橙皮苷栓劑的研制及質量評價

金輝，林迦勒，王陳翔，周子曄

（溫州醫科大學附屬第一醫院 藥學部，浙江 溫州 325015）

痔瘡是一種由于肛門部位靜脈叢發生病理性改變而導致的慢性疾病。痔瘡的主要致病原因是直腸下段黏膜和肛管皮膚下的靜脈叢淤血、擴張和屈曲，主要臨床表現是靜脈團破裂導致的便血，嚴重時伴有血栓或炎癥導致的腫脹和疼痛。現代醫學治療痔瘡的主要目的是解除痔瘡的臨床癥狀，而非通過手術消除痔體[1]。

橙皮苷是一種天然黃酮類衍生物，具有雙氫黃酮氧苷結構，可以從蕓香科植物酸橙或甜橙的干燥果皮提取獲得，同時也廣泛存在于豆科、唇形花科、蝶形花科等多種植物中[2]。橙皮苷具有維生素P樣作用，能增強毛細血管韌性，維持血管正常滲透壓，縮短出血時間[3-4]，同時還具有抗炎作用，這與臨床治療痔瘡的思路一致。目前國內外用于治療痔瘡的橙皮苷劑型只有片劑，未見橙皮苷栓劑的臨床應用報道，如能將其制成栓劑直接作用于給藥部位治療痔瘡，臨床應用前景將會十分廣闊。本課題通過制備橙皮苷栓劑，并對其進行質量評價，為橙皮苷新劑型的開發提供藥劑學實驗數據。

1 材料和方法

1.1 試劑 橙皮苷原料藥（批號20160215，浙江龍游振強生物科技有限公司）；橙皮苷標準品（純度96.1%，批號110721-201617，國家食品藥品檢定研究院）；聚乙二醇400（批號150815，江蘇彤盛化學試劑有限公司）；聚乙二醇6000（批號20140711，上海 國藥集團化學試劑有限公司）；甘油、液體石蠟（南昌白云藥業有限公司）；二甲基亞砜（北京索萊寶科技有限公司）；甲醇（色譜純，美國SPECTAUM有限公司）；其余試劑均為分析純。

1.2 儀器 Waters 600E-2487高效液相色譜儀（美國Waters有限公司）；RBY-4型自動融變時限儀（天津天光儀器有限公司）；SJM-10型栓劑模型（長沙常宏制藥機械設備廠）；AB135-S/FACT電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo儀器有限公司）；90-1B恒溫磁力攪拌器（上海司樂儀器有限公司）。

1.3 橙皮苷栓劑的制備

1.3.1 處方選擇及配比：處方選聚乙二醇400、聚乙二醇6000、甘油為基質，以三者的配比進行正交分析考察，根據前期預實驗和橙皮苷的理化特點，最終確定1:5:1為最優配比。同時考察基質與藥物橙皮苷的比例，當它們配比為4:1時，能兼顧載藥量與 栓劑外觀。栓劑配方最終如下：栓劑總質量為2 g，其中含0.4 g橙皮苷，0.23 g聚乙二醇400，1.14 g聚乙二醇6000，0.23 g甘油。

1.3.2 制備工藝：采用熱熔法制備栓劑[5]，按10粒栓劑制備量分別稱取聚乙二醇400 2.3 g、聚乙二醇6000 11.5 g、甘油2.3 g至50 mL燒杯，放至攪拌器上80 ℃融化攪拌，混合均勻；稱取橙皮苷微粉4 g至上述燒杯中，持續加熱攪拌30 min，使藥物與基質充分混合均勻；用注射器抽取混勻的含藥基質3 mL，快速注入含少量脫模劑（石蠟）的栓模 中，待其冷卻凝固，削去溢出部分，脫模即得。

1.4 栓劑的質量評價

1.4.1 栓劑外觀檢查：按照要求，栓劑外觀應完整光滑，顏色均勻一致，無軟化、變形或干裂，藥物和基質完全混合。

1.4.2 重量差異檢查：根據《中華人民共和國藥典》[6]規定：取10粒栓劑，精密稱定總質量，得平均粒重。然后精密稱定各粒質量，該質量與平均粒重相比，超出質量差異限度的粒數不應多于1粒，質量的超出不應超過限度1倍。

1.4.3 融變時限：取3粒栓劑，按《中華人民共和國藥典》[6]融變時限檢查裝置，基質為水溶性的栓劑應在60 min內完全溶解。如有1粒不合格應再復測3粒，直至達到規定要求。

1.4.4 藥物含量的測定

1.4.4.1 色譜條件：X-Bridge C18色譜柱（4.6× 150 mm，5 μm），流動相A（1.3%醋酸水溶液，pH= 2.76）:B（甲醇）=66:34；檢測波長275 nm；柱溫 40 ℃；流速1.0 mL·min-1；進樣量為20 μL。

1.4.4.2 標準曲線的制備：精密稱取橙皮苷標準品10 mg，放于10 mL容量瓶中，加入二甲基亞砜定容，得1 mg·mL-1標準品儲備液。精密稱取10 mg秋水仙堿，置100 mL容量瓶中，用純化水定容，得100 μg·mL-1內標溶液。移取1 mg·mL-1的標準品儲備液適量，用0.1 mol·L-1的NaOH溶液依次配成濃度為10、50、100、250、500 μg·mL-1的工作液。在各濃度工作液100 μL中加入10 μL內標溶液，分別20 μL進樣高效液相（high performance liquid chromatography，HPLC）測定，以橙皮苷濃度C為橫坐標，橙皮苷峰面積與內標峰面積比值R為縱坐標做線性回歸。

1.4.4.3 準確度試驗：按“1.4.4.2”項下工作液配制方法平行配制低、中、高3種濃度（40、250、400 μg·mL-1）的橙皮苷標準品溶液各3份，依上述色譜條件HPLC進樣，分別測定各濃度溶液和內標的峰面積，用標準曲線法計算橙皮苷濃度，該濃度與理論濃度的比值即為準確度。

1.4.4.4 精密度試驗：按“1.4.4.2”項下工作液配制方法平行配制低、中、高3種濃度（40、250、400 μg·mL-1）的橙皮苷標準品溶液各6份，分別于室溫條件下放置0、3、6 h后測定，4 ℃條件下保存 0、3、7 d后測定，依上述色譜條件HPLC進樣，計算橙皮苷的濃度，得精密度的相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）。

1.4.4.5 回收率試驗：取成品栓劑一枚碾碎后溶于500 mL 0.1 mol·L-1NaOH溶液，充分振搖使其溶解，溶液經0.46 μm微孔濾膜濾過，取濾液1 mL至10 mL容量瓶稀釋定容，移取100 μL按“1.4.4.2”項下方法操作，進樣HPLC測得樣品濃度C1。將橙皮苷標準品加入到樣品溶液中，分別配成含橙皮苷標準品濃度為40、250、400 μg·mL-1的低、中、高加樣溶液，各濃度平行配制3份，按“1.4.4.2”項下方法處理后HPLC進樣測定，得樣品濃度C2，（C2-C1）的實際測定值與加入橙皮苷標準品理論濃度的比值即為橙皮苷栓的加樣回收率。

1.4.4.6 含量均勻度分析：取三批橙皮苷栓劑樣 品，按“1.4.4.5”項下方法處理后得樣品溶液， 20 μL進樣HPLC測定橙皮苷濃度，每批次樣品平行操作5次，并對其含量均勻度進行分析。

1.5 統計學處理方法 采用統計軟件SPSS19.0進行統計分析。所有數據以±s表示。

2 結果

2.1 外觀色澤 橙皮苷栓表面光滑完整，呈子彈型，栓體棕色，25 ℃室溫條件下成型良好，硬度適宜，無軟化、變形、開裂等現象。

2.2 重量差異 取10粒成品栓劑稱定，平均粒重為（2.01±0.05）g，RSD為2.74%，符合重量差異低于7.5%栓劑質量標準要求。

2.3 融變時限 本次制得橙皮苷栓劑的融變時間為（17.98±1.17）min，符合關于水溶性基質栓劑的融變時限限度少于60 min的規定。

2.4 含量測定結果

2.4.1 方法專屬性：在本色譜條件下橙皮苷出峰時間為7.0 min，內標出峰時間為13.3 min，兩個物質完全分離，且無雜質峰干擾，方法專屬性強（見圖1）。

2.4.2 標準曲線建立：以橙皮苷濃度C為橫坐標，橙皮苷峰面積與內標峰面積比值R為縱坐標，所得標準曲線為：R=0.145C+0.390，r2=0.9999。表明在10～500 μg·mL-1濃度范圍內，橙皮苷標準曲線線性關系良好。

圖1 橙皮苷栓檢測的HPLC色譜圖

2.4.3 準確度、精密度、加樣回收率：橙皮苷標準 品溶液低、中、高3種濃度（40、250、400 μg·mL-1） 的準確度范圍為99.16%～100.74%，室溫放置3 h與4 ℃保存7 d精密度RSD均小于5%，見表1。橙皮苷低、中、高3種濃度（120、330、480 μg·mL-1）的加樣回收率均在95%以上，見表2。表明該實驗建立的方法學符合橙皮苷濃度的檢測要求。

表1 橙皮苷標準品的準確度、精密度

表2 橙皮苷的加樣回收率

2.4.4 含量均勻度：本實驗制備的橙皮苷栓劑經HPLC測定，如表3所示，三批次樣品實際含量RSD均低于5%，在標示量400 mg的92.2%～103.4%范圍內，符合含量均勻度要求。

3 討論

橙皮苷片劑難溶于水，口服后易受胃酸作用發生水解和酶解，生物利用度低[7]，日服用劑量較大。將橙皮苷制成栓劑，塞入腔道后由于體溫作用迅速軟化并融化于分泌液中，能夠在局部維持較高濃度，起到治療作用[8]。與口服給藥相比，直腸給藥起效迅速，且吸收后濃度維持時間無差別，因此將橙皮苷制成栓劑更符合痔瘡的臨床治療目的[9]。

本實驗采用聚乙二醇作為水溶性栓劑基質，可以使橙皮苷在體內快速釋放并發揮療效。正交實驗結果顯示，聚乙二醇400:聚乙二醇6000:甘油= 1:5:1是基質的最優配比，并且確定橙皮苷與基質的比例為1:4，以熱熔法結合定量注模成型制備橙皮苷栓，所得栓劑外觀良好，其重量差異、含量均勻度以及融變時限檢測結果均符合《中華人民共和國藥典》的質量要求。將橙皮苷制成直腸栓劑，給藥簡單、方便、安全，適合作為該藥的新劑型開發，尤其適合痔瘡高發病率且不能手術的老年患者[10]。

表3 橙皮苷實際測定含量

本課題組建立了橙皮苷栓的制備方法以及質量評價體系，完成了栓劑的體外藥劑學實驗內容。同時橙皮苷的動物用栓劑也已開始研發，以期通過動物實驗對橙皮苷栓的體內藥效學進行進一步評價。