香酸類(lèi)柑橘種質(zhì)耐寒力比較研究

羅君琴 王 平 柯甫志 聶振朋 徐建國(guó)

（浙江省柑橘研究所 臺(tái)州318026）

目前，在我國(guó)種植發(fā)展的香酸類(lèi)柑橘種質(zhì)主要包括檸檬類(lèi)和香橙類(lèi)柑橘。檸檬類(lèi)柑橘品種耐寒適應(yīng)范圍相對(duì)較窄，臺(tái)州屬于柑橘生產(chǎn)北緣適宜栽培地區(qū)，種植檸檬存在凍害風(fēng)險(xiǎn)。香酸類(lèi)柑橘新種質(zhì)創(chuàng)制研究中，開(kāi)展香酸類(lèi)柑橘育種親本種質(zhì)的電導(dǎo)率檢測(cè)及耐寒力相關(guān)性考察評(píng)價(jià)有助于雜種優(yōu)勢(shì)育種中目標(biāo)親本的早期篩選，為新種質(zhì)創(chuàng)制節(jié)約時(shí)間和空間，試驗(yàn)研究意義較大[1]。

1 材料與方法

1.1 供試材料

本研究樣品采集自浙江省柑橘研究所種質(zhì)資源圃收集保存的小萊檬（XLM）、檸檬（01-35）、巴甘檬（BGM）、興津66（XJ66）、尤力克檸檬（YLK）、香橙（XC）、云檸（YN）、北京檸檬（BJ）、德島酸橙（DD）、費(fèi)姆萊特（FMNL）、卡波蘇（KBS）和棖（Z）共12份香酸類(lèi)柑橘種質(zhì)（下文均以大寫(xiě)字母表示種質(zhì)名稱(chēng)）。

1.2 試驗(yàn)方法

分別于2016年1月和2月期間，采集長(zhǎng)勢(shì)較一致的目標(biāo)柑橘種質(zhì)近稍頂端第3～4節(jié)位葉片約20張，帶回實(shí)驗(yàn)室自來(lái)水沖洗干凈，再用去離子水沖洗2遍，濾紙吸干，分別用6mm 規(guī)格的打孔器避開(kāi)葉片中脈，切取葉片小圓片混合待用。

試驗(yàn)1：2016年1月，于種質(zhì)資源圃分別采集XLM、01-35、BGM、XJ66、YLK、XC、YN和BJ等12份香酸類(lèi)柑橘種質(zhì)近稍頂端葉片進(jìn)行相對(duì)電導(dǎo)率比較試驗(yàn)，試驗(yàn)2次。每次試驗(yàn)，分別稱(chēng)取各種質(zhì)葉片小圓片1±0.002g，裝入烘干的潔凈錐形瓶，分別加入30ml無(wú)離子水，包上耐高溫組培瓶封口紙，于震蕩器中搖動(dòng)6h 后取出測(cè)各份種質(zhì)葉片浸出液電導(dǎo)率1；檢測(cè)完畢后各處理置于準(zhǔn)備好的沸水浴中加熱15min,再次測(cè)各處理浸出液電導(dǎo)率2，然后利用公式：相對(duì)電導(dǎo)率=電導(dǎo)率1/電導(dǎo)率2×100%，計(jì)算分析試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果。每次試驗(yàn)各種質(zhì)處理重復(fù)2次。

試驗(yàn)2：2016年2月中旬分別采集01-35、YLK、XC、BJ 四份種質(zhì)近稍頂端葉片開(kāi)展不同低溫條件下相對(duì)電導(dǎo)率低溫半致死溫度LT50擬合試驗(yàn)[2～4]。試驗(yàn)時(shí)將各種質(zhì)葉片小圓片混合分成6份，每份稱(chēng)取1±0.002g樣品，分別裝入烘干的潔凈錐形瓶，四份種質(zhì)重復(fù)2次，分別放置于智能低溫培養(yǎng)箱設(shè)定0℃、-2℃、-4℃、-6℃、-8℃、-10℃模擬低溫條件處理6h,再分別加無(wú)離子水30ml震蕩均勻后用雷磁電導(dǎo)率儀測(cè)各種質(zhì)各低溫處理葉片相對(duì)電導(dǎo)率（相對(duì)電導(dǎo)率=電導(dǎo)率（室溫）/電導(dǎo)率（沸水）×100%）。

1.3 數(shù)據(jù)分析

測(cè)定數(shù)據(jù)結(jié)合利用Logistic方程、Excel2007趨勢(shì)線(xiàn)回歸分析，擬合獲取各被測(cè)香酸類(lèi)種質(zhì)試驗(yàn)植株的低溫半致死溫度LT50（LT50擬合計(jì)算公式=-Lna/b）。

2 結(jié)果與分析

2.112 份香酸類(lèi)柑橘種質(zhì)冬季葉片相對(duì)電導(dǎo)率比較

試驗(yàn)1中的12份香酸類(lèi)柑橘種質(zhì)葉片相對(duì)電導(dǎo)率結(jié)果如圖1所示，結(jié)果以電導(dǎo)率從大到小排列，被檢測(cè)的12份香酸類(lèi)柑橘種質(zhì)耐寒性強(qiáng)弱順序依次為：DD、Z＞FMNL、YN、XC＞BJ、YLK、XJ、KBS＞BGM、01-35＞XLM，各種質(zhì)之間達(dá)到顯著差異（p＜0.05）。其中XLM 相對(duì)電導(dǎo)率檢測(cè)值最高（93.63%），顯著高于其它11個(gè)品種，耐寒性最弱；Z和DD 的相對(duì)電導(dǎo)率最低，與其它品種也表現(xiàn)顯著差異，耐寒力最高。

2.24 個(gè)香酸類(lèi)種質(zhì)不同低溫條件下相對(duì)電導(dǎo)率低溫半致死溫度LT50擬合試驗(yàn)

香橙、01-35檸檬、YLK檸檬及BJ檸檬四份種質(zhì)不同低溫處理?xiàng)l件下的葉片相對(duì)電導(dǎo)率檢測(cè)平均值統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果分別如表1、表2所示，結(jié)合Excel 趨勢(shì)線(xiàn)回歸及Logistic方程數(shù)據(jù)處理，擬合分析各種質(zhì)低溫半致死溫度LT50理論值，結(jié)果分別如圖1至圖4所示。

表1結(jié)合圖2、圖3可擬合分析獲得01-35檸檬、香橙XC 的半致死溫度，預(yù)估值分別為-5.09℃和-9.28℃；同理，表2結(jié)合圖4、圖5可擬合分析獲香YLK檸檬、BJ檸檬的半致死溫度，預(yù)估值分別為-6.63℃和-8.04℃；四份香酸類(lèi)柑橘種質(zhì)的理論耐寒能力強(qiáng)弱表現(xiàn)為XC＞BJ＞YLK＞01-35。此結(jié)果與2016年春，浙江省柑橘凍害發(fā)生后田間種質(zhì)植株的耐寒表現(xiàn)力調(diào)查結(jié)果基本一致。

表1 香橙、01-35檸檬不同低溫條件下相對(duì)電導(dǎo)率低溫半致死溫度LT50擬合

表2 YLK、BJ 檸檬不同低溫條件下相對(duì)電導(dǎo)率低溫半致死溫度LT50擬合

圖201 -35檸檬利用logistic 方程擬合低溫半致死溫度LT50線(xiàn)性回歸散點(diǎn)圖

圖3 香橙XC利用logistic 方程擬合低溫半致死溫度LT50線(xiàn)性回歸散點(diǎn)圖

圖4 YLK檸檬利用logistic 方程擬合低溫半致死溫度LT50線(xiàn)性回歸散點(diǎn)圖

圖5 BJ檸檬利用logistic 方程擬合低溫半致死溫度LT50線(xiàn)性回歸散點(diǎn)圖

3 小結(jié)

當(dāng)?shù)蜏匕l(fā)生時(shí)，植物細(xì)胞膜透性增大，電解質(zhì)大量外滲，相對(duì)電導(dǎo)率數(shù)據(jù)可初步直觀地反映出植物細(xì)胞膜的受傷害程度及其耐寒能力強(qiáng)弱。本試驗(yàn)研究，初步明確十二份香酸類(lèi)柑橘種質(zhì)耐寒性強(qiáng)弱順序依次為:DD、Z＞FMNL、YN、XC＞BJ、YLK、XJ＞BGM、01-35＞XLM。

同時(shí)，通過(guò)低溫人工模擬凍害逆境進(jìn)行香酸類(lèi)柑橘種質(zhì)葉片相對(duì)電導(dǎo)率檢測(cè)，結(jié)合logistic方程、excel 趨勢(shì)線(xiàn)回歸數(shù)據(jù)分析，利用目標(biāo)種質(zhì)葉片電解質(zhì)滲出率隨低溫變化獲得溫度曲線(xiàn)拐點(diǎn)的方法，擬合求取不同目標(biāo)種質(zhì)的低溫半致死溫度LT50（Semi-lethal temperature）（把低溫曲線(xiàn)拐點(diǎn)作為低溫半致死溫度預(yù)估值）理論值，初步實(shí)現(xiàn)了香酸類(lèi)柑橘種質(zhì)抗寒能力的數(shù)量表達(dá)，為香酸類(lèi)種質(zhì)資源抗寒特性的深入了解及今后的胚搶救育種材料后代耐寒性能的早期篩選提供了一條有效的途徑。