高效液相色譜-電感耦合等離子體質譜法測定富硒酵母中硒

楊萍

（盤錦檢驗檢測中心 遼寧盤錦 124010）

1 前言

硒是一種重要的微量元素，具有抗氧化、提升免疫力、抗重金屬等多種功效。本文中采取超聲破碎硒胞壁之后，利用酶解法提取含硒產品。利用高效液相色譜電感耦合等離子體質譜法進行檢測，可以分析提取液中硒的存在方式，并用于酵母品質的分析評估。

2 研究材料和方法

2.1 材料和儀器條件

材料：高效液相色譜儀（waters 600）；電感耦合等離子體質譜儀（賽默飛x7）；超聲破碎（fs300）；硒代尿素，硒標準儲備液濃度為100 mg/L，具體為稱取亞硒酸鈉，硒酸鈉等利用水進行溶解，同時加入硝酸，以2∶98的比例作為溶劑，將其稀釋至相應的濃度。

儀器條件：高效液相色譜條件為選取色譜柱，其型號為water ssym，metryshIelDRpI.Rp18的保護柱，柱溫條件為室溫，進樣量為100 μL，流動相選取甲醇水溶液，其流量為1 mL/min，梯度洗脫程序為0～5 min為甲醇-水溶液，6～25min 為甲醇-水溶液，26～30 min為甲醇-水溶液。以聚醚醚酮（PEek）管進行色譜柱與電感耦合等離子體質譜儀（ICP-MS）儀的連接，以保留時間進行定性，峰面積進行定量。

ICP-MS的設置條件為：射頻功率1 200 W，采樣的深度為12 mm，時間為20 ms，聯用時為100 ms，碰撞時測定模式冷卻器，擠壓器流量為13 L/min，輔助器的流量為0.8 L/min，碰撞器為氫氣和氦氣的混合氣體，流速為7.5 L/min。

2.2 測定同位素硒

在具體使用方法中，首先需要準確稱取0.4 g富硒酵母產品，加入pH為7.5的硒鹽酸緩沖液中，經冰浴之后超聲提取，嚴格控制超聲功率240W，每隔10s超聲1次，破碎超聲30 min后，將所得破碎液加入鏈霉蛋白酶中，混合物在37℃之下以100 r/min的速度攪拌18 h之后[1]，離心30 min，將所得酶解提取及提取殘渣用于酶含量的測定和酶存在形式分析。……