10 mg，硫酸新霉素3 000 U。適應證：用于濕疹、接觸性皮炎、脂溢性皮炎、神經性皮炎、體癬、股癬及手足癬等。曲咪新乳膏的已有國家標準[1]中，只制訂了醋酸曲安奈德的含量測定。該方法采用氯仿提取，四氮唑鹽比色法[2]使用紫外分光光度計測定[3]。其中樣品前處理過程繁瑣，溫度、光照、空氣均會對檢測結果產生影響，且未對硝酸咪康唑的含量[4-5]進行測定。本文采用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)同時測定兩組分含量[6-9]，試樣前處理簡單且樣品穩定，比已有標準更具優勢。

1 試藥與儀器

1.1試劑與藥品醋酸曲安奈德對照品(中國食品藥品檢定研究院，生產批號100125-201406)；硝酸咪康唑對照品(中國食品藥品檢定研究院，生產批號100213-201406)；硫酸新霉素(宿州億帆藥業有限公司提供，生產批號 151109)；甲醇(色譜純，美國Tedia)，乙酸銨(分析純，國藥集團)，水為娃哈哈純凈水；曲咪新乳膏(宿州億帆藥業有限公司)3批(生產批號：151101、 151102、151103)。

1.2儀器島津LC-20A高效液相色譜儀，安捷倫1260高效液相色譜儀，Agilent SB-C18色譜柱，METTLER TOLEDO MS105DU電子天平。

2 方法和結果

2.1色譜條件色譜柱：Agilent SB-C18(150 mm×4.6 mm，5.0 μm)；流動相：A甲醇∶0.05%乙酸銨(85∶15)，B甲醇∶0.05%乙酸銨(75∶25)，按表1進行梯度洗脫；流速：1.0 mL/min；檢測波長：240 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。

表1 梯度表

2.2溶液的配制

2.2.1對照品溶液的制備 精密稱取醋酸曲安奈德對照品約10 mg置100 mL量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，作為貯備液。精密稱取硝酸咪康唑對照品約10 mg、移取10 mL醋酸曲安奈德對照品貯備液均置25 mL量瓶中，加入甲醇稀釋定容至刻度，作為對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 精密稱取乳膏約2.0 g，置燒杯中，加甲醇30 mL，置80 ℃水浴中5 min，轉移至50 mL量瓶中，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，在冰浴中冷卻2 h，迅速濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.3陰性溶液的制備 取除醋酸曲安奈德及硝酸咪康唑之外的原輔料按配比制成空白基質，照“2.2.2”項下方法制成陰性溶液。

2.3色譜行為分別精密量取“2.2.1”、“2.2.2”、“2.2.3”項下對照品、供試品、陰性對照溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。色譜圖見圖1。

結果表明，加入硫酸新霉素的空白基質在此液相條件下對主藥峰無干擾，主藥峰拖尾因子均在0.95～1.05之間，理論塔板數醋酸曲安奈德為2 960，硝酸咪康唑為14 686。

2.4線性關系與范圍配制含醋酸曲安奈德0.1 mg/mL，硝酸咪康唑1 mg/mL的混合對照溶液。

對照品溶液

供試品溶液

陰性溶液

精密量取混合對照溶液1、2、3、4、6 mL分別置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度。分別吸取20 μL進樣，按“2.1”項下色譜條件測定，以峰面積均值(Y)為縱坐標，進樣濃度(X)為橫坐標進行回歸分析，得醋酸曲安奈德、硝酸咪康唑的回歸方程分別為Y=39 686.578 1X+5.439 7(r=1.000 0)，Y=2 539.434 6X+34.297 4(r=0.999 6)。

結論：醋酸曲安奈德在0.01～0.06 mg/mL濃度范圍內線性關系良好；硝酸咪康唑在0.1～0.6 mg/mL濃度范圍內線性關系良好。

2.5穩定性實驗取“2.2.2”項下供試品溶液，室溫放置，分別于0、2、4、8、12 h取樣，量取20 μL注入液相色譜儀，記錄醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑的峰面積。

結果表明，醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑兩組分峰面積的RSD分別為0.34%、0.56%，說明樣品溶液在12 h內穩定。

2.6重復性實驗按照“2.2.2”項下方法配制6份樣品溶液，連續進樣6次，記錄醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑的峰面積。

結果表明，醋酸曲安奈德、硝酸咪康唑兩組分峰面積的RSD分別為0.18%、0.26%，說明該方法重復性良好。

2.7精密度實驗取線性考察項下的對照品溶液，連續進樣6次，分別計算6次的峰面積RSD。

結果：醋酸曲安奈德RSD=0.16%，硝酸咪康唑RSD=0.21%，精密度良好。

2.8定量限和檢測限取混合對照貯備液定量稀釋，按“2.1” 項下方法測定，以S/N=10計算，醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑的定量限分別為0.28 ng、0.8 ng，按S/N=3計算，醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑的定量限分別為0.084 ng、0.2 ng。

2.9回收率實驗配制含醋酸曲安奈德0.408 mg/mL，硝酸咪康唑4.032 mg/mL的混合對照貯備液。

稱取空白基質各2.0 g置各燒杯中，再精密量取混合對照儲備液4、5、6 mL加入燒杯，照“2.2”項下方法配制含醋酸曲安奈德、硝酸咪康唑為標示量注80%、100%、120%的樣品溶液，每個濃度各3份，結果見表2。

表2 回收率實驗結果

實驗結果：醋酸曲安奈德平均回收率100.52%，RSD=0.62%，硝酸咪康唑平均回收率99.93%，RSD=0.86%。

曲咪新乳膏的標示量為每克乳膏含有醋酸曲安奈德1 mg，硝酸咪康唑10 mg。

2.10含量測定取三批次樣品，按“2.2.2”項下方法處理樣品，進樣，記錄色譜圖，按照外標法計算樣品中醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑的含量，結果見表3。

表3 三批含量測定結果

3 結論

由于醋酸曲安奈德與硝酸咪康唑均可溶于甲醇，醋酸曲安奈德在0.01～0.06 mg/mL范圍內線性關系良好，硝酸咪康唑在0.1～0.6 mg/mL范圍內線性關系良好，所以醋酸曲安奈德與硝酸咪康唑檢查項中的供試品可以共用。

由于曲咪新乳膏中的基質在甲醇中溶解，甲醇提取物中不可避免的殘留有部分基質而影響被測成分分析，還可能會污染色譜柱，故將樣品處理過程中置于冰浴中2 h，既可除去基質對樣品的影響，還可避免污染色譜柱，試驗表明冰浴2 h后迅速使用微孔濾膜濾過，樣品中的乳膏基質大部分可以除去，能夠滿足分析需要。

醋酸曲安奈德在藥典[10]中有使用甲醇∶水(60∶40)作為流動相進行含量測定的，但該方法保留時間較長且不能同時對兩組分進行含量測定，本文中的方法增加了硝酸咪康唑的含量分析，使得曲咪新乳膏的測定標準進一步完善，可以更為準確靈敏地控制乳膏質量。