RASSF10基因在腎細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用分析

左莉麗

腎細(xì)胞癌[1]是1種常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，也被稱為腎腺癌，人們常稱為腎癌，引起原因是腎泌尿小管發(fā)生病變，發(fā)病率高、治療難度大。腎細(xì)胞癌占腎臟各種類型惡性腫瘤比重達(dá)到90%，是最重要的腎臟惡性腫瘤[2-3]。國內(nèi)外醫(yī)護(hù)人員對(duì)腎細(xì)胞癌進(jìn)行了大量的研究，但是仍不能全面準(zhǔn)確的闡述腎細(xì)胞癌的發(fā)病原因[4]，不過，人們公認(rèn)長期大量吸煙和過度肥胖是導(dǎo)致腎細(xì)胞癌的兩大主要因素。近年來，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的提高和影響學(xué)的發(fā)展，患者手術(shù)之后5年生存率有所提高，但是發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等癥狀的患者手術(shù)之后5年生存率仍較低，所以用1種新的方法來診斷和治療腎細(xì)胞癌顯得尤為迫切[5]。隨著科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，現(xiàn)在人們通過分子生物學(xué)對(duì)腎細(xì)胞癌進(jìn)行研究，其中RASSF基因是在人體11號(hào)染色體上的一族基因，而RASSF10是RASSF家族中的一員，有1個(gè)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域[6]。目前的研究發(fā)現(xiàn)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域可能對(duì)惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著重要的作用。為更深入的分析了解RASSF10基因在腎細(xì)胞癌發(fā)生和發(fā)展過程中的作用，本次采取控制單一變量方法進(jìn)行研究分析，為診斷治療腎細(xì)胞癌提供新的依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取自2014年8月至2016年8月入本院的78例腎細(xì)胞癌患者為研究對(duì)象。男性49例，女性29例，年齡為30～75歲，60歲以上患者34例(43.6%)，60歲以下患者44例(56.4%)。腎細(xì)胞癌患者腫瘤直徑平均為7.6 cm，直徑2.5～13 cm。通過診斷及手術(shù)治療，患者透明細(xì)胞癌61例，非透明細(xì)胞癌17例。Ⅰ期25例(32.1%)；Ⅱ期39例(50.0%)；Ⅲ期10例(12.8%)；Ⅳ期4例(5.1%)。分化程度：高分化12例(15.4%)、中分化36例(46.2%)、低分化30例(38.4%)。未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移75例(96.1%)，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移3例(3.9%)。

1.2 樣本納入排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：確診為腎細(xì)胞癌患者；未患有影響本次研究的其他疾病；手術(shù)之前未進(jìn)行其他治療；患者家屬及本人同意參與研究，并簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：患者診斷、治療等病歷資料不全者；哺乳、妊娠等處于特殊時(shí)期的患者；無法參與研究的；中途退出研究的。

1.3 研究方法

1.3.1 標(biāo)本采集 采集每位患者手術(shù)中離體20 min內(nèi)的病變腎組織，癌旁組織采集自患者癌灶距離3 cm的組織，采集對(duì)應(yīng)的正常組織作為對(duì)照，經(jīng)過醫(yī)學(xué)處理后以備使用。

1.3.2 檢測方法 采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測患者腎細(xì)胞癌、癌旁組織和正常組織中RASSF10基因mRNA表達(dá)量，采用甲基特異性聚合酶鏈反應(yīng)檢測患者腎細(xì)胞癌、癌旁組織和正常組織中RASSF10基因的甲基化狀態(tài)。

1.4 觀察指標(biāo)

及時(shí)觀察患者心電圖、肝腎等功能，監(jiān)測患者生命體征等指標(biāo)。觀察腎細(xì)胞癌患者病變組織、癌旁組織和正常組織中RASSF10基因mRNA表達(dá)量及RASSF10基因的甲基化狀態(tài)，同時(shí)記錄RASSF10基因、甲基化狀態(tài)與患者臨床資料的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS 19.0軟件對(duì)采集到的數(shù)據(jù)資料作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料間均數(shù)的差異比較用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，多組間對(duì)比采用方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RASSF10在病變組織、癌旁組織和正常組織中mRNA表達(dá)水平

RASSF10 mRNA在癌變組織中表達(dá)水平低于癌旁組織和正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但癌旁組織和正常組織中的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組織中RASSF10 mRNA表達(dá)水平

注：①為a與b比較，t=4.583，P=0.002；②為b與c比較，t=3.094，P=0.001；③為a與c比較，t=1.519，P=0.368。

2.2 RASSF10在病變組織、癌旁組織和正常組織中甲基化結(jié)果比較

病變組織甲基化率高達(dá)70.5%，顯著高于對(duì)應(yīng)的癌旁組織甲基化率(35.9%)和正常組織甲基化率(24.4%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，見表2。

表2 各組織中RASSF10甲基化結(jié)果總體比較

注：①為a與b比較，χ2=3.049，P=0.001；②為b與c比較，χ2=4.138，P=0.002；③為a與c比較，χ2=1.781,P=0.308。

2.3 腎細(xì)胞癌組織中甲基化結(jié)果、RASSF10基因mRNA水平與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

腎細(xì)胞癌組織中甲基化結(jié)果、RASSF10基因mRNA水平與患者性別、年齡、腫瘤直徑、病理類型和分化程度無相關(guān)性(P>0.05)，與臨床分期具有顯著相關(guān)性(P<0.05)，見表3。

2.4 腎細(xì)胞癌組織中甲基化結(jié)果、RASSF10基因mRNA水平間的關(guān)系

腎細(xì)胞癌組織甲基化mRNA水平低于未甲基化mRNA水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表3 腎細(xì)胞癌組織中甲基化結(jié)果、RASSF10基因mRNA水平與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表4 腎細(xì)胞癌組織中甲基化結(jié)果與RASSF10基因mRNA水平的關(guān)系

3 討論

近年來，隨著環(huán)境惡化，環(huán)境污染嚴(yán)重，人們生活習(xí)慣的改變，飲食方式的變化，吸煙和肥胖現(xiàn)象越來越多，這兩大因素正是引起人體各種疾病的主要元兇[7]。腎細(xì)胞癌就是由這兩種因素引起的1種惡性腫瘤，1種泌尿系統(tǒng)常見的癌癥。隨著生物技術(shù)、基因?qū)W的不斷發(fā)展，發(fā)現(xiàn)、診斷和治療惡性腫瘤又多了1種行之有效的方法[8-9]。腎細(xì)胞癌發(fā)病原因多而且復(fù)雜，是多種因素共同長期造成的結(jié)果。早期發(fā)現(xiàn)困難，早期患者癥狀不明顯，和正常人一樣，很少出現(xiàn)癌癥癥狀，因此，大多數(shù)患者偶然發(fā)現(xiàn)患病之后，一般病情已至中晚期，已錯(cuò)過最佳治療階段[10-12]。現(xiàn)在一般的檢查手段是腹部B超，診斷的主要方法是腎CT[13]。腎是人體的特殊器官，通過常規(guī)的化療和放療效果不明顯，手術(shù)是1種對(duì)腎細(xì)胞癌較為有效的治療手段。而針對(duì)晚期患者，單單的手術(shù)治療很難使患者恢復(fù)，需要新的治療方法，這也是最近幾年國內(nèi)外醫(yī)學(xué)工作者研究和探討的重點(diǎn)方向[14-15]。RASSF10基因存在于人體的心臟、腦、胰腺和骨骼等組織和結(jié)構(gòu)中，但是在腎細(xì)胞癌、食管癌和肝癌等惡性腫瘤發(fā)生了甲基化變化，在以上惡性腫瘤中低水平表達(dá)[16]。當(dāng)RASSF10基因表達(dá)水平降低或者受到抑制，對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞的抑制作用變得減弱，因此，惡性腫瘤細(xì)胞迅速分裂增殖，癌癥癥狀加深，給患者身心帶來嚴(yán)重的傷害，因此，加大對(duì)RASSF10基因在腎細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用研究顯得尤為重要。

RASSF10 mRNA在患者癌變組織中表達(dá)水平0.63±0.05，低于癌旁組織0.71±0.04和正常組織的0.73±0.06，F(xiàn)值為149.37，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但癌旁組織和正常組織中的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。患者病變組織甲基化率高達(dá)70.5%，顯著高于對(duì)應(yīng)的癌旁組織甲基化率35.9%和正常組織甲基化率24.4%，χ2值為19.68，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。RASSF10在患者腎細(xì)胞癌組織中甲基化率高達(dá)70.5%，顯著高于癌旁組織甲基化率35.9%和正常組織甲基化率24.4%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，癌旁組織甲基化率稍高于正常組織甲基化率，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。患者腎細(xì)胞癌組織中甲基化結(jié)果、RASSF10基因mRNA水平與患者性別、年齡、腫瘤直徑、病理類型和分化程度無相關(guān)性，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與臨床分期差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Ⅰ+Ⅱ期共有40例患者發(fā)生了甲基化，發(fā)生率為62.5%，Ⅲ+Ⅳ期雖然只有14例患者發(fā)生甲基化，但其發(fā)生率為100.0%，顯著高于Ⅰ+Ⅱ期患者，說明RASSF10基因在晚期腎細(xì)胞癌患者中更容易發(fā)生甲基化現(xiàn)象。雖然本次研究中發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者3例，發(fā)生率為3.9%，但淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是一個(gè)重要的影響惡性腫瘤發(fā)展的因素。患者腎細(xì)胞癌組織甲基化mRNA水平0.61±0.05，低于未甲基化mRNA水平0.67±0.03，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

綜上所述，RASSF10基因表達(dá)水平、甲基化狀態(tài)與患者腫瘤分期明顯相關(guān)，在一定程度上能反映患者RASSF10基因低表達(dá)水平與腎細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān)，同時(shí)為診斷和治療腎細(xì)胞癌提供依據(jù)，同時(shí)，為廣大醫(yī)護(hù)人員積累了經(jīng)驗(yàn)，可廣泛推廣。