血清TK1在非小細胞肺癌輔助診斷中的臨床意義

韓衛衛 朱 明 狄冬梅

1 蘇州大學附屬常州市腫瘤醫院胸心外科，江蘇省常州市 213000；2 蘇州大學附屬第三醫院胸心外科

肺癌是臨床最常見的惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率也一直居高不下。手術治療是早期肺癌首選的治療方式，且具有良好的效果，其中Ⅰ～Ⅱ期的非小細胞肺癌患者的5年生存率可達69.9%[1-2]。但由于肺癌起病隱匿，早期缺乏典型癥狀和特異臨床表現，大部分患者在發現時已是中晚期，從而喪失了手術根治的機會，治療起來棘手且效果差[3]。因此，肺癌的早診早治顯得尤為重要，細胞質胸苷激酶作為一種新型的細胞增殖相關性的腫瘤標志物，在臨床得到了廣泛的應用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年1月—2014年12月在蘇州大學附屬常州腫瘤醫院就診的非小細胞肺癌(NSCLC)患者共計106例作為NSCLC組，其中男69例，女37例，患者中位年齡63(43～78)歲。所有患者均行支氣管鏡活檢、穿刺活檢或手術切除以獲得病理診斷，其中腺癌64例，鱗癌36例，腺鱗癌6例。參照美國癌癥聯合會(AJCC) 2017 年第8版NSCLC TNM分期，分為Ⅰ期16例，Ⅱ期30例，Ⅲ期54例，Ⅳ期6例。收集同期36位肺部良性病變(肺炎、肺結核、炎性假瘤、血管瘤)患者血清作為良性肺疾病組，其中男22例，女14例，中位年齡58(36～75)歲。同時選取本院50例健康體檢者(無心、肝、肺、腎等重要臟器疾患，無腫瘤家族史)的樣本作為健康對照組。上述樣本均經醫學倫理委員會批準后收集。

1.2 標本采集 健康對照組、良性肺疾病組以及NSCLC組于治療前采集樣本用于相關腫瘤標志物的檢測。于晨起空腹采集靜脈血5ml，3h內以3 800rpm/min離心8～10min分離血清，分裝于2個Eppendorf管中(1管用于檢測、另1管用于復檢)，-20℃冰箱保存，備用。

1.3 血清TK1檢測方法及陽性判斷標準 采用免疫印跡增強化學發光法(ECL)進行血清TK1檢測，TK1檢測試劑盒和CIS-1型化學發光數字成像分析儀由深圳市華瑞同康生物技術有限公司提供；其余常規腫瘤標志物采用2010型RocheElesys自動電化學發光免疫法進行檢測，試劑盒均由Roche公司提供。全過程由專人嚴格按照試劑盒測定說明書進行操作。各腫瘤標志物的陽性判斷標準分別為：TK1>2.0pM，CEA>5.0ng/ml， NSE>17.0ng/ml，CYFRA21-1>3.3ng/ml，SCC-Ag>2.5ng/ml。

2 結果

2.1 NSCLC組與良性肺疾病組、健康對照組TK1水平比較 106例NSCLC患者中有48例(45.28%)血清TK1高于參考值(2.0pM)，平均濃度為(3.074±0.236)pM，顯著高于良性肺疾病組和健康對照組(P<0.001)；而良性肺疾病組與健康對照組相比，差異無統計學意義(P=0.078)。見表1。

表1 TK1在NSCLC組、良性肺疾病組與健康對照組之間的水平比較

注：a為NSCLC組與健康對照組比較，b為良性肺疾病組與NSCLC組比較，c為良性肺疾病組與健康對照組比較。

2.2 肺癌患者TK1水平與臨床病理參數的關系

TK1水平與患者的年齡、性別、是否吸煙以及淋巴結轉移狀態之間無顯著相關性(P>0.05)；而在腫瘤病理類型、分化程度、 TNM 分期和遠處轉移這些分組中，TK1 水平的差異具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 TK1水平與肺癌臨床病理參數之間的相互關系

注：*P<0.05差異具有統計學意義。

2.3 肺癌血清腫瘤標志物單項與聯合檢測的比較 由對肺癌患者各項血清腫瘤標志物單項檢測的結果來看，TK1的敏感性和特異性都不是最高的，但是當四項聯合(除TK1)檢測時，敏感性可提高到66.3%；進一步聯合TK1后，肺癌的診斷敏感性顯著提高到了80.2%。盡管五項聯合后的診斷特異性有所下降，但是從總體看，TK1聯合CEA、NSE、CYFRA21-1和SCC-Ag可使NSCLC診斷的準確性有所提高(78.8%)。見表3。

表3 肺癌血清腫瘤標志物單一與聯合檢測的敏感性、特異性、準確性比較

3 討論

肺癌是目前中國乃至全球范圍內最常見的惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率均居首位[4]，手術依然是治療NSCLC最有效的方法之一，但由于NSCLC起病隱匿，大部分患者在發現時已是中晚期，從而喪失了手術根治的機會。盡管隨著新型化療藥物、免疫治療及分子靶向治療等綜合治療模式的出現，肺癌的治療手段不斷增多，然而肺癌患者5年生存率仍僅有15%左右，總體療效仍不理想[5-6]。因此，肺癌的早期診斷和正確的預后評估，對肺癌個體化治療方案的制定、肺癌療效和整體生存率的提高具有重要意義。

近年來，血清學腫瘤標志物(TM)作為一種非侵入性診斷腫瘤的手段，相比影像學和病理學檢查，具有操作簡便、成本低、創傷小的優勢，目前被廣泛應用于腫瘤的早期篩查、診斷、預測療效及患者預后隨訪[7]。TK1是一種新型的細胞增殖特異性標志物，它是細胞周期合成期(S期)的關鍵酶之一，參與DNA合成的嘧啶補救途徑。在正常細胞中，TK1在細胞分裂前已被降解，所以正常人血清中的TK1濃度極低或幾乎檢測不到。然而在腫瘤患者體內，由于惡性腫瘤細胞的異常增殖，腫瘤細胞中DNA合成也隨之劇增，大量TK1被釋放入血，研究表明腫瘤患者血清中的TK1水平含量可達正常人的2～100倍[8]。

本研究檢測發現NSCLC組患者TK1水平明顯高于良性肺疾病組及健康對照組(P<0.05)，這表明TK1升高與非小細胞肺癌具有一定的相關性，提示TK1可作為肺癌篩查的一個重要指標。而良性肺疾病組TK1水平雖然高于健康對照組，但差異無統計學意義(P>0.05)，部分良性肺疾病患者TK1水平升高可能與增生性疾病相關[9]。TK1水平與患者的年齡、性別、是否吸煙以及淋巴結轉移狀態之間無顯著相關性；而與腫瘤病理類型、分化程度、TNM分期、遠處轉移情況顯著相關(P<0.05)，在肺腺癌、腫瘤低分化、 TNM 分期較晚、存在遠處轉移的患者中，TK1水平明顯升高。這些結果與現有的研究基本一致，然而在腫瘤病理類型、淋巴結轉移狀態、TNM分期等因素上還存在一定的爭議。比如，Li等[10]的研究顯示，TK1水平與NSCLC的分期、淋巴結轉移狀態和腫瘤大小密切相關。但是Brockenbrough等[11]研究了110名NSCLC患者，發現TK1濃度與腫瘤細胞增殖及血管增生程度呈正相關，而與腫塊大小無關。 Li等[12]通過研究250名NSCLC患者的TK1，發現NSCLC患者的TK1水平遠高于健康人群，出現遠處轉移的患者TK1明顯高于未轉移者，而在無遠處轉移的患者中，臨床Ⅲ期TK1水平明顯高于Ⅰ期、Ⅱ期，但與病理類型無關。不同研究中存在差異的原因可能是由于樣本量的差異所導致的誤差，也有可能是處理血清樣本的方法不同或使用的檢測抗體不同，這些都有可能會影響分析結果。雖然TK1的表達情況與NSCLC臨床病理特征的關系還有待進一步探討，但總體來看，TK1的表達水平與NSCLC的惡性程度呈正相關。

TK1作為一種新的腫瘤標志物，因其反映的是體內異常增殖細胞的存在，故在多種腫瘤的臨床診治中，起到越來越重要的作用。劉京生等[13]對TK1在中國人群中對多種腫瘤的診斷性meta分析結果顯示，血清TK1對正常人群的特異性較高，對肺癌、乳腺癌、胃癌、結腸癌、食管癌、婦科惡性腫瘤等的診斷僅有中度敏感性，但在實際臨床應用中，TK1結合傳統腫瘤標記物聯合檢測可顯著提高綜合診斷的敏感性與準確性[14-15]。在本次研究中，由對肺癌患者各項血清腫瘤標志物單項檢測的結果來看，TK1的敏感性和特異性都不是最高的，但是當四項聯合(除TK1)檢測時，敏感性可提高到66.3%；進一步聯合TK1后，肺癌的診斷敏感性顯著提高到了80.2%。盡管五項聯合后的診斷特異性有所下降，但是從總體看，TK1聯合CEA、NSE、CYFRA21-1和SCC-Ag可使NSCLC診斷的準確性有所提高(78.8%)。

綜上所述，TK1水平與NSCLC的惡性程度密切相關，但單獨檢測 TK1 無法作為主要的肺癌篩查手段，而將TK1與傳統腫瘤標志物進行聯合檢測，則可以明顯提高NSCLC篩查的敏感性及準確性，具有一定的輔助診斷作用。