培養基制作應注意的幾個事項

吐爾地·艾買爾

（新疆維吾爾自治區動物衛生監督所，新疆烏魯木齊 530011）

1 把好制作培養基原、輔料質量關

制作培養基的基礎就是肉肝胃酶消化湯（浸出液），因而牛肉、牛、羊、肝、胃等基礎原料要選擇新鮮、無異嗅、無病變、有彈性、浸出液透明清朗，能提供豐富的營養成分。制備肉浸汁，除選好的材料外，浸漬方法也很重要，浸泡目的是使肉組織的水溶性營養物質充分的溶解在水中。經做過的冷浸法和熱浸法煮肉湯的對比實驗表明，冷浸法的效果要比熱浸法好，現多采用冷浸法。由于菌種培養基要求比較高。因此配制時力求使用新鮮原材料，現配現用，以保證質量。不馬上使用的肉湯等要先流通一小時后送冷庫保存備用。對于輔助材料，化學試劑等，都要先經廠化驗室檢驗合格后方可使用。

2 制備血斜培養基應注意的幾點

2.1 做好消毒準備工作

無菌間要徹底熏蒸消毒，采血器皿、分裝物品均要先高壓消毒，以防污染。無菌操作，嚴把質量關。

2.2 普通瓊脂在未加血前的制作是很關鍵的

首先pH值要適宜，一般控制在8.0左右即可。另外加瓊脂時也是有要求的。我們做過加粉狀瓊脂和條狀瓊脂的對比實驗，結果加粉狀瓊脂的培養基加血后不溶血，呈片狀，不能用。而加條狀瓊脂的加血后溶血，效果較好。因而制作鮮血瓊脂培養基時，都采用條狀瓊脂。

2.3 普通瓊脂加血前要徹底消毒

待溫度降至48～50℃時，加入采好的羊血，這樣既不至于溫度太高破壞血成分，也不至于溫度太低以至凝固，不能分裝。所以控制好溫度比較重要。

3 注意控制好培養基的最終pH

（1）細菌在培養基中分裂繁殖除溫度、空氣、營養條件外，對pH的反應也很敏感。酸堿度不適宜即便營養最豐富的培養基，細菌也不能很好地生長繁殖，或根本不發育。因而制備培養基必須正確測定pH。一般測定法有：a.試紙測定法，此法簡單方便，但有誤差。b.比色管測定法，現普遍采用此法。

（2）pH測定最重要的是防止反復加酸加堿，最好一次加妥。因為反復加酸加堿會增加培養基中氯化鈉含量，鹽含量太高會使滲透壓失去平衡而造成細菌的死亡，而且反復加酸加堿易使培養基發生渾濁和沉淀。為避此現象發生，采取加堿量計算的方法防止盲目加堿?？尚≡?000ml加堿量，從而推算全部加堿量。另外還應注意以下幾點：

①標準管必須準確，定期用電比校對。

②被測溶液和培養基的溫度不能太高或太低，因為指示劑在培養基內的反應與溫度有關。為真實反應培養基的pH值，測時溫度應在20～25℃左右近于體溫。

③比色管要顏色、厚薄、粗細必須一致。

④加指示劑的吸管和滴管應避免與培養基接觸，否則培養基進入指示劑內，造成指示劑反應顏色不準，影響結果。

⑤觀察時應在自然光下觀察，避免直對著太陽光和燈光。

4 控制好消毒溫度

培養基的消毒是否徹底是很關鍵的，消毒溫度和時間是保證培養基質量的重要一環，既要達到滅菌目的，又要保證各種營養成分不受或少受破壞。一般培養基消毒都是116℃，20～30min，而特殊培養基（如糖類培養基、石蕊牛奶培養基等）就有些特殊之處。溫度太高會導致糖分解產酸。以前曾多次發生過沖塞、變色等現象，后經幾次實踐，確定最佳消毒方案即110℃，20min，而且上下磅不能太快，以后很少再出現此類事情。

5 制作消化湯時應注意的事項

消化湯在培養基制作時應用非常普遍，無論是豬胃消化湯還是肉肝胃酶消化湯以及胰酶消化湯，其實質都是酶促反應。因此要想消化徹底，必須掌握影響酶促反應速度的因素。

5.1 溫度對酶促反應的影響

酶是蛋白質，消化溫度太高會使酶變性失活。酶的最適溫度是酶的反應速度達到最高峰的溫度，一般最適宜溫度為40～50℃，60℃以上即開始變性失活。經多次實踐，認為豬胃消化湯最適宜溫度為50～53℃，肉肝胃酶消化湯是56～58℃，消化液較清朗、徹底。

5.2 pH對酶促反應的影響

酶的活性受所在環境pH影響，溶液pH不同，酶的活性也不同。在其它條件不變時，酶在一定的pH范圍內活性最高，此pH為最適pH，胃蛋白酶最適pH為1.5～2.5，我們一般控制在1.6～2.0，胰蛋白酶最適pH為7.8～8.4。因而無論搞豬胃消化湯還是肉肝胃酶消化湯都要加鹽酸，根據經驗，豬胃消化湯按1%加，肉肝胃酶消化湯按1.2～1.3%量加，測pH為1.8～2.0為宜。

5.3 底物濃度對酶促反應的影響

底物濃度與反應速度之間存在一定的函數關系。肉、肝、胃均為底物，因而要控制好底物與水的比例。一般配制豬胃液的比例是：豬胃：蒸餾水＝3：10，如果用于計數或選菌最好是3.5～10。肉肝胃酶消化湯比例為：新鮮牛肉2kg，新鮮豬肝0.5kg蒸餾水10000ml。

5.4 酶濃度對酶促反應的影響

當其他條件相同時，酶促反應速度與酶濃度成正比。肉肝胃酶消化湯中加胃蛋白酶0.4～0.5%。豬胃消化酶大多存在于腺體所分泌的消化液中，不需要另加，如胃質量差可適當加些胃蛋白酶促進消化。

5.5 消化時間

規程規定胃18～24h，視消化而定。一般我們消化22～24h便停止消化，視湯清朗為宜。抽取上清加熱煮沸，按2.5～3.0%量加入2N氫氧化鈉溶液調pH達3.8左右，停止消化，湯備用。

以上就是培養基在制作時的幾個問題，以及影響消化湯消化程度和速度的幾個因素。