豬流行腹瀉病毒及其疫苗生產(chǎn)工藝

王潔清

（成都天邦生物制品有限公司，成都 610100）

豬流行性腹瀉病毒（PEDV）可引起的豬的接觸性腸道傳染病。豬流行性腹瀉于1971 年英國(guó)獸醫(yī)科技人員首先報(bào)道，其特征為初生仔豬嘔吐、腹瀉、脫水，疫病爆發(fā)中初生仔豬死亡率達(dá)90%。

豬傳染性胃腸炎由豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）引起的易發(fā)、多發(fā)高度接觸性的急性腸道傳染病，臨床變化和癥狀與豬流行性腹瀉極為相似。豬傳染性胃腸炎主要發(fā)生在氣溫低的冬季和春季，成年豬和仔豬都會(huì)傳染、發(fā)病，尤以仔豬傳染、發(fā)病嚴(yán)重，＜5日齡的仔豬染病，死亡率95%～100%。本文介紹了國(guó)內(nèi)豬流行性腹瀉相關(guān)疫苗上市情況及國(guó)內(nèi)生產(chǎn)工藝研究進(jìn)展。

1 豬流行性腹瀉免疫機(jī)制的推廣

1995 年，國(guó)內(nèi)外開(kāi)始用豬流行性腹瀉病毒和豬傳染性胃腸炎病毒二聯(lián)疫苗，通過(guò)免疫產(chǎn)前母豬，使其乳汁中含有豐富的豬流行性腹瀉IgA 和IgG 抗體，仔豬攝入后能引起腸道黏膜保護(hù)機(jī)制，以達(dá)到保護(hù)出生仔豬的目的。2009 年10月～2010年2月，我國(guó)各地發(fā)生腹瀉的比例最為嚴(yán)重，引起的傳播性、傳染性、死亡性強(qiáng)，有的規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)一旦發(fā)生流行性腹瀉則在6 周內(nèi)仔豬高達(dá)100%死亡，后續(xù)死亡率逐漸降低。行業(yè)專(zhuān)家初步估計(jì)，近6 年由豬流行性腹瀉和傳染性胃腸炎病毒造成全國(guó)仔豬死亡估計(jì)有上千萬(wàn)頭，直接損失已高達(dá)上億元。隨著病毒變異及豬場(chǎng)養(yǎng)殖規(guī)模增大，該病的危害日益突顯。因此，提高免疫效果必須了解抗體產(chǎn)生保護(hù)作用的機(jī)制。

2 同類(lèi)疫苗的種類(lèi)

2.1 滅活苗

早期研究主要集中在豬流行性腹瀉病毒滅活疫苗的研制。目前上市的豬流行性腹瀉滅活疫苗有：豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒（G5 型）三聯(lián)活疫苗（弱毒華毒株+弱毒CV777 株+NX 株），豬流行性腹瀉、傳染性胃腸炎滅活疫苗經(jīng)典毒株，豬流行性腹瀉、傳染性胃腸炎滅活疫苗（WH-1 株+AJ1102 株）。處于新獸藥臨床階段的同類(lèi)產(chǎn)品有豬流行性腹瀉滅活疫苗（XJ-DB2 株）、豬流行性腹瀉滅活疫苗（KB-4clone13 株）、豬流行性腹瀉滅活疫苗（CHYJ株）。

2.2 弱毒苗

由于PED 在亞洲造成的經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)商品化弱毒疫苗取得了優(yōu)于傳統(tǒng)滅活疫苗的保護(hù)效果，因此，國(guó)內(nèi)外各廠家陸續(xù)推出豬流行性腹瀉減毒活疫苗產(chǎn)品。目前上市的豬流行性腹瀉活疫苗有豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（SCJY 株+SCSZ 株），豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（WH-1R 株+SAJ1102-R 株），豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（SCJY-1 株+SCSZ-1 株）、豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（HB08 株+ZH08 株），豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（WH-1株+AJ1102株），豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（SD/L 株+LW/L 株）。處于新獸藥臨床階段的相關(guān)產(chǎn)品：豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（CT130株+HX115株）

3 豬流行性腹瀉病毒疫苗生產(chǎn)工藝

豬流行性腹瀉病毒滅活疫苗上市之初，全部是轉(zhuǎn)瓶工藝生產(chǎn)的產(chǎn)品，其廣泛的應(yīng)用為我國(guó)減少豬流行性腹瀉發(fā)病做出了巨大的貢獻(xiàn)。但是隨著科技的發(fā)展，越來(lái)越多的病毒培養(yǎng)技術(shù)被廣泛應(yīng)用，轉(zhuǎn)瓶生產(chǎn)工藝的占地面積大、污染風(fēng)險(xiǎn)高、半成品抗原效價(jià)低的缺點(diǎn)日益突現(xiàn)。

在細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)中最先開(kāi)發(fā)的是微載體培養(yǎng)技術(shù)，經(jīng)過(guò)60 余年的發(fā)展，該技術(shù)日趨完善和成熟，廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)疫苗、基因工程產(chǎn)品等。其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)，且容易放大。從2010 年以來(lái)國(guó)內(nèi)部分廠家開(kāi)始采用此方法生產(chǎn)豬流行性腹瀉病毒。近3 年來(lái)，豬流行性腹瀉的細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)技術(shù)日趨成熟，相比微載體懸浮培養(yǎng)技術(shù)，其優(yōu)點(diǎn)是下游處理更加簡(jiǎn)便、生產(chǎn)成本降低、單位體積內(nèi)可達(dá)到的細(xì)胞密度是微載體懸浮培養(yǎng)方法的10 倍。無(wú)論是微載懸浮培養(yǎng)還是全懸浮培養(yǎng)，均需在生長(zhǎng)液中添加約7%的血清。我國(guó)新生牛血清價(jià)格的不斷上漲、生產(chǎn)成本的增加、行業(yè)競(jìng)爭(zhēng)的日益激烈，迫使再次對(duì)其生產(chǎn)工藝進(jìn)行升級(jí)。目前，較為流行的是低血清全懸浮培養(yǎng)工藝。據(jù)報(bào)道，有的生產(chǎn)企業(yè)在生物反應(yīng)器血清培養(yǎng)條件下，已成功獲得108.5TCID50·mL-1的病毒液。未來(lái)，低血清懸浮培養(yǎng)工藝、下游工藝的純化技術(shù)、豬流行性腹瀉基因工程疫苗勢(shì)必成為各大腹瀉疫苗生產(chǎn)廠家的研究方向，其適應(yīng)性低血清培養(yǎng)的細(xì)胞技術(shù)、豬流行性腹瀉基因工程蛋白的免疫效果是亟待突破的重點(diǎn)技術(shù)瓶頸。