維生素D在卵巢癌中的作用

李賽賽 盛 波 朱雪瓊

卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，由于缺乏有效的早期診斷方法，大多數(shù)女性確診時(shí)已為晚期，失去了手術(shù)時(shí)機(jī)，其5年生存率只有20%～30%，嚴(yán)重威脅婦女的健康[1]。維生素D(vitamin D)是人體必需的一種維生素，1,25二羥維生素D3[1,25-dihydroxyvitamin D3, 1,25(OH)2D3]是體內(nèi)維生素D的主要活性形式，而25-羥基維生素D(25-hydroxyvitamin D, 25OHD)為1,25(OH)2D3的前體，是目前評(píng)估人體內(nèi)維生素D水平最可靠的指標(biāo)[2]。研究表明，維生素D在人體內(nèi)發(fā)揮了重要作用，不僅參與調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣磷代謝，同時(shí)與多種腫瘤的發(fā)生有著密切的聯(lián)系[3]。近年來(lái)，維生素D在卵巢癌中的作用引起了越來(lái)越多研究者的重視，并取得了一些研究成果。因此，本文就維生素D與卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)、在卵巢癌癌變中的表達(dá)變化、對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響以及卵巢癌預(yù)后的影響等方面的研究進(jìn)展做一綜述。

一、維生素D與卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)

近年來(lái)有關(guān)維生素D與卵巢癌的研究備受關(guān)注，然而關(guān)于體內(nèi)維生素D水平與卵巢癌之間的潛在關(guān)系目前仍存在爭(zhēng)議。Arslan等[4]為研究血清25OHD水平與隨后發(fā)生侵襲性上皮性卵巢癌的風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系，采用巢式病例對(duì)照研究方法，選取隊(duì)列中170例侵襲性上皮性卵巢癌作為病例組，并從隊(duì)列中隨機(jī)抽取配對(duì)的373例健康人作為對(duì)照組，采用放射免疫檢測(cè)兩組診斷前的血清25OHD水平，從血清樣本收集到腫瘤診斷平均隨訪了5.5年，使用配對(duì)Logistic回歸模型分析，控制潛在的混雜因素，研究發(fā)現(xiàn)，即使排除了采血5年內(nèi)確診為卵巢癌的女性，并進(jìn)行一系列的亞組分析如維生素D受體的遺傳變異、臨床分期、病理分級(jí)、組織學(xué)類型、體重指數(shù)(body mass index, BMI)、絕經(jīng)情況等來(lái)控制可能的混雜因素后，血清25OHD水平與卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)沒有相關(guān)性。

Tworoger等[5]應(yīng)用配比的巢式病例對(duì)照研究,研究維生素D水平[血漿25OHD及1,25(OH)2D3水平]與卵巢癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。該研究綜合分析了3項(xiàng)前瞻性隊(duì)列研究中的827例女性(224例病例和603例對(duì)照)，使用放射免疫檢測(cè)其維生素D水平，從血清樣本收集到腫瘤診斷平均隨訪了5.5年，使用配對(duì)Logistic回歸模型來(lái)估計(jì)相對(duì)危險(xiǎn)度(relative risks, RR)和95%置信區(qū)間(95% confidence interval, 95% CI)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血漿25OHD及1,25(OH)2D3水平與卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)均沒有相關(guān)性；而在體重指數(shù)>25kg/m2的婦女中，血漿25OHD水平與卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間存在著顯著的負(fù)相關(guān)，且具有充足的25OHD水平(≥32ng/ml)的婦女與25OHD水平不足的婦女比較，其患漿液性卵巢癌的風(fēng)險(xiǎn)略有下降，RR分別為0.39(95%CI:0.16～0.93)和0.64(95% CI:0.39～1.05)。隨后，一項(xiàng)巢式病例對(duì)照研究分析了來(lái)自7個(gè)隊(duì)列研究中的516例卵巢癌病例和770例對(duì)照，采用化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)25OHD水平，從血清樣本收集到腫瘤診斷平均隨訪了5.9年，并進(jìn)行Logistic回歸模型分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清25OHD濃度與卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)。研究者為了進(jìn)一步評(píng)估聯(lián)系中潛在的異質(zhì)性，對(duì)多種因素進(jìn)行了分層分析，按照腫瘤亞型、抽血年齡、抽血季節(jié)、種族及口服避孕藥進(jìn)行分層分析，結(jié)果仍提示，血清25OHD濃度與卵巢癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)相關(guān)性。然而，按體質(zhì)指數(shù)進(jìn)行的分層分析結(jié)果卻表明，在超重和肥胖(BMI≥25kg/m2)婦女中，體內(nèi)維生素D水平與卵巢癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)[6]。惡性腫瘤風(fēng)險(xiǎn)算法(risk of malignancy algorithm, ROMA)評(píng)分可通過結(jié)合腫瘤標(biāo)志物人類附睪蛋白4(human epididymis protein 4,HE4)和糖鏈抗原-125(carbohydrate antigen 125, CA125)來(lái)預(yù)測(cè)發(fā)生上皮性卵巢癌的風(fēng)險(xiǎn)。Anastasi等[7]的研究納入了180例肥胖婦女(BMI>30kg/m2)，80例正常體重的婦女(BMI<25kg/m2)，使用全自動(dòng)免疫分析儀檢測(cè)血清25OHD水平，并以20.2ng/ml作為劃分界限值，將其分為25OHD水平充足和25OHD水平不足。研究結(jié)果表明，64%的肥胖婦女及11%正常體重的婦女存在血清25OHD水平不足，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。該學(xué)者進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)ROMA評(píng)分高于13%僅在肥胖女性中檢測(cè)到，其中64%的肥胖女性在ROMA評(píng)分高于13%的同時(shí)伴有血清25OHD水平的不足，只有36%的肥胖女性在ROMA評(píng)分高于13%的同時(shí)有充足的25OHD水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示肥胖婦女中低維生素D水平與高ROMA評(píng)分有關(guān)。以上研究結(jié)果表明，雖然維生素D水平與卵巢癌的總體發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)沒有相關(guān)性，但在超重和肥胖婦女中，低維生素D水平與卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)。

Toriola等[8]選取芬蘭孕婦隊(duì)列為研究對(duì)象進(jìn)行配比的巢式病例對(duì)照研究,從血清樣本收集到腫瘤診斷總共隨訪了10年，根據(jù)隨后是否發(fā)展為卵巢癌，分為病例組(201例)和對(duì)照組(398例相同季節(jié)對(duì)照和199例相反季節(jié)對(duì)照)，采用放射免疫檢測(cè)血清25OHD水平，條件Logistic回歸分析表明，血清25OHD濃度與卵巢癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間沒有明顯的相關(guān)性；然而，研究者發(fā)現(xiàn)與血清25OHD充足的婦女(≥75nmol/L)相比，血清25OHD不足(<75nmol/L)的婦女患卵巢癌的風(fēng)險(xiǎn)增加了3倍，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在2016年，Ong等[9]進(jìn)行了一項(xiàng)大型孟德爾隨機(jī)化研究，其中納入了 31719例歐洲女性(10065例卵巢癌病例及21654例對(duì)照)，選取單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位點(diǎn)rs7944926(DHCR7)，rs12794714(CYP2R1)及rs2282679(GC)作為血清25OHD水平的工具變量進(jìn)行分析，研究25OHD濃度與卵巢癌之間的關(guān)聯(lián)性。逆方差加權(quán)法結(jié)果表明，當(dāng)25OHD濃度每降低20nmol/L時(shí)，用SNP聯(lián)合估計(jì)所有上皮性卵巢癌亞型(10065例)的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的優(yōu)勢(shì)比為1.27(95%CI：1.06～1.51)，在高級(jí)別漿液性卵巢癌(4121例)中的優(yōu)勢(shì)比為1.54(95%CI：1.19～2.01)，提示低25OHD水平與較高卵巢癌發(fā)生率相關(guān)，且在高級(jí)別漿液性卵巢癌的關(guān)聯(lián)性最明顯。

二、維生素D在卵巢癌癌變中的表達(dá)變化

近年來(lái)的研究表明，卵巢癌患者的血清25OHD水平顯著低于健康女性及卵巢良性腫瘤患者。Bakhru等[10]選取來(lái)自國(guó)家健康與營(yíng)養(yǎng)調(diào)查研究的7273例研究對(duì)象進(jìn)行了病例對(duì)照研究，采用自動(dòng)化免疫學(xué)方法測(cè)定血清25OHD水平。Logistic回歸分析結(jié)果表明，卵巢癌患者處于低25OHD水平的概率是對(duì)照組的3.68倍。在多變量模型中，當(dāng)調(diào)整了年齡、體重指數(shù)和飲食等潛在的混雜因素之后，血清25OHD水平與卵巢癌的這種關(guān)系依然存在。研究者進(jìn)一步對(duì)包括年齡和膳食鈣攝入在內(nèi)的顯著協(xié)變量進(jìn)行調(diào)整后，發(fā)現(xiàn)卵巢癌患者低25OHD水平的可能性是對(duì)照組的3.92倍。Walentowicz-Sadlecka等[11]的研究納入了72例卵巢癌患者及65例健康女性，所有卵巢癌患者均行理想的腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)(最大殘余癌灶直徑<1cm)，且均接受6個(gè)療程的卡鉑聯(lián)合紫杉醇化療。研究者用電化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定健康女性及卵巢癌患者術(shù)前的血清25OHD濃度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)卵巢癌患者的血清25OHD水平顯著低于健康對(duì)照組，且其出現(xiàn)低維生素D的可能性是對(duì)照組的3.71倍。研究者進(jìn)一步對(duì)卵巢癌患者進(jìn)行亞組分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清25OHD濃度與卵巢癌組織學(xué)亞型、病理分級(jí)、臨床分期及絕經(jīng)情況均無(wú)明顯相關(guān)性。隨后，Granato等[12]的研究納入了61例健康婦女、45例卵巢良性腫瘤婦女及46例近期診斷為卵巢癌的婦女，結(jié)果表明，26%健康婦女、24%卵巢良性腫瘤婦女及80%卵巢癌婦女均處于低血清25OHD水平(<20ng/ml)，且卵巢癌患者的血清25OHD水平與健康女性或卵巢良性腫瘤患者比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。崔偉等[13]納入58例卵巢癌患者，30例卵巢良性疾病患者為卵巢良性疾病組及30例健康女性為對(duì)照組，采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清25OHD水平，研究結(jié)果表明，卵巢癌患者的血清25OHD水平較卵巢良性疾病組和對(duì)照組顯著下降，且血清25OHD濃度在晚期患者(FIGO Ⅲ期和Ⅳ期)中顯著低于早期患者(FIGO Ⅰ期和Ⅱ期)，提示血清25OHD與卵巢癌臨床分期相關(guān)，并隨著腫瘤進(jìn)展其濃度呈下降趨勢(shì)。進(jìn)一步根據(jù)病理類型分析卻發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者的血清25OHD濃度與臨床病理類型(漿液性、黏液性、子宮內(nèi)膜樣、透明細(xì)胞性)無(wú)關(guān)。

三、維生素D對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

1.對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖的影響:研究表明，維生素D與卵巢癌細(xì)胞的增殖密切相關(guān)。Thill等[14]分別用不同濃度(0.001、0.01、0.1、1、10及50μmol/L)活性維生素D(骨化三醇)處理人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3及OVCAR3，用5-溴脫氧尿嘧啶核苷法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同濃度(0.01、0.1、1、10及50μmol/L)骨化三醇均能顯著降低SKOV3及OVCAR3細(xì)胞的增殖活性，且與0.1%DMSO溶劑對(duì)照組比較，10μmol/L骨化三醇組的OVCAR-3細(xì)胞增殖率被抑制到了28%，SKOV-3細(xì)胞增殖率被抑制到了45%。Zhang等[15]用不同濃度(0.1、1、5、10、50、100、200及500nmol/L)的1,25(OH)2D3及(0.2、2、20、40、80及160mg/L)卡鉑處理人卵巢癌SKOV-3細(xì)胞，用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(cell counting kit-8，CCK-8)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，結(jié)果顯示1,25(OH)2D3及卡鉑均呈劑量依賴性地抑制卵巢癌細(xì)胞增殖。與單用卡鉑組比較，1,25(OH)2D3聯(lián)合卡鉑組的抑制率顯著增加，可見兩藥聯(lián)合使用具有協(xié)同抑瘤作用。Jung等[16]采用CCK-8法檢測(cè)3種人卵巢癌細(xì)胞(SKOV3、OVCAR3、OVCA433)的增殖情況，結(jié)果顯示，50μmol/L骨化三醇與71nmol/L苗勒管抑制因子均可抑制卵巢癌細(xì)胞系(SKOV3、OVCAR3、OVCA433)的增殖，且兩者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的抑制作用更加明顯。Abdelbaset-Ismail等[17]用不同濃度(10-10、10-9、10-8及10-7mol/L)1,25(OH)2D3處理人卵巢癌細(xì)胞株A2780，并使用流式細(xì)胞熒光分選技術(shù)計(jì)數(shù)細(xì)胞，結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，1,25(OH)2D3能明顯抑制卵巢癌細(xì)胞增殖，并呈劑量依賴性。薛昕等[18]采用不同濃度(10-9、10-8及10-7mol/L)的1,25(OH)2D3處理人卵巢癌細(xì)胞株HO8910，通過四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]測(cè)定細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率，發(fā)現(xiàn)與無(wú)水乙醇對(duì)照組比較，3個(gè)濃度的1,25(OH)2D3均對(duì)卵巢癌細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用，并呈時(shí)間和劑量依賴性。目前認(rèn)為1,25(OH)2D3主要是通過與維生素D受體(vitamin D receptor, VDR)結(jié)合而發(fā)揮生物活性作用，且細(xì)胞周期調(diào)節(jié)機(jī)制的紊亂在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用。因此，研究者進(jìn)一步采用流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞周期分析，并通過反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)檢測(cè)VDR mRNA的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)1,25(OH)2D3處理組的G0/G1期細(xì)胞比例較無(wú)水乙醇對(duì)照組增高，且1,25(OH)2D3使HO8910細(xì)胞的VDR mRNA的表達(dá)水平上調(diào)，提示1,25(OH)2D3通過上調(diào)VDR mRNA的表達(dá)水平來(lái)誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞周期改變，使細(xì)胞停滯于G0/G1期，從而抑制卵巢癌細(xì)胞增殖。研究表明，p27基因作為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的抑制蛋白(cyclin dependent kinase inhibitors，CDKIs)的家族成員之一，可抑制細(xì)胞進(jìn)入S期，其表達(dá)水平的變化與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系。而S期激酶相關(guān)蛋白(S-phase kinase-associated protein2，Skp2)主要負(fù)責(zé)介導(dǎo)包括p27在內(nèi)的細(xì)胞周期調(diào)控蛋白的泛素化，使細(xì)胞能從G1期進(jìn)入S期，從而進(jìn)行細(xì)胞增殖。李平平等[19]為研究1,25(OH)2D3對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖的影響及經(jīng)1,25(OH)2D3作用后Skp2和p27蛋白表達(dá)變化，選取人卵巢癌細(xì)胞株HO8910作為研究對(duì)象進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況，發(fā)現(xiàn)1,25(OH)2D3呈濃度時(shí)間依賴性地抑制卵巢癌細(xì)胞增殖。流式細(xì)胞技術(shù)顯示，1,25(OH)2D3能增加G0/G1期細(xì)胞比例，減少處于S、G2/M期的細(xì)胞比例，從而降低卵巢癌細(xì)胞增殖指數(shù)。免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn)1,25(OH)2D3組Skp2表達(dá)減少，而p27蛋白表達(dá)增加，提示1,25(OH)2D3可能通過減少Skp2表達(dá)，使p27蛋白表達(dá)增多，引起細(xì)胞周期改變，使癌細(xì)胞停止在G0/G1期，從而阻斷卵巢癌細(xì)胞的增殖過程。隨后，王君等[20]報(bào)道1,25(OH)2D3能呈時(shí)間及劑量效應(yīng)依賴性地抑制卵巢癌HO8910細(xì)胞的增殖，且p27蛋白的表達(dá)水平隨著1,25(OH)2D3作用時(shí)間和作用劑量的增加也相應(yīng)升高結(jié)果基本一致。另一方面，細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控基因GADD45是維生素D重要的靶基因。在卵巢癌細(xì)胞中，1,25(OH)2D3主要通過VDR與位于GADD45 1個(gè)外顯子的維生素D反應(yīng)元件(vitamin D response element, VDRE)結(jié)合，促進(jìn)GADD45基因轉(zhuǎn)錄，上調(diào)其蛋白表達(dá)水平，從而介導(dǎo)細(xì)胞阻滯于G2/M期[21]。程虹等[22]用10-7mol/L 1,25(OH)2D3處理人卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3，MTT分析結(jié)果表明，與乙醇對(duì)照組比較，1,25(OH)2D3對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期結(jié)果顯示，1,25(OH)2D3使處于G0/G1期和G2/M期的細(xì)胞比例增多，而S期細(xì)胞比例明顯減少。免疫印跡分析Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示，1,25(OH)2D3使OVCAR3細(xì)胞的p27和GADD45蛋白表達(dá)增多，提示1,25(OH)2D3通過調(diào)節(jié)p27和GADD45蛋白表達(dá)水平來(lái)調(diào)控細(xì)胞周期，從而抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖。

2.對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響：Zhang等[15]選取人卵巢癌SKOV3細(xì)胞系作為研究對(duì)象，將其分為4組：空白對(duì)照組、10nmol/L 1,25(OH)2D3組、40mg/L卡鉑組及10nmol/L 1,25(OH)2D3聯(lián)合40mg/L卡鉑組，用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組相比，1,25(OH)2D3組細(xì)胞凋亡數(shù)增加不明顯，而卡鉑組細(xì)胞凋亡數(shù)明顯增加，且1,25(OH)2D3聯(lián)合卡鉑組的細(xì)胞凋亡顯著增多。此外，研究者用共聚焦激光掃描顯微鏡下的DAPI染色觀察到了1,25(OH)2D3聯(lián)合卡鉑組細(xì)胞的DNA斷裂、染色質(zhì)濃縮和凋亡小體的形成，且與單用1,25(OH)2D3或卡鉑組的細(xì)胞比較，1,25(OH)2D3聯(lián)合卡鉑組細(xì)胞的凋亡細(xì)胞核DNA片段相對(duì)較多，提示1,25(OH)2D3能明顯增強(qiáng)卡鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。馬淑狀等[23]為研究1,25(OH)2D3單獨(dú)及其與順鉑合用對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響，選取人卵巢癌細(xì)胞株HO8910為研究對(duì)象進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡率結(jié)果顯示，與細(xì)胞對(duì)照組比較，10-7mol/L 1,25(OH)2D3組和4μg/ml順鉑組均能誘導(dǎo)HO8910細(xì)胞凋亡；且兩者合用時(shí)細(xì)胞凋亡率較單用1,25(OH)2D3或順鉑組明顯上升。研究者進(jìn)一步采用免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察促凋亡蛋白Bax的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)與細(xì)胞對(duì)照組比較，單用1,25(OH)2D3組和順鉑組細(xì)胞的Bax蛋白表達(dá)水平上升，兩藥合用組細(xì)胞的Bax蛋白表達(dá)較單用1,25(OH)2D3或順鉑組明顯增強(qiáng)，提示1,25(OH)2D3與順鉑合用能協(xié)同誘導(dǎo)卵巢癌HO8910細(xì)胞凋亡。Jung等[16]通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)測(cè)量卵巢癌細(xì)胞株(SKOV3、OVCAR3、OVCA433)的細(xì)胞DNA片段化水平來(lái)評(píng)估細(xì)胞凋亡情況，結(jié)果顯示與空白對(duì)照組比較，50μmol/L骨化三醇組DNA片段化水平在3組細(xì)胞中均明顯上升；且50μmol/L骨化三醇聯(lián)合71nmol/L苗勒管抑制因子組的細(xì)胞DNA片段化水平與單用71nmol/L苗勒管抑制因子組相比顯著增加，提示維生素D能增強(qiáng)苗勒管抑制因子誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞的凋亡。該課題組進(jìn)一步用免疫印跡法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2、BAX、caspase-3、caspase-9)的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與單用苗勒管抑制因子組比較，骨化三醇聯(lián)合苗勒管抑制因子組的促凋亡蛋白BAX、caspase-3和caspase-9水平升高，而抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)水平下降，提示維生素D通過激活促凋亡蛋白或抑制抗凋亡蛋白的表達(dá)來(lái)促進(jìn)細(xì)胞凋亡。Abdelbaset-Ismail等[17]用不同濃度(10-10、10-9及10-8mol/L)的1,25(OH)2D3處理人卵巢癌細(xì)胞株A2780,使用流式細(xì)胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)與空白對(duì)照組比較，1,25(OH)2D3組的凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯增加。Jiang等[24]選取OVCAR3細(xì)胞系為研究對(duì)象，用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，結(jié)果顯示與乙醇對(duì)照組比較，用10-7mol/L 1,25(OH)2D3處理組凋亡細(xì)胞的比例明顯增加，且1,25(OH)2D3可使細(xì)胞凋亡指數(shù)高達(dá)3.5倍。該學(xué)者進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)維生素D是通過降低體內(nèi)人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT) mRNA的穩(wěn)定性，進(jìn)而降低了端粒酶的活性，誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡。高四海等[25]采用不同濃度(10-9、10-8及10-7mol/L)1,25(OH)2D3處理SKOV3細(xì)胞，采用TUNEL細(xì)胞凋亡試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡，結(jié)果顯示與乙醇對(duì)照組比較，1,25(OH)2D3處理組的SKOV3細(xì)胞核內(nèi)DNA斷裂點(diǎn)增加，細(xì)胞凋亡率升高，且存在顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系，提示1,25(OH)2D3可通過引起SKOV3細(xì)胞DNA斷裂從而誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡。

3.對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲及遷移的影響：Abdelbaset-Ismail等[17]的研究中，采用不同濃度(10-10、10-9、10-8及10-7mol/L)的1,25(OH)2D3處理人卵巢癌細(xì)胞株A2780，使用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的遷移情況，結(jié)果顯示與空白對(duì)照組比較，1,25(OH)2D3處理組呈劑量依賴性地抑制卵巢癌細(xì)胞的遷移。Hou等[26]選取人卵巢上皮腺癌細(xì)胞系SKOV3為研究對(duì)象，用不同濃度(1、10及100nmol/L)的1,25(OH)2D3處理細(xì)胞，通過劃痕實(shí)驗(yàn)評(píng)估其遷移能力，結(jié)果顯示1,25(OH)2D3能明顯抑制卵巢癌細(xì)胞遷移，并呈時(shí)間和劑量依賴性。進(jìn)一步利用Matrigel基質(zhì)膠進(jìn)行體外細(xì)胞侵襲能力研究，發(fā)現(xiàn)1,25(OH)2D3能明顯抑制卵巢癌細(xì)胞侵襲。Lungchukiet等[27]分別用乙醇對(duì)照及10-7、10-8mol/L 1,25(OH)2D3處理卵巢癌OVCAR3細(xì)胞6天，用細(xì)胞劃痕法測(cè)定細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組比較，經(jīng)1,25(OH)2D3處理后細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力明顯減弱，并呈劑量依賴性，提示1,25(OH)2D3能明顯抑制卵巢癌細(xì)胞遷移的能力。同時(shí)用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)10-7mol/L 1,25(OH)2D3對(duì)OVCAR3細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響，結(jié)果顯示與乙醇對(duì)照組比較，1,25(OH)2D3能明顯抑制OVCAR3細(xì)胞的侵襲和遷移。為了進(jìn)一步研究1,25(OH)2D3對(duì)卵巢癌細(xì)胞向大網(wǎng)膜侵襲的抑制作用，該學(xué)者選取熒光素酶標(biāo)記的OVCAR3細(xì)胞，將其與小鼠離體大網(wǎng)膜共培養(yǎng)，利用熒光素酶活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與乙醇對(duì)照組比較，10-7mol/L 1,25(OH)2D3組的OVCAR3細(xì)胞在小鼠大網(wǎng)膜上定植的能力顯著降低，提示1,25(OH)2D3能夠抑制卵巢癌細(xì)胞向小鼠大網(wǎng)膜的侵襲。

四、維生素D對(duì)卵巢癌預(yù)后的影響

研究表明，檢測(cè)維生素D水平可用來(lái)預(yù)測(cè)卵巢癌患者的預(yù)后。Webb等[28]收集了1006例卵巢癌血清標(biāo)本(670例血清樣本在診斷時(shí)收集，其余的336例在治療后收集)，用COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型評(píng)估血清25OHD與卵巢癌生存率之間的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)卵巢癌患者診斷時(shí)的血清25OHD濃度與生存率密切相關(guān)， 在血清25OHD濃度分別為<25nmol/L，25.0～49.9nmol/L，50.0～74.9nmol/L，>75nmol/L的卵巢癌患者中，其5年總體生存率分別為39%、45%、51%、54%，提示卵巢癌患者的生存率隨血清25OHD濃度的增加而升高；但未發(fā)現(xiàn)經(jīng)治療后的卵巢癌患者血清中測(cè)量的25OHD濃度與生存率的關(guān)系。Walentowicz-Sadlecka等[11]用電化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定72例卵巢癌患者術(shù)前的血清25OHD濃度，并根據(jù)血清25OHD濃度將卵巢癌患者分成兩組(25OHD<10ng/ml組和25OHD>10ng/ml組)，使用Kaplan-Meier生存曲線對(duì)其5年總體生存率進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)25OHD<10ng/ml組的卵巢癌患者中位生存期為28周，而25OHD>10ng/ml組的卵巢癌患者中位生存期為45周，提示血清25OHD濃度與好的預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，低維生素D與卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，尤其是在超重和肥胖婦女中。卵巢癌患者中的維生素D水平較卵巢良性腫瘤和健康女性低。維生素D能明顯抑制卵巢癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移，促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞凋亡，并能預(yù)測(cè)卵巢癌的5年生存率。隨著對(duì)維生素D抗腫瘤機(jī)制相關(guān)研究的不斷深入，維生素D及其類似物可以為卵巢癌的治療和預(yù)防提供新的思路。