血液中乙醇含量測定-異丁醇內標標準曲線法

薛烽

摘 要：目的：建立用異丁醇作為內標的標準曲線定量法來測定血液中的乙醇含量，并與方法GA/T 1073-2013進行比較。方法：用頂空進樣器-氣相色譜聯用儀，采用內標工作曲線法的定量方式分析血液中乙醇含量[1-2]。結果：用本方法測得的乙醇加標回收率為97.8～104.5%，相對標準偏差在0.5%以內，一元性回歸方程式的相關系數r>0.999。結論：用該法分析血液中的乙醇含量準確度和精密度均能滿足要求，內標物的適用性更廣泛。

關鍵詞：乙醇;血液;異丁醇;內標-標準曲線;氣相色譜

中圖分類號：O657 文獻標識碼：A 文章編號：1671-2064（2019）23-0210-02

血液中的乙醇含量測定目前現有的方法是GA/T 1073- 2013和GA/T 842-2019，采用的內標物均為叔丁醇，但是筆者在實際運用中發現：冬天溫度低的時候，叔丁醇是固體狀態，配制內標液的時候需要加熱等候很長時間才能將固體狀的叔丁醇完全轉化成液體狀，給稱量或移取帶來不便。經過查證發現，叔丁醇的熔點為25.7℃，這是導致叔丁醇在冬天氣溫較低時會處于固體狀態或固液混合狀態，因此筆者的想法時尋找熔點較低的化合物來替代作為內標，根據GA/T 1073-2013，其不但可以測試乙醇含量，還用于測試甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇，因此內標物的選擇需要避開以上化合物，經過尋找，筆者找到了異丁醇，其熔點為-108℃，溶解性：溶于約20倍的水，與乙醇和乙醚混溶，因此筆者認為異丁醇比較適合作為內標物。

1 材料與方法

1.1 儀器

Aglient氣相色譜7890B、Aglient頂空進樣器7697A、Eppendorf移液器（20-200μL和100-1000μL）、頂空進樣瓶（10mL，配有鋁帽及密封墊）。

1.2 試劑

乙醇系列標準品（Cerilliant進口標準品）、異丁醇（國藥集團沃凱>99.5%）、叔丁醇（阿拉丁>99.5%）、蒸餾水（屈臣氏）、血液樣品。

1.3 試劑配制

1.3.1 內標物溶液

用移液器移取623.5μL的異丁醇（密度0.806g/mL，純度99.5%）于一預先裝有適量蒸餾水的100mL容量瓶中，再用蒸餾水定容至刻度，搖勻，得濃度為5mg/mL的正丁醇內標儲備液（A溶液），再將A溶液用蒸餾水稀釋成4mg/100mL（B溶液）。

1.3.2 乙醇標準品

市售，濃度為10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL。

1.4 實驗條件

1.4.1 頂空進樣器條件（如表1）

1.4.2 氣相色譜條件（如表2）

1.5 實驗方法

1.5.1 標準曲線制作

用移液器分別移取500μL的異丁醇內標物溶液（B溶液）于7個10mL頂空瓶中，再向這7個頂空瓶中分別移取100μL的10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL乙醇標準品，用硅膠墊和鋁帽密封，混勻。置于頂空進樣器中，按1.4條件進樣分析。以待測組分（乙醇）和內標物（異丁醇）的峰面積之比作為縱坐標，以待測組分（乙醇）和內標物（異丁醇）的含量之比作為橫坐標，制作內標工作曲線。

1.5.2 樣品測定

用移液器分別移取100μL的全血樣品和500μL的異丁醇內標物溶液（B溶液）于一個10mL頂空瓶中，用硅膠墊和鋁帽密封，混勻，置于頂空進樣器中，按1.4條件進樣分析。據待測樣品中乙醇和異丁醇的峰面積之比，即可在工作曲線上查出待測樣品中乙醇的濃度，進而得出待測樣品中乙醇的含量。

2 結果與討論

2.1 方法的可行性

從圖1可知，乙醇的出峰時間為1.708min，異丁醇的出峰時間為4.496min，實驗條件能達到分離效果，實驗方法可行。

2.2 內標工作曲線的建立

乙醇/異丁醇峰面積之比-乙醇/異丁醇含量之比對照表見表3;內標工作曲線見圖2。

2.3 加標回收

向空白血液中加入適量乙醇，分別制得乙醇含量為20mg/100mL和80mg/100mL的血液樣品，用此方法測其乙醇含量，結果如表4。

2.4 精密度

隨機抽取一血液樣品，按此方法重復分析6次，得出6個乙醇含量結果，計算相對標準偏差如表5。

3 結語

應用異丁醇作為內標測定血液中乙醇含量，加標回收率為97.8%，相對標準偏差為0.35%，滿足測試要求，異丁醇代替叔丁醇作為內標的適用性更廣泛，特別是當室溫比較低時，異丁醇不會出現叔丁醇凍結的狀態，方便了檢測人員的操作。

參考文獻

[1] 代娟，陳曼，賴翼，昝旺.直接進樣毛細管氣相色譜法測定血液中乙醇含量的研究[J].中國衛生檢驗雜志，2010，20（2）：283-284.

[2] 陳君，彭峰.氣相色譜法直接測定血液中乙醇的含量[J].檢驗醫學與臨床，2010，7（5）：418-419.