硝酸咪康唑殼聚糖緩釋凝膠的制備及釋放度研究?

邢樹禮，徐燕平，高培民，孫紹偉，馬 靜，丁召興△

(1.濱州醫學院附屬醫院藥學部，山東濱州 256603；2.山東省濱州市人民醫院消化內科 256610)

硝酸咪康唑是一種廣譜、高效、不良反應小的抗真菌藥，在結構上屬于咪唑類。它對組織漿胞菌、芽生菌屬等多種真菌，尤其是念珠菌所致的陰道感染有良好的療效[1]。殼聚糖是甲殼素脫乙酰產物，是我國產量最大的海洋資源之一，具有無毒、無刺激、可降解、生物相容性好等特點[2-3]。本研究以殼聚糖、聚卡波菲為混合基質制成陰道用緩釋凝膠，其能持續12 h緩慢釋放，達到減少給藥次數的目的，現報道如下。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 UV紫外分光光度計(日本島津)；pHs-2C型數字酸度計(上海偉業儀器廠)；硝酸咪康唑標準品(廣西康華藥業有限公司，批號：20160913)；殼聚糖(濱州市宏遠儀器試劑有限公司，脫乙酰度：85%，批號：160517)；聚卡波菲(BF Goodrich公司)；山崳酸甘油酯(濱州市魯濱試劑公司，批號：160623)；甘油(廣東臺山新寧制藥廠，批號：161211)；苯甲酸鈉(濱州市魯濱試劑公司，批號：160108)；三乙醇胺(沈陽化學試劑廠，批號：160108)；其他試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1處方 硝酸咪康唑2.0 g，殼聚糖0.5 g，聚卡波菲1.0 g，甘油5 mL，山崳酸甘油酯2.0 g，苯甲酸鈉0.3 g，三乙醇胺0.2 g，2%的醋酸溶液15 mL，加注射用水至100 mL。

1.2.2工藝 將2%的乙酸溶液放入燒杯中，并加入處方量的殼聚糖，攪拌直至溶解；聚合物相：將聚卡波菲加適量注射用水浸泡過夜，充分攪拌直至完全溶脹成均勻的類凝膠聚合物，將前述的殼聚糖醋酸溶液緩慢加入，同時高速攪勻；油相：加熱甘油及山崳酸甘油酯使熔化，充分攪拌使其均勻；水相：將處方量的苯甲酸鈉、三乙醇胺及硝酸咪康唑放至剩余的水中，加熱。將油相快速加到熱的水相里，充分攪拌以便得到均勻的乳狀液體。趁熱將聚合物相迅速加至混濁液中攪拌、混勻。攪拌下滴入10 mg/mL氫氧化鈉水溶液，使pH在3.5～5.5。

1.2.3確定波長 取適量的硝酸咪康唑，用甲醇溶液溶解成質量濃度為0.25 mg/mL的溶液。按處方比例另取殼聚糖、聚卡波菲及其他輔料用甲醇溶解，分別將上述兩種溶液在250～300 nm波長范圍內掃描吸收圖譜[4]。

1.2.4制備標準曲線 將硝酸咪康唑標準品放置在烘干器中充分烘干，精密稱取0.25 g放在50 mL的容量瓶內，先倒入20 mL甲醇將硝酸咪康唑標準品溶解，再用甲醇稀釋至刻度，作為貯備液。分別精密量取貯備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0 mL置50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別將這些溶液在波長為272 nm處測定吸收度A(均以甲醇作為空白對照)，以濃度C對吸收度A進行線性回歸，表明在0.05～0.80 mg/mL，濃度C與吸收度A呈現良好的線性關系[5-7]，求得回歸方程為A=1.421 3C+0.046 0，r=0.999 4。

1.2.5殼聚糖緩釋凝膠含量的測定 從制備的殼聚糖緩釋凝膠中取3個批次，從中抽1個批次樣品，用電子天平精密稱取精密稱取殼聚糖緩釋凝膠約3.0 g，放至50 mL的容量瓶內，將其放在水浴中加熱使樣品熔融，倒入適量的甲醇，使其完全溶解，定容至刻度。精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，再用甲醇稀釋至刻度，搖勻。用紫外分光光度計測定容量瓶中樣品的吸收度A，代入1.2.4的回歸方程，即可得出相應的濃度C，然后便可以算出該批次樣品的含量。同上法，測定出另外2批次樣品的含量[8-9]。

1.2.6加樣回收率試驗 分別依照處方中硝酸咪康唑劑量的80%、100%、120%，用分析天平稱取，105 ℃干燥至恒重的硝酸咪康唑，并按緩釋凝膠處方中各組分的比例，精密稱取基質及其他處方材料，用甲醇溶解各組分適量，依“1.2.5”項下殼聚糖緩釋凝膠含量的測定來測定硝酸咪康唑的含量。

1.2.7精密度試驗 按1.2.4方法，配制硝酸咪康唑0.20、0.40、0.60 mg/mL的溶液，分別在日內的不同時間(0、2、4、6、8、10 h)和日間(1、2、3、4 d)檢測吸收度，從而算出日內和日間的精密度[9]。

1.2.8重復性試驗 取1個批次的緩釋凝膠(批號：20160602)6份，每份按1.2.5方法進行測定，以考察緩釋凝膠測定的重復性。

1.2.9穩定性試驗

1.2.9.1離心試驗 取硝酸咪康唑緩釋凝膠約5 g，裝入帶刻度的離心管中，于2 500 r/min下離心30 min，觀察其外觀性狀，凝膠無分層現象。

1.2.9.2高溫高寒試驗 取硝酸咪康唑緩釋凝膠約5 g，在包裝條件下(鋁塑管內涂環氧樹脂)，分別置于55 ℃干燥箱恒溫6 h及-15 ℃冰箱內24 h，凝膠無分層現象。

1.2.10性狀均勻性 緩釋凝膠為淺黃色半透明狀半固體，色澤均勻，質地細膩，觀察不到肉眼可以看到的顆粒，稠度適宜，涂展潤滑性較好。

1.2.11體外釋放度試驗 參考文獻[10]，稱取殼聚糖緩釋凝膠約3.0 g 放在擴散池裝置中，選尼龍膜作為測定膜將緩釋凝膠包裹起來，然后蓋上并使勁擰緊池蓋。把樣品池放到溶出杯中，放凝膠的那面向上，將槳的高度調整好，用模擬陰道液900 mL作為釋放介質，槳的轉速為60 r/min，溫度為(37.0±0.5)℃，在0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12 h分別取溶液5 mL，并及時補充5 mL溶出介質，測定累積釋放度，得到殼聚糖緩釋凝膠的累積釋放度曲線。

2 結 果

2.1測定波長的確定 根據掃描的吸收圖譜的結果，在272 nm處硝酸咪康唑的吸收最大，而在該波長處，處方中的其他組分基本無干擾，所以選擇272 nm作為測定波長，見圖1。

a：硝酸咪康唑;b:其他處方成分

2.2加樣回收率試驗結果 每個試樣測定3次，算出平均數，再算出加樣回收率，見表1。

表1 加樣回收率的結果(n=3)

2.3日內和日間精密度試驗 硝酸咪康唑0.20、0.40、0.60 mg/mL的溶液中，測算日內和日間精密度結果，見表2。

表2 精密度試驗結果

2.4重復性試驗 抽取的1個批 次(批號：20160602)的緩釋凝膠6份，測定所得RSD=0.41%，可見所制得的緩釋凝膠重復性良好。

2.5穩定性試驗 經離心試驗及高溫高寒試驗，觀察緩釋凝膠的外觀性狀，發現緩釋凝膠無分層現象。

2.6硝酸咪康唑殼聚糖陰道緩釋凝膠在模擬陰道液中的釋放 在模擬陰道液中測得殼聚糖陰道緩釋凝膠的釋放曲線，緩釋凝膠1 h釋放35.54%，2 h釋放56.02%，12 h釋放達93.92%，從釋放曲線可以看出，藥物在前2 h快速釋放，然后緩慢釋放，總體上能達到12 h的釋放效果，見圖2。

圖2 硝酸咪康唑的累積釋放度曲線

3 討 論

殼聚糖是由天然多糖甲殼素經過脫乙酰化之后得到的物質，無毒，無刺激性。其生物相容性及黏膜附著性均很好，因此能使藥物在陰道黏膜的滲透性、附著性及吸收量等都有不同程度的增加[11]。本實驗以殼聚糖、聚卡波菲為基質制成的陰道凝膠劑，由于劑型和材料的特點，與栓劑比較，陰道黏膜能與藥物有更充分的接觸，不但增大了接觸面積，還使藥物的滯留時間延長，這既保證了療效，又減少了給藥次數，且無油膩感，使用舒適。

從最佳組合處方的累積釋放度曲線可以得知，殼聚糖緩釋凝膠中硝酸咪康唑的釋放特性與威布爾分布模式有些相近，更與Ritger-Peppas的復合模式(CR=at+bt0.5+c) 類似[12]，即初期類似Higuchi模式，但后期接近勻速釋放，說明硝酸咪康唑在接近緩釋凝膠的表面，其硝酸咪康唑的濃度較大或結合較疏松，就能以較快的速率從凝膠間隙中出來，而后期隨著凝膠的慢慢溶蝕，內部藥物從緩釋凝膠中釋出。

國內外文獻報道用于凝膠的基質有CP934P、CP940P、PCP、CMC-Na、海藻酸鈉等，其中僅有CP934P凝膠用Keshary-Chien滲透池測定體外釋放度，它的制備濃度為1.5%(w)，用7 mL溶出介質進行釋放度試驗，結果凝膠在7 h時的藥物釋放度僅為25%[13]。而本研究緩釋凝膠的基質選用的是聚卡波菲，同時用甘油、山崳酸甘油酯改善凝膠特性，從而控制了硝酸咪康唑的釋放速度。