超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定化妝品中氟喹諾酮類藥物

王超 李尚穎 李瑩

【摘要】 采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定化妝品中氟喹諾酮類藥物。樣品以甲酸水和乙腈作為提取溶劑，經(jīng)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分離檢測。為消除不同化妝品基質(zhì)帶來的差異，采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進行定量。13種氟喹諾酮的線性范圍均在1～50 μg·g-1之間，檢出限為0.05 μg·g-1。對空白樣品進行加標(biāo)回收試驗，回收率在84.3%～111.6%之間，測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）在0.5%～6.5%之間。

【關(guān)鍵詞】 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;氟喹諾酮;化妝品

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2019.04.003

Abstract： UPLC-MS/MS was used for the determination of fluoroquinolones in cosmetics. The sample was extracted with formic acid solution and acetonitrile. The fluoroquinolones were detected by UPLC-MS/MS and quantified by matrix calibration curves. The linear ranges of 13 kinds of fluoroquinolones were within 1～50 μg·g-1，the detection limit was 0.3 μg·g-1. Recovery rates measured by standard addition method were in the range of 84.3%～111.6% with RSD （n=6） in range of 0.5%～6.5%.

Key words：? UPLC-MS/MS;fluoroquinolones;cosmetic

氟喹諾酮類藥物是喹諾酮藥物發(fā)展到第三代的產(chǎn)物，是人工合成抗菌藥，具有廣譜性殺菌作用，其組織滲透能力強，因此廣泛應(yīng)用于細(xì)菌感染性疾病的臨床治療中[1-3]。一些不法商家可能故意在化妝品中添加該類物質(zhì)，以求達到宣稱的祛痘或除螨效果，進而牟取暴利。在化妝品中添加氟喹諾酮類物質(zhì)可能會刺激皮膚，引起皮膚過敏或皮炎等諸多的不良反應(yīng)。

目前，針對化妝品中氟喹諾酮類物質(zhì)的檢測報導(dǎo)較少，主要是采用高效液相色譜法[4-5]，但液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于食品等[6-15]各種領(lǐng)域，成為氟喹諾酮類物質(zhì)檢測的主要方法。超高效液相色譜法具有分析時間短和高分離度的特點，三重四級桿質(zhì)譜具有高靈敏度的優(yōu)勢，兩種方法聯(lián)用可以實現(xiàn)對復(fù)雜樣品的痕量定量和確認(rèn)。

化妝品基質(zhì)復(fù)雜、提取難度大，在分析中往往受到高背景的干擾而難于定量，本研究通過盡量簡單的前處理方法，采用液體、半固體和固體三種不同的基質(zhì)分別進行驗證，從而滿足實際工作過程中大批量不同種類樣品的檢測要求。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

1）Waters XEVO TQ型三重四級桿超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀;BECKMAN Avanti J-E型離心機;MILLI-Q Avantage A10型純水機;METTLE TOLEDO XS105型電子天平;Sartorius BT224S型電子天平;Speader 2H-2型渦旋混合器;AS3120A型超聲波清洗儀。

2）13種氟喹諾酮類對照品純度不低于90%。

3）混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液1 mg/mL，精密稱取13種氟喹諾酮類對照品各10.0 mg置入同一10 mL量瓶中，少量甲酸溶解，用乙腈定容。

4）系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（μg/mL）：10，25，50，100，250，500，用乙腈稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。

5）微孔濾膜為0.22 μm有機相濾膜。

6）乙腈、甲醇、甲酸為色譜純，試驗用水為超純水。

1.2 儀器工作條件

1）色譜條件

Waters BEH C18色譜柱（2.1×100 mm，1.7 μm），柱溫35 ℃;進樣量為10 μL。流動相：A為0.1%甲酸水，B為甲醇-乙腈混合溶液（1+1），流速0.4 mL·min-1，梯度洗脫程序見表1。

2）質(zhì)譜條件

電噴霧離子源正離子（ESI+）多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式;毛細(xì)管電壓：0.5 kV;脫溶劑氣溫度：650 ℃;脫溶劑氣流速：850 L/Hr;錐孔氣流速：50 L/Hr;碰撞氣流速：0.15 mL/min;定量、定性離子以及參數(shù)見表2。

1.3 試驗方法

稱取樣品0.200 g，置10 mL比色管中，加入2%甲酸水5 mL，渦旋10 s后，加入乙腈3 mL，渦旋30 s，超聲提取30 min，加入乙腈定容至刻度，渦旋1 min，5000 rpm離心5 min，取上清液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾后，按儀器工作條件進行測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理及檢測條件的選擇

2.1.1 提取方法

根據(jù)文獻報道，大部分的氟喹諾酮類化合物在酸性水溶液中具有良好的溶解性，本方法研究時采用2%甲酸水作為提取溶液，但僅用甲酸水溶液進行提取樣品易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象且不易于過濾，因此本方法采用乙腈作為定容溶液，這樣既有利于目標(biāo)化合物的提取又可以保證定容的準(zhǔn)確性。

2.1.2 流動相

由于氟喹諾酮類藥物在酸性溶液中溶解性更好，并且加入適量的酸更有助于待測物質(zhì)離子化，因此流動相中水相采用0.1%甲酸水，而甲醇-乙腈混合溶液（1+1）作為有機相明顯好于甲醇和乙腈，所以實驗最終選擇0.1%甲酸水和甲醇-乙腈混合溶液（1+1）體系作為流動相，采用梯度洗脫在盡量短的分析時間對13種化合物進行分離。

2.1.3 質(zhì)譜條件

將氟喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液注入離子源，在正離子模式下對13種物質(zhì)分別進行毛細(xì)管電壓、錐孔電壓、碰撞氣流速、碰撞能量等質(zhì)譜條件的優(yōu)化，使母離子與子離子的信號強度的響應(yīng)值達到最大，并挑選最強的兩個子離子作為定量離子和定性離子，最優(yōu)的質(zhì)譜條件見表2。13種氟喹諾酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見圖1。

由圖1可以看出13種物質(zhì)在4.16～9.16 min內(nèi)依次出峰且峰型良好。

2.2 方法特異性試驗

分別取固體、半固體、液體三種不同化妝品基質(zhì)樣品，按試驗方法前處理后進行質(zhì)譜檢測，結(jié)果表明三種基質(zhì)中均未含有氟喹諾酮類物質(zhì)，以這三種基質(zhì)進行加標(biāo)回收試驗無干擾。

2.3 工作曲線及檢出限

稱取三種空白基質(zhì)樣品0.200 g，置10 mL比色管中，分別加入系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液50 μL，按照試驗方法步驟進行前處理，得到質(zhì)量濃度（μg/g）為1，2.5，5，10，25，50的標(biāo)準(zhǔn)溶液進行分析，以定量離子色譜圖中各組分的峰面積定量，加權(quán)系數(shù)為1/X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明待測物1～50 μg·g-1范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表3。該方法檢出限為0.05 μg·g-1。

2.4 回收試驗

分別在陰性的固體、半固體、液體三種不同化妝品基質(zhì)中添加2.5、10、25 μg·g-1三個濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按試驗方法處理，分別平行測定6次，計算13種氟喹諾酮的平均加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）結(jié)果見表4。

2.5 樣品分析

按試驗方法對80批市售宣稱具有祛痘功能的化妝水、乳液、潤膚膏霜等不同類型的化妝品樣品進行檢測，其中2批次檢出氧氟沙星。

3 結(jié)語

本工作建立了超高效液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜法測定喹諾酮類物質(zhì)的方法，針對不同化妝品基質(zhì)進行了考察，方法前處理過程簡單，分析時間短，定量準(zhǔn)確，可以滿足大批量樣品快速檢測的要求，可為化妝品市場監(jiān)管提供參考依據(jù)。

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