兩點法校準生化分析儀的應用

蘭天

（西安市紅會醫院閻良院區檢驗科，陜西 西安 710089）

目前全自動生化分析儀已在各大、中型醫院普遍使用，由于其具有分析儀器穩定，結果比較準確，試劑用量少，分析速度快，工作效率高[1]。自動生化分析技術提高了臨床檢驗質量和速度，減輕檢驗人員的勞動強度，節約樣品和試劑，增加了檢驗項目，提高了檢測精密度，減小了誤差，并有利于臨床檢驗標準化的實現，而且室內、室間質控結果穩定，日益受到廣大用戶的的歡迎[2]。但作為檢驗分析儀器，同樣避免不了誤差的存在，只有誤差足夠的小，檢驗的結果才能穩定，檢驗結果報告數據準確，才能更具有較高的可信度。全自動生化分析儀由于其儀器的穩定性和操作過程中程序的同一性，所產生隨機誤差的可能性就很小。對于系統誤差，卻仍然不能忽視，消除或者減小系統誤差就是使用適當的程序、方法、校準品進行儀器的校準。在日常工作中，按儀器說明和試劑盒的要求，把程序設定好，試劑安放至合適的試劑位，就要用試劑盒配套的校準品進行項目的校準，把這個過程中所用的校準品通常稱之為定標液。把這個程序完成后，該項目的檢驗前工作就算完成了定標。在完成了定標但還不能直接用于對患者標本的分析檢驗測定。衛生部臨床檢驗中心在臨床實驗室（定量測定）室內、質控工作中指出：對于測定標本的儀器一定要進行校準，校準時要選擇合適的（配套的）標準品/校準品，如有可能，校準品應該能溯源到參考方法和/或參考物質；對不同的分析項目要根據其特性確定各自的校準頻率[3-6]。對于校準品，它的定義是：含有已知量的待測物，用以校準測定方法的數值。它與該方法及試劑，儀器是有相關聯的。校準品的作用是為了減少或者消除試劑，儀器分析的整個過程中所產生的恒定的系統誤差。目前來說大多數醫院都是完成了儀器定標后，使用高質量的性質穩定、效期長的定值質控品對儀器進行再次的校準，這個校準品通常使用的是進口的具有性質穩定、質量的可靠性好、保存時間長，最好是人血清基質的，有可靠的溯源性。我們通常把校準品的參考靶值作為近似真值，以此作為校準的標準。我們通常在選用這樣的校準品時，通常選用的靶值是在醫學臨床參考范圍內的所謂正常值范圍內的靶值，這樣可以保證日常檢驗中大多數參考區間內的結果的穩定可靠。通常用這個水平的質控品在儀器上測定一次或者多次求得均值，然后與該質控品的標準靶值進行比較，求得一個比例系數，該比例系數就是該項目的校準系數，將這個校準系數輸入到儀器的校準系數欄內，即完成了儀器該項目的校準工作。

1 方法

我們醫院自2016年新購進了東芝TBA120FR全自動生化分析儀后，起初也是用這種方法進行儀器的校準。調查表明，約15%的實驗室因質控標準品的誤差導致檢驗結果的準確度不合格。所以我們在選擇校準品時，選擇使用了可信度高的英國朗道（RANDOX）質控血清，英國朗道質控血清說明書中指出，廊道質控血清的賦值，每一批質控血清都需要送到參考實驗室，根據國際參考標準進行賦值，若沒有國際參考標準，使用參考方法。朗道也將質控血清送到全世界3,000多家實驗室，然后將結果用獨特的統計分析賦值。對每一批質控血清都提供了不同項目的不同方法學的靶值和靶值范圍。質控范圍是平均值的±2SD。我們用的校準品基本上是英國朗道（RANDOX）質控血清水平-2日常校準儀器，因為質控血清水平-2賦值基本上都在臨床正常參考法內，也就是正常值范圍內的靶值。其實我們在工作中發現，大多數生化檢驗項目有意義的或者有醫學決定水平的的參考值具有更重要的臨床診斷意義。為此我們在既能保證正常范圍內的檢驗結果可靠，也要保證處在參考區間外的臨床異常檢驗常數值的可靠性，解決的辦法就是增加高值水平校準。所以我們在工作中考慮嘗試是否既用水平-2校準儀器，同時也用高值質控品水平-3校準品校準儀器。在實際工作中，用常規方法儀器定標后，然后用校準品水平-2校準了儀器，那么校準品水平-3的結果必然和靶值有誤差，同樣用校準品水平-3校準了儀器，校準品水平-2結果和靶值就有誤差，而且出現這樣的誤差也有顯著性的意義。兩個水平校準分別得出的兩個校準斜率不相同，我們經過反復比較，雖然誤差都在誤差參考區間內，但是總是偏離了近似真值，為此我們查閱相關資料，反復研究討論，認真分析原因，摸索出了一個解決方法，就是用校準品質控血清水平-2，校準品質控血清水平-3同時測定，求得一個校準斜率和一個校準截距，用來修正校準公式。我們把高、低測定值，靶值分別用MCH、MCL、MH、ML表示，修正斜率用XK表示，修正均差用XC表示，樣品測定值用MS表示，校準后樣品修正值用MX表示。就得出如下計算公式：校準斜率XK=(MH-ML)/( MCH-MCL)；均差 XC=MH-XK×MCH=ML-XK×MCL；MX=MS×XK+XC；用XK修正斜率誤差，用XC修正固定誤差。

以生化項目葡萄糖測定為例，我們使用的是中生北控生物科技股份有限公司葡萄糖測定試劑盒（葡萄糖氧化酶法），試劑盒自帶配套（一個濃度）葡萄糖校準品，濃度靶值5.55 mmol/L校準品使用英國朗道質控血清：①人基質定值生化質控血清-水平2貨號：HN1530，批號：1093UN，有效期：2020-01，葡萄糖靶值：6.29 mmol/L（氧化酶法）；②人基質定值生化質控血清-水平3貨號：HE1532，批號：849UE，有效期：2020-01，葡萄糖靶值：15.4 mmol/L（氧化酶法）；用自帶定標液定標后，測得MCH=14.28，MCL=6.12；XK=(MH-ML)/(MCH-MCL)= (15.4-6.29)/(14.2 8-6.12)=1.116；XC=MH-XK×MCH或者XC= ML-XK×MCL；XC=15.4-1.116×14.28=0.54；或者XC=6.29-1.116×6.12=0.54。

舉例：儀器定標后，直接測得患者血糖值為9.52 mmol/L，通過校準后血糖=9.52×1.116+0.54=11.16 mmol/L，血糖11.1 mmol/L是具有醫學決定意義的數值。

我們在用兩個水平質控校準品校準方法引用時，有如下幾種情況需要注意：（1）改變試劑的種類，或者更換試劑批號；（2）儀器或者檢驗系統進行了一次大的預防性維護或者更換了重要部件，這些都可以影響檢驗性能；（3）室內質控反映出異常或者偏移，或者超出了實驗室規定的接收限，采取一般性糾正措施后不能識別和糾正的問題時；（4）距上次校準時間不超過1個月需要再次校準。

2 結果

從2016年下半年以來，我們應用兩個水平定值校準品的朗道質控品對生化分析儀進行校準至今，多年來臨床使用中日常檢驗結果穩定可靠，室內、室間質控良好。檢驗結果穩定可靠，就為臨床提供了更加可信的檢驗報告數據，使臨床診斷對檢驗數據的可信度更進一步提高。取得了滿意的效果，使得檢驗的準確性得到了提高，降低了分析系統的系統誤差。

3 討論

全自動生化分析儀不論如何先進，它作為一個儀器，測試出來的標本結果是隨著標準限的設置不同而變化的。對于一個臨床檢測項目，如果所用方法的測定原理、試劑、儀器、校準品中任何一個不同，都可能得到不同的測定結果。全自動生化分析儀測定系統包括測定原理、試劑、儀器、校準品四要素。如果我們想要得到準確可靠的測定結果，而該結果又需要具有與其他實驗室的可比性，應該自己建立一個標準測定系統。在生化檢驗分析過程中系統誤差永遠都是存在的，只有在實踐中不斷采取適當的方法和糾正措施減少系統誤差給檢驗結果帶來的影響，只可能逐漸降低，但不可能完全消除，所以就要求我們在日常工作中不斷分析原因，不斷探索，不斷實踐，不斷探總結和摸索，改進試驗方法，改進試驗程序，盡可能減少誤差，以提高檢驗結果的準確性，使得檢驗結果盡可能靠近真值，以給臨床診斷提供更有價值的檢驗報告結果。此外，盡量不要使用單試劑，把能用雙試劑的項目改為雙試劑，因為單試劑的穩定性，隨著使用時間會變差，同時血液中高濃度的維生素C也會嚴重干擾單試劑的Trinder反應。在此設想是否可用三種或者多種水平質控品校準儀器的方法校準儀器，希望檢驗工作者共同努力，把檢驗質量不斷提高，服務于臨床醫療。