一次藥敏試驗及其應用

徐玉斌 （甘肅省華池縣動物疫病預防控制中心 745600）

隨著新型致病菌的不斷出現，抗菌藥對細菌性傳染病的控制起到了非常重要的作用，但由于養殖過程中不科學、盲目的濫用抗菌藥，很多致病性細菌產生了耐藥性，使得抗菌藥對細菌性疾病的控制效果越來越差，不但造成藥物浪費，而且還延誤病情，給養殖戶造成了很大的經濟損失。并且各種致病菌對不同的抗菌藥物的敏感性不同，同一細菌的不同菌株對不同抗菌藥物的敏感性也有差異。因此，通過藥敏試驗，掌握致病菌對藥物的敏感性，指導臨床用藥，提高療效。

1 流行病學調查

某養殖戶，養羊95只，發病羊30只，病死2只。臨床癥狀有體溫升高41℃，食欲廢絕，咳嗽，消瘦，流濃鼻。剖解肺間質增厚，有肉樣變化，伴隨出血，肝臟和膽囊腫大。曾經用青霉素、板藍根注射液、磺胺間甲氧嘧啶鈉治療。治療無效后送檢病死羊肺組織、肝組織進行藥敏測定。

2 試驗步驟

2.1 細菌培養

2.1.1 材料用具 培養基(可購買成品)、培養皿、電子天平、錐形瓶、電磁爐、石棉網、玻璃棒、pH試紙、氯化鈉、氫氧化鈉、瓶口塞、酒精燈、接種環、酒精棉球、記號筆、吸水紙、恒溫箱、高壓鍋。

2.1.2 培養基的制備 按照各類微生物生長的需要將多種營養物質進行人工合成：（1）稱取蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化鈉5g溶解于1000ml的超純水中。（2）用試劑氯化氫(酸)和氫氧化鈉(堿)校正酸堿度，使其達到pH值7.2～7.4。加入瓊脂15g，在電磁爐上墊石棉網，用玻璃棒攪拌加熱直至溶解。（3）瓶口塞棉塞，包裝后置高壓鍋內，同時也將接種平皿用報紙包好置于其內，121℃高壓滅菌30min。（4）經高壓滅菌后趁熱取出，溫度降到56度左右，在生物安全柜里將培養基傾入滅菌的培養皿，每一空皿傾入培養基20ml，放入4℃冰箱中備用。

2.1.3 病料處理 在超凈工作臺上取出采集的肺組織、肝組織，用滅菌手術刀剪剪去手指大小的病變邊緣組織，然后用吸水紙吸干組織水分，在酒精燈火焰上滅菌固定，最后剪開組織進行接種培養。

2.1.4 細菌接種 （1）用洗手液將雙手洗凈，擦干，再用75%酒精棉球檫試雙手。當手上酒精揮發完畢后，點燃酒精燈。（2）對接種環火焰灼燒滅菌，冷卻后分別蘸取接種物，開始在培養皿劃線。左 手 斜 持 平皿(45°角)，用拇指打開皿蓋，使其與皿底間分開成2～3cm寬的縫隙，靠近火焰周圍，右手握持接種環伸入平皿內，在平皿上端1/6范圍來回劃線，密集涂布。然后用腕力在原劃線處作連續平行劃線，劃線時使接種環與平板成30°～40°角，劃線間距適當，不能重疊。（3）接種完畢后，將接種環火焰滅菌后放回，用記號筆在皿底玻璃上注明組織名稱，接種時間等，將培養皿倒置，送進溫箱。（4）經37℃ 18～24h孵育后取出，觀察瓊脂平板表面細菌生長情況。

2.2 藥敏試驗

將含有定量抗菌藥物的濾紙片貼在已接種了測試菌的瓊脂表面上，紙片中的藥物在瓊脂中擴散，隨著擴散距離的增加，抗菌藥物的濃度呈對數減少，從而在紙片的周圍形成濃度梯度。同時，紙片周圍抑菌濃度范圍內的菌株不能生長，可以使抑菌范圍外的菌株生長，從而在紙片的周圍形成透明的抑菌圈，不同的抑菌藥物的抑菌圈直徑因受藥物在瓊脂中擴散速度的影響而可能不同，抑菌圈的大小可以反映測試菌對藥物的敏感程度。

2.2.1 材料準備 藥敏試紙(購買)、接種環、酒精燈、鑷子、恒溫箱、毫米尺。

2.2.2 操作步驟 （1）在“超凈臺”中，用經火焰滅菌的接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點涂菌，以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布于平皿。（2）將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，選取慶大霉素、青霉素、鏈霉素、氨芐西林、林可霉素、復方新諾明、卡那霉素、頭孢曲松、呋喃唑酮、環丙沙星藥敏片貼到平皿培養基表面。用鑷子輕按幾下藥敏片，使藥敏片與培養基緊密相貼。先在平皿中央貼一片，然后外周等距離貼(外周一般可貼7片)。（3）將平皿培養基置于37℃溫箱中培養24h后，觀察效果。

2.2.3 結果觀察與判斷 過夜培養后形成一個抑菌圈，用毫米尺測量抑菌圈直徑，慶大霉素11mm、青霉素4mm、鏈霉素4mm、氨芐西林6mm、林可霉素1mm、復方新諾明12mm、卡那霉素12mm、頭孢曲松9mm、呋喃唑酮5mm、環丙沙星12mm。抑菌圈越大，說明該菌對此藥敏感性越大，反之越小，在15mm以上為高敏，10～15mm為中敏，小于10mm為低敏，無抑菌圈為不敏。

3 藥敏試驗的應用

藥物敏感實驗后，選擇高敏藥物進行治療，推薦藥物有復方新諾明、卡那霉素、環丙沙星、慶大霉素。選用復方新諾明進行臨床治療，0.08g/kg給藥，首次加倍，2次/d，連用3d。經過治療病情得到控制，3d治愈力87%，根據綜合治愈力來看復方新諾明療效是明顯的，是臨床的理想藥物。同時在選擇高敏藥物時應考慮藥物的吸收途徑，因為藥敏試驗是藥液直接和細菌接觸，而在給畜禽用藥的時候，必須通過機體的吸收才能使藥物達到一定的效果，所以用藥時，要考慮給藥方法，這樣才會達到好的治療效果。