高危型人乳頭瘤病毒E6、E7mRNA檢測篩檢宮頸癌的臨床評價

徐雅杰

河南省周口市中心醫院 466000

宮頸癌是一種臨床常見婦科惡性腫瘤，發病率僅低于乳腺癌，是婦科惡性腫瘤致死的主要原因，近年來其發病率呈年輕化趨勢，已引起了臨床上的廣泛關注。目前臨床上多采用宮頸液基薄層細胞學檢查(TCT)篩檢宮頸癌，但該方式無法有效區分少數可進展為浸潤癌的病變及多數可自然消退的病變[1]。近年來多項研究發現宮頸癌的發病與高危型人乳頭瘤病毒(HPV)持續感染關系密切，90%以上的宮頸癌患者皆伴有高危型HPV感染，若能盡早發現并及時治療，其治愈率可達90%[2-4]。使用HPV-DNA檢測可有效提高宮頸癌檢出率，但由于多數HPV感染患者均無明顯臨床癥狀，且多可在2年內消退，使得HPV-DNA檢測雖具較高敏感性，但特異性較低，可能會存在一定誤診，加重患者經濟負擔及心理壓力。高危型HPV E6、E7mRNA表達的產物能通過鈍化腫瘤，起到抑制蛋白P53及PRb的作用，從而誘導宿主細胞癌變，因此本研究旨在探究高危型HPV E6、E7mRNA檢測篩檢宮頸癌的臨床應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年3月—2017年3月因宮頸疾病于我院就診的83例患者為觀察對象，患者多為接觸性出血或陰道異常出血，并伴有白帶異常及下腹隱痛癥狀就診，年齡23～65歲，平均年齡39.62歲。納入標準：無妊娠；入組前3d內無性生活，無陰道沖洗及用藥史。排除標準：子宮切除手術史及宮頸手術史患者；嚴重凝血功能障礙及心肺臟器功能不全者。本研究經我院倫理委員會通過，患者均知情并簽署同意書。

1.2 方法

1.2.1 宮頸樣本采集：使用宮頸細胞收集保存系統(凱普生物科技公司)采集患者宮頸細胞標本，每例患者各采集2份，室溫下保存待測。

1.2.2 主要器材及試劑：聚合酶鏈式反應(PCR)擴增儀、HybriMax醫用核酸分子快速雜交儀、HPV-DNA提取試劑盒(凱普生物科技公司)、PCR擴增試劑盒(凱普生物科技公司)、HPV-DNA雜交試劑盒(凱普生物科技公司)、HPV mRNA診斷試劑盒(科蒂亞生物科技公司)。

1.2.3 宮頸TCT及陰道鏡下活檢：對于宮頸TCT常規篩檢異常的患者(非典型鱗狀細胞、低度鱗狀上皮內病變)陰道鏡下取活檢組織送病理學檢查，以病理學檢查結果為金標準。

1.2.4 高危型HPV E6、E7mRNA檢測：嚴格按照試劑盒說明書操作，包括裂解細胞、雜交捕獲mRNA、信號放大、底物發光反應等步驟，QuantiVirusTM冷光儀檢測光子數，Diacarta公司計算機軟件轉換后評價檢測結果。

1.2.5 HPV-DNA分型檢測：嚴格按照試劑盒說明書操作，包括全基因組DNA提取、PCR、導流雜交等步驟，肉眼觀察檢測結果為清晰可見的藍紫色圓點后，根據雜交膜HPV亞型分布圖判斷感染類型(可觀察到一個圓點：HPV亞型單一感染；可觀察到圓點數>1：多重感染)。每張芯片上均有一個內照點 (PCR放映質控點) 及一個生物素對照點(雜交顯色質控點)。

1.3 觀察指標 比較高危型HPV E6、E7mRNA與HPV-DNA分型檢出率、敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值及檢測費用、患者滿意度(采用Zung氏焦慮自評量表評價，總分20～80分，20～50分為無焦慮，51～60分為輕度焦慮，61～70分為中度焦慮，71～80分為重度焦慮，以無焦慮和輕度焦慮為患者滿意，中度及重度焦慮為患者不滿意)。

2 結果

2.1 病理學檢測結果 陰道鏡活檢結果顯示：慢性宮頸炎23例；宮頸上皮內瘤變(CIN)45例，其中CINⅠ10例，CINⅡ14例，CINⅢ21例；宮頸癌15例。

2.2 檢出率比較 高危型HPV E6、E7mRNA檢出率57.83%(48/83)與HPV-DNA分型檢出率62.65%(52/83)比較，差異無統計學意義(P>0.05)；且高危型HPV E6、E7mRNA與HPV-DNA分型檢測慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌的檢出率比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 高危型HPV E6、E7mRNA與HPV-DNA分型檢出率比較

注：與HPV-DNA分型比較，*P>0.05。

2.3 敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值比較 高危型HPV E6、E7mRNA與HPV-DNA分型檢測敏感性、陽性預測值、陰性預測值比較，差異無統計學意義(P>0.05)；高危型HPV E6、E7mRNA檢測特異性顯著高于HPV-DNA分型，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 高危型HPV E6、E7mRNA與HPV-DNA分型檢測敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值比較(%)

注：與HPV-DNA分型比較，*P>0.05，#P<0.05。

2.4 檢測費用及患者滿意度比較 與HPV-DNA分型檢測比較，高危型HPV E6、E7mRNA檢測費用顯著較低，患者滿意度顯著較高，差異有具統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 高危型HPV E6、E7mRNA與HPV-DNA分型檢測費用及患者滿意度比較

注：與HPV-DNA分型比較，*P<0.05。

3 討論

多項研究均發現[5]，以DNA為基礎的HPV檢測在宮頸癌的篩檢中具重要意義。雖然HPV-DNA檢測可以盡早檢出感染患者，但多數為對預測宮頸癌風險無實際指導意義的暫時性感染，其敏感性及陰性預測值雖較高，但陽性預測值較低。隨著近年來醫學技術的不斷發展，臨床上對E6、E7癌蛋白與宮頸癌的致病機制有了更新、更全面、客觀的了解，E6具有抑制宿主細胞P53基因表達，阻斷細胞凋亡的作用，E7具有抑制PRb基因表達，使細胞周期失控的作用。因此，較多學者認為檢測E6、E7mRNA可反映HPV病毒活性及致癌能力，可能具有預測病情進展的作用。

本文對83例患者分別行高危型HPV E6、E7mRNA檢測及HPV-DNA分型檢測，結果顯示兩種檢測方法檢出率比較無顯著差異，且慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌檢出率比較也無顯著差異。兩種檢測方法敏感性、陽性預測值、陰性預測值比較無顯著差異，但高危型HPV E6、E7mRNA檢測特異性顯著高于HPV-DNA分型，與劉佳佳等[6]研究一致。同時本文還發現，高危型HPV E6、E7mRNA檢測費用顯著較低，患者滿意度顯著較高，說明高危型HPV E6、E7mRNA檢測可在宮頸癌病變早期及時篩查具有進展風險的持續性感染，并特異性識別可消退感染，減少因誤診造成的過度檢測及治療加重患者痛苦及精神負擔，能顯著提高患者滿意度，減輕其經濟負擔。

綜上所述，高危型HPV E6、E7mRNA檢測能更直接、精準地篩檢宮頸癌病變，提高其早期診斷有效性，避免過度檢查及治療，減輕患者經濟負擔，具有較高應用價值。