樹上蝦丙酮提取物抗氧化活性和還原能力研究

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(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530001；2.廣西南寧市第五十六中學(xué)，廣西 南寧 530001)

對于生物體而言氧化過程是一個非常重要的生理過程。活性氧(ROS)的不可控制產(chǎn)生和抗氧化保護(hù)機(jī)制的失衡導(dǎo)致許多疾病的發(fā)生并加速人體衰老反應(yīng)。ROS的產(chǎn)生與生物體中抗氧化系統(tǒng)中活性氧的失活之間存在平衡，過量的活性氧需要用抗氧化劑來抗衡。本實驗通過冷浸法得到樹上蝦丙酮提取物，采用ABTS體系和還原能力體系，來評估其抗氧化能力。

1 材料與儀器

實驗用儀器為紫外可見分光光度計(UV1901型，北京普析電子科技有限公司)[8-10]。樹上蝦植物來源于廣西百色，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購于百靈威試劑公司(北京)。

2 方法

2.1 樹上蝦丙酮提取物制備

將樹上蝦曬干磨粉后，將20 g樹上蝦粉末放入圓底燒瓶中，加入200 mL丙酮(95%)浸泡3 d。將溶液倒出后，重新加入新的丙酮(95%)200 mL進(jìn)行冷浸操作，總共加入3次丙酮(95%)，合并提取液。將所得溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑得到樹上蝦丙酮提取物。

2.2 ABTS·+自由基清除能力測定[6-10]

在錐形瓶中加入50 mL濃度為2 mmol/L的2,2'-聯(lián)氨-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺鹽(ABTS)水溶液，和200 mL濃度為70 mmol/L的K2S2O8水溶液，混合均勻，蓋上塞子避光放置12～16 h，再加入磷酸鹽緩沖液至溶液在Abs=734 nm處吸光度為0.70±0.02得到ABTS·+溶液。取一定量不同濃度提取物藥液，加入一定量ABTS·+溶液混勻，在不同時間測其吸光度，并以吸光度變化計算其對ABTS·+自由基的清除率。

2.3 還原能力測定[5]

在錐形瓶中加入0.2 mL樹上蝦丙酮部位提取物溶液，2.5 mL pH值=7.4的PBS溶液以及2.5 mL濃度為1% 的KFe(CN)4溶液，混合均勻后放于50℃水浴20 min，加入2.5 mL濃度為10%的三氯乙酸溶液，離心10 min。取上清液和蒸餾水各2.5 mL，加入0.5 mL 濃度為1%的FeCl3，將溶液混合后在700 nm處測定吸光度。

3 結(jié)果

3.1 樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基的清除能力

3.1.1 不同濃度提取物對ABTS自由基的清除能力

不同濃度樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基的清除能力如圖1所示。 當(dāng)樹上蝦丙酮提取物濃度為0.2 mg/mL時，提取物對ABTS自由基的清除率為33.3%，表現(xiàn)出較好的ABTS自由基清除效果。當(dāng)樹上蝦丙酮提取物濃度增加至0.5 mg/mL時，提取物對ABTS自由基的清除率為60.6%，數(shù)值接近于0.2 mg/mL濃度時數(shù)值的2倍；濃度增加至0.8 mg/mL時，提取物對ABTS自由基的清除率進(jìn)一步增加至73.7%。值得注意的是，在濃度為1.2 mg/mL時，提取物對ABTS自由基的清除率超過了90%。在最高藥液濃度2.0 mg/mL時，提取物對ABTS自由基的清除率達(dá)到了98.3%。

圖1 不同濃度樹上蝦丙酮提取物 對ABTS自由基的清除能力Fig.1 Relationship between ABTS radicals clearance rate and concentration of extract for acetone extract of Pholidota cantonensis Rolfe

3.1.2 不同時間下提取物對ABTS自由基的清除能力

圖2 不同時間樹上蝦丙酮提取物 對ABTS自由基的清除能力Fig.2 Relationship between ABTS radicals clearance rate and time for acetone extract of Pholidota cantonensis Rolfe

本論文進(jìn)一步考察了不同時間樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基的清除率。如圖2所示，在作用時間為1 min時，樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基的清除率為86.1%；作用時間為3 min時，樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基的清除率為93.1%；作用時間為5 min時，樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基的清除率為95.8%；作用時間為10min時，樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基的清除率超過98%。可見，樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基的清除率與時間有關(guān)。

3.1.3 樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基的EC50值

通過不同濃度的樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基的清除率，得出樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基EC50值為0.33 mg/mL。

3.2 樹上蝦丙酮提取物的還原能力

圖3表示樹上蝦丙酮提取物在不同藥液濃度時的還原能力。可見，藥液濃度為0.2 mg/mL時樹上蝦丙酮提取物吸光度為0.22；藥液濃度為0.5 mg/mL時樹上蝦丙酮提取物吸光度為0.39。藥液濃度增加至0.8 mg/mL時樹上蝦丙酮提取物吸光度為0.48。藥液濃度增加至1.2 mg/mL時樹上蝦丙酮提取物吸光度為0.2 mg/mL時吸光度的2.95倍。在最高濃度2.0 mg/mL時樹上蝦丙酮提取物吸光度達(dá)到了0.91，具有很好的還原能力。

圖3 樹上蝦丙酮提取物的還原能力Fig.3 Reducing ability of for acetone extract of Pholidota cantonensis Rolfe

4 結(jié)論

本實驗通過冷浸法得到樹上蝦丙酮提取物，采用ABTS法來評估其抗氧化能力并測定其還原能力。結(jié)果表明，當(dāng)樹上蝦丙酮提取物在最低濃度時的ABTS自由基清除率為33.3%，表現(xiàn)出較好的ABTS自由基清除效果，在最高藥液濃度2.0 mg/mL時，提取物對ABTS自由基的清除率達(dá)到了98.3%。同時，樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基的清除率與時間有關(guān)，在作用時間為1 min時，樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基的清除率為86.1%，作用時間為10min時，樹上蝦丙酮提取物對ABTS自由基的清除率超過98%。樹上蝦丙酮提取物在不同藥液濃度時的還原能力測定結(jié)果表明，樹上蝦丙酮提取物的還原能力與藥液濃度有關(guān)，在最高濃度2.0 mg/mL時樹上蝦丙酮提取物吸光度達(dá)到了0.91，具有很好的還原能力。