超高效液相-串聯(lián)質譜法同時測定動物尿液中11種違禁獸藥殘留分析方法研究

張振宇 李 明

（濟源市畜產品質量監(jiān)測檢驗中心，河南濟源 459000）

0 引言

獸藥廣泛應用的于畜牧養(yǎng)殖業(yè)，使用過程中濫用、誤用及不遵守休藥期規(guī)定，導致產生藥物殘留，這些藥物通過食物鏈在人體內產生耐藥性，還可致基因突變、致畸、致癌。生豬、牛、羊體內獸藥殘留監(jiān)控通過尿液檢測較為便捷，易操作，但我國動物尿液中獸藥多殘留檢測標準嚴重缺乏，且存在通量低的不足，難以滿足殘留快速檢測的要求。

檢測獸藥殘留的方法較多，主要有液相色譜法、氣相色譜質譜法、液相色譜-串聯(lián)質譜法、酶聯(lián)免疫法等。開展了動物尿液獸藥多殘留檢測技術的研究，相比單一檢測方法具有更高的效率、更簡單的前處理過程。

1 材料與方法

1.1 儀器

UPLC Xevo TQ MS超高效液相色譜-質譜聯(lián)用儀（Waters公司）；高速冷凍離心機（香港力康公司）；TTL-DCII型氮吹儀（北京同泰聯(lián)科技公司）。

1.2 試劑與材料

乙腈、甲醇、甲酸為色譜純；克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、氯丙那林、特布他林、苯乙醇胺A、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、金剛烷胺、金剛乙胺標準品全部購自于德國Dr.Ehrenstorfer公司；同位素內標為：沙丁胺醇-D3、萊克多巴胺-D3、克侖特羅-D9、氯霉素-D5、甲砜霉素-D3、氟苯尼考-D3、金剛烷胺-D15；Oasis MCX 固相萃取柱（Waters公司，60 mg/3mL）。

1.3 色譜條件

色譜柱：CORTECS UPLC C18（1.6 μm，2.1 mm X 100 mm）；流動相A為乙腈；流動相B為0.2%甲酸水；流速為0.4 ml/min；柱溫為40 ℃；進樣量為5μl，0～1min，5～10%A；1～3min，10～80%A；3～4min，80%A；4～5min，80～5%A。

1.4 質譜條件

電離方式：除酰胺醇類采用電噴霧負離子模式，其他均為電噴霧正離子模式；多反應監(jiān)測模式（MRM）采集；毛細管電壓2.7kV離子源溫度為150 ℃；脫溶劑氣溫度為500 ℃；脫溶劑氣流量為1000 L/h。

1.5 樣品處理

測試取適量尿液于離心管，10000r/min離心10min，量取試樣2ml于10ml離心管，添加混合同位素內標，加入甲酸100μl，混合均勻；MCX小柱依次用甲醇、水各3ml活化，試樣過柱，用0.2%甲酸水溶液、甲醇各3ml淋洗，減壓抽干，用5%氨水甲醇溶液3mL洗脫，洗脫液在50℃氮氣吹干，殘余物用1.0ml初始流動相溶解，渦旋混勻，過膜，供超高效液相色譜-串聯(lián)質譜儀測定。

2 結果與分析

2.1 色譜柱及流動相的選擇

本方法選取了CORTECS UPLC C18 柱、BEH C18柱、HSS T3柱進行分離實驗。本研究選擇了3大類11種獸藥進行檢測，在根據(jù)各色譜柱的特點分別對流動相進行了優(yōu)化實驗。經實驗，上述三種化合物在CORTECS UPLC C18的分離優(yōu)于HSS T3 色譜柱、BEH C18色譜柱，本實驗采用該色譜柱進行測定。

2.2 方法學驗證

2.2.1 基質標準曲線與檢出限

為降低基質效應影響，采用基質標準進行定量，采用尿液空白基質溶液配制質量濃度，為0.5，1，5，10，20，50 ng/mL標準溶液，以標樣峰面積/內標峰面積比值與質量濃度做標準曲線，結果表明：在此質量濃度范圍內所有組分線性良好，相關系數(shù)r均在0.991～0.999。以3倍信噪比計算得到的檢出限在0.1～10μg/kg范圍內，可滿足動物尿液中相應獸藥殘留測定的要求。

2.2.2 回收率、精密度

根據(jù)實際檢出能力，制備了1.0，5.0，10.0 μg/kg三個質量分數(shù)的陽性尿液樣品，每個水平5 平行實驗，三個水平樣品的回收率在75.1～106.5%之間，RSD小于12.5%。方法的準確性和重復性良好。

3 結論

本文建立了采用Oasis MCX固相萃取柱凈化超高效液相色譜-串聯(lián)質譜法同時測定動物尿液中β-激動劑類、酰胺醇類、抗病毒類11種違禁藥物殘留含量的方法，該法與現(xiàn)行國家標準、行業(yè)標準相比在保證準確性好、靈敏度高的同時，前處理方法更簡單快速，可用大批量樣品檢測。