茶多酚對高脂血癥大鼠血脂代謝和肝組織MDA、T-SOD含量的影響

楊 寬，錢衛東，秦 蓓

(1.陜西科技大學 食品與生物工程學院，西安 710021； 2.西安醫學院 藥學院，西安 710021； 3.西安交通大學 理學院，西安 710049)

高脂血癥是指體內脂類物質代謝紊亂或轉運異常導致血脂濃度異常的一種疾病[1]，是引發心血管疾病、高血壓、糖尿病、肥胖癥、脂肪肝等重大疾病的危險因素[2-4]，嚴重威脅人類的健康[5]。隨著我國經濟的快速發展，生活方式的改變，國內高脂血癥患者日益增多。臨床治療上采用西藥的療效比較顯著，特別是他汀類藥物，其療效確切、快捷，但長時間使用存在一定副作用，易引起血糖升高、惡心、腹脹、腹瀉及肝功能損害等不良反應[6]。如何有效地通過營養干預降低高脂血癥的發病率是當代人們研究的重要內容。

茶多酚(TP)是從茶葉中提取的多酚類物質，是藥理和保健功能的有效成分[7]，其主要成分為黃烷醇類、酚酸類、黃酮醇類、縮酚酸類等[8]。研究顯示，茶多酚含有酚羥基，可提供活潑氫原子使自由基滅活，具有抗氧化、抗腫瘤、抗高脂血癥等活性[9-10]。目前的研究主要集中于茶多酚抗氧化方面[11]。為進一步探討茶多酚的藥理作用，本文建立了高脂血癥大鼠模型，研究了茶多酚對動物血脂的影響及其對肝組織中MDA含量和T-SOD活性變化的影響，為研制開發以茶多酚為主要成分的調血脂護肝類保健食品和藥物提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物

健康SD大鼠60只，雄性，體重180～220 g，由西安交通大學醫學部實驗動物中心提供，使用許可證編號SYXK(陜)2012-005。在室溫20～25℃、相對濕度40%～70%的實驗室內飼養，籠具及墊料定期清洗更換，自由飲食飲水。

1.1.2 藥品與試劑

茶多酚(AR，99%)，成都艾科達化學試劑有限公司；膽固醇、豬油、蛋黃粉(食品級)，河南中盛化工產品有限公司；阿托伐他汀膠囊(H20070054)，天方藥業有限公司；豬膽鹽(BR)，上海信裕生物科技有限公司；其他試劑均為國產分析純。總膽固醇(TC)測定試劑盒、甘油三酯(TG)測定試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測定試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測定試劑盒、MDA檢測試劑盒、T-SOD檢測試劑盒，南京建成生物工程研究所。普通飼料，江蘇省協同醫藥生物工程有限公司。

1.1.3 儀器與設備

902型低溫保存箱、Multiskan Go 1501型全自動全波長酶標儀、MicroPure Standard超純水機，賽默飛；IX73型熒光倒置顯微鏡，OLYMPUS；TCL-16G型離心機，上海安亭科學儀器廠；JY201型電子天平，上海良平儀表有限公司；DHG-9123A型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海精宏實驗設備有限公司；QL-901型渦旋混勻儀，海門市其林貝爾儀器制造有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 高脂飼料制備及模型建立[12-13]

高脂飼料的制備：按照78.8%普通飼料+10%豬油+10%蛋黃+1%膽固醇+0.2%豬膽鹽的配比，攪拌混合均勻制成團塊狀，在60℃烘干，以備使用。

動物造模：10只大鼠給予普通飼料，另外50只大鼠給予高脂飼料，高脂血癥模型造模4周后，各組大鼠禁食12 h眼眶靜脈叢采血，測定甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)等血脂指標，以檢測模型是否成功。

1.2.2 動物分組、給藥及血樣采集

造膜成功后，50只大鼠隨機分為：高脂模型組、陽性對照組、茶多酚高、中、低劑量組。茶多酚高、中、低劑量組分別給予3.750、1.875、0.938 g/(kg·d)的茶多酚；陽性對照組給予7.50 mg/(kg·d)的阿托伐他汀膠囊。正常對照組給予普通飼料，模型組繼續給予高脂飼料。 給藥2周后，大鼠心臟動脈取血，靜置1 h，3 000 r/min離心，吸取血清、分離肝臟進行相關指標測定。

1.2.3 指標檢測

血脂水平的檢測：吸取適量血清，按試劑盒說明測定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、MDA和T-SOD的含量。

臟器指數的測定：采用烏拉坦溶液麻醉大鼠，迅速取出心臟、肝臟、脾臟、腎臟等臟器，稱濕重，計算臟器指數。并用生理鹽水洗去臟器血污，濾紙吸干，保存在10%的甲醛中固定，用于組織切片的制備。

臟器指數=臟器質量/體重×100%。

肝勻漿指標的測定：取部分肝組織在生理鹽水中漂洗，濾紙吸干，勻漿，制成10%勻漿液，3 000 r/min離心10 min，取上清液，按試劑盒說明進行MDA與T-SOD的檢測。

1.2.4 組織病理切片觀察

取已固定肝組織，生理鹽水沖洗，在不同濃度乙醇中梯度脫水、浸蠟、包埋、切片、脫蠟、脫水、HE染色，封片后在熒光倒置顯微鏡下觀察。

1.2.5 數據統計分析

2 結果與分析

2.1 對大鼠體重的影響

飼養4周期間，每5 d對大鼠進行稱重，比較喂養普通飼料和喂養高脂飼料大鼠體重增長變化情況，結果見圖1。由圖1可看出，給予高脂飼料的大鼠體重增長率明顯偏大，其體重增長率為80.75%～96.5%，比給予普通飼料的大鼠體重增長快。

圖1 大鼠體重增長變化

2.2 對大鼠各臟器的影響(見表1)

表1 各組大鼠臟器指數 %

注：與正常對照組比較*P<0.05，**P<0.01；與高脂模型組比較△P<0.05，△△P<0.01。下同。

由表1可知，陽性對照組、茶多酚中、高劑量組大鼠肝臟指數與高脂模型組比較，均呈現顯著性差異(P<0.01或P<0.05)，與正常對照組肝臟指數比較無顯著性差異(P>0.05)。說明茶多酚對高脂血癥大鼠的肝臟具有一定的保護作用，且高劑量茶多酚的作用較強。不同實驗組大鼠腎臟、心臟、脾臟指數組間無統計學差異。

2.3 對大鼠血脂水平的影響(見表2)

表2 各組大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平比較 mmol/mL

由表2可知，各給藥組大鼠的TC水平均低于高脂模型組，其中陽性對照組和茶多酚中、高劑量組與高脂模型組比較，差異具有統計學意義(P<0.05或P<0.01)，低劑量茶多酚對TC水平無明顯干預作用。與陽性對照組比較，茶多酚中、高劑量組對TC干預作用較強。陽性對照組和茶多酚低、中、高劑量組TG含量均低于高脂模型組，且差異具有統計學意義(P<0.01)。各給藥組大鼠的LDL-C水平低于高脂模型組，其中陽性對照組和茶多酚中、高劑量組與高脂模型組比較，差異具有統計學意義(P<0.01)，且中、高劑量茶多酚對LDL-C干預作用優于陽性對照藥。各給藥組大鼠HDL-C水平均高于高脂模型組，其中陽性對照組和茶多酚中、高劑量組與高脂模型組比較，差異有統計學意義(P<0.01)，低劑量茶多酚作用無顯著性。與陽性對照組比較，高劑量茶多酚對HDL-C水平有較強干預作用。表明茶多酚具有降低高脂血癥模型大鼠血清中總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平，升高高密度脂蛋白膽固醇水平的作用，且中、高劑量茶多酚效果較優。

2.4 對大鼠血清和肝組織中MDA和T-SOD含量的影響(見表3)

表3 各組大鼠血清和肝組織中MDA、T-SOD含量比較

由表3可知，低、中、高劑量茶多酚對飲食引起的高脂血癥有一定的干預作用。與高脂模型組比較，茶多酚高、中劑量組均顯著降低大鼠血清中MDA的含量(P<0.01)，并顯著提高T-SOD的活性(P<0.01)，而茶多酚低劑量組與高脂模型組相比較，雖大鼠血清MDA含量降低、T-SOD的活性升高，但無統計學差異；與陽性對照組比較，高劑量茶多酚治療作用較優。在肝組織中，與高脂模型組相比，茶多酚各劑量組MDA含量較高脂模型組降低，其中陽性對照組和中、高劑量組與高脂模型組比較差異有統計學意義(P<0.01)，且呈量效關系，表明茶多酚通過抗自由基、抑制脂質過氧化物和提高膜穩定性對肝細胞產生了保護作用；與高脂模型組比較，給藥2周后大鼠T-SOD活性顯著提高，陽性藥和各劑量茶多酚均有顯著干預作用(P<0.01)，且高劑量茶多酚與陽性藥干預作用相當。

2.5 肝臟組織的形態病理學影響

解剖大鼠后觀察臟器，可見正常對照組大鼠肝臟顏色暗紫紅潤，肝臟表面光滑，肝臟體積適中，觸摸組織彈性較好。高脂模型組肝臟略帶粉白色，肝臟包膜緊脹，組織腫大，相對正常對照組彈性較差。陽性對照組肝臟和茶多酚高、中、低劑量組肝臟與高脂模型組肝臟相比，肝臟顏色明顯好轉，為淡紅色至深紅色，表面比較光滑。

為觀察肝組織病變的一般生理特性，對各實驗組大鼠肝臟切片進行HE染色，可見細胞核被染為藍紫色，細胞漿被染為粉紅色，各組大鼠肝臟切片顯微圖像見圖2。由圖2可見，光鏡下觀察，正常對照組大鼠肝細胞均勻排列，結構完整，質地較緊密，無其他異常變化。高脂模型組肝組織損傷嚴重，肝細胞排列紊亂，數量減少，出現中度以上的大泡性肝細胞脂肪變性，細胞核移位，部分視野見炎性細胞浸潤灶。與高脂模型組相比，陽性對照組及茶多酚高劑量組大鼠肝細胞結構基本恢復正常，未見空泡樣變性，無炎性細胞浸潤灶，肝臟細胞受損情況顯著好轉。茶多酚中、低劑量組肝細胞也有所好轉，存在脂肪泡滴，但其效果比茶多酚高劑量組差。

圖2各組大鼠肝臟切片顯微圖像

3 結 論

實驗結果表明，茶多酚高、中劑量即3.750、1.875 g/(kg·d)，能明顯降低大鼠血脂中TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平，改善血脂代謝，其中給予高劑量茶多酚干預效果優于陽性對照藥阿托伐他汀。茶多酚能增強大鼠血清和肝組織中T-SOD活性，保護細胞膜中的脂質過氧化，降低過氧化產物MDA含量，減少脂質過氧化對肝臟的損害，提高抗氧化能力。